Instituto Politécnico Nacional Escuela Nacional de Ciencias Biológicas Práctica α-amilasa pancreática y γ glutamil transpeptidasa Profesor: Miguel Ángel Antonio Ibáñez Hernández Alumno: Ruíz Valdez Saúl AQM1 Fecha de entrega: 03/06/2021. Introducción La enzima γ-glutamil transferasa (GGT), interviene en la transferencia del residuo γ-glutamil de del glutatión (γ-glutamil-cysteinil-glicina) a aminoácidos, para la regulación de concentraciones de glutatión tisular y en transporte de aminoácidos por membranas celulares. Su actividad se encuentra sobre todo en riñón, cerebro, próstata, páncreas e hígado. En el hígado, la GGT se localiza en los canalículos biliares. Por lo que esta enzima GGT se ve aumentada en casi todos los trastornos hepatobiliares. Se observa las concentraciones mas altas en construcción de la vía biliar. La amilasa cataliza la degradación del almidón y glucógeno. Hidroliza los enlaces α-1,4. Las células acinares del páncreas y glándulas salivales son fuente de la amilasa. hay concentraciones menores en musculo esquelético, intestino delgado y trompas de Falopio. por su tamaño pequeño se filtra regularmente en orina. La presencia de amilasa en suero y orina tiene relevancia en el diagnostico de pancreatitis aguda. Otros trastornos distintos como insuficiencia renal, por lo que no es específica a páncreas. Objetivos El alumno cuantificará la α -amilasa presente en una muestra problema. El alumno determinará la actividad de la γGT en una muestra problema por un método de monitoreo continuo. Fundamento La α -amilasa se determina utilizando como sustrato un oligo sacarido conformado por siete monómeros de glucosa unidos por enlaces α-1,4, con un grupo p-nitrofenil unido en el elnlace α acetal. Este p-nitrofenil-maltoheptosido esta bloqueado con bennzilidina, de modo que la α -amilasa no hidrolizara el ultimo enlace entre el p-nitrofenil y el extremo reductor, dejando libre el p-nitrofenil con dos a cinco glucosas unidas. ELp-nitrofenil con una enzima glucosamina o α-glucosidasa, catalizara la hidrolisis del enlace entre el extremo reductor de la glucosa unido al p-nitrofenil, lo que dará producción de color y puede determinarse la absorbancia a 400-420nm. En el método colorimétrico de la γ glutamil transferasa, se usa un sustrato sintético como el L-γ-glutamil-3-carboxi-4-nitroanilida, el cual en presencia de glicilglicina y con la γ-GT de la muestra, se cataliza la transferencia del γ-glutamil a la glicilglicina, dejando como productos la γ-glutamil-glicilglicina y la p-nitroanilida que da la formación de color, del cual puede leerse la absorbancia a 405nm y esta será proporcional a la enzima γ-GT en la muestra. Resultados Tabla 1. Resultados de absorbancia de GGT. 37ºC M1 M2 ΔA ΔA 1’ 0.31 0.180 2’ 0.310 0.178 3’ 0.312 0.175 ACTIVIDAD ΔA X F 359.75 205.73 F=1158 Tabla 2. Resultados de absorbancia de α-amilasa. 37ºC ΔA ΔA ΔA ΔA ΔA C2 C3 M1 M2 (82-110 UI/L) (238-320 UI/L) ORINA/24 HRS M2 1’ 0.019 0.067 0.028 0.066 0.088 2’ 0.022 0.065 0.030 0.070 0.099 3’ 0.025 0.066 0.026 0.073 0.099 FACTOR= 4712 103.664 310.9 131.9 328.3 449.2 Discusión En α-amilasa, los controles estas dentro de los rangos que indica el fabricante, por lo que se da validez a la corrida analítica. Los resultados de GGT aumentados se pueden deber a alteraciones biliares y hepáticas, se le considera un marcador de colestasis, que es más sensible que fosfatasa alcalina, de forma temprana su valor se puede elevar hasta 30 veces. Aumenta en pacientes con un consumo habitual de alcohol o que esta llevando un tratamiento con antiepilépticos (fenitoína o fenobarbital), también se ha visto elevada en otras enfermedades como diabetes mellitus, en infarto al miocardio, síndrome metabólico y en casos de pancreatitis. En algunos casos la determinación de GGT se utiliza como un indicador de abstinencia de alcohol en pacientes, por lo que en ese caso, podría interpretarse que estos pacientes han seguido con su consumo de alcohol. Los resultados de α-amilasa se observa que en la muestra 1 el valor de esta enzima se halla dentro de los valores de referencia, así que no se asocia a una patología relacionada al páncreas, en la muestra 2 se observa que el valor de α-amilasa sérica esta elevada por encima de los valores de referencia, las principales causas de la hiperamilasemia son asociadas a alteraciones pancreáticas como pancreatitis aguda. En este caso el valor se encuentra ligeramente elevado, lo que podría indicar que ya ha pasado un tiempo desde el inicio de síntomas, ya que dentro de las primeras 6-8 horas del inicio de síntomas relacionados a la pancreatitis aguda, esta enzima se eleva a mas de tres veces el límite superior de los valores de referencia y esta decrece hasta los 3 a 5 días. O puede ser que la patología sea diferente, ya que valores de la actividad de α-amilasa en sangre que sean menores a 500UI/L pueden deberse a parotiditis, alteraciones gastrointestinales como una ulcera péptica, gastritis, apendicitis aguda, peritonitis, también en personas que abusen de opiáceos, en caso de intoxicación aguda de alcohol y enfermedades renales. Se ha observado que la isoenzima S se puede asociar a inmunoglobulonas sobre todo A o G formando complejos de alto peso molecular, lo que se denomina macroamilasemia, elevando su actividad en suero por encima de los valores de referencia, pero sin que haya una patología asociada, y debido a su alto peso molecular, no se puede filtrar en el glomérulo por lo que no hay elevación de la α-amilasa en orina, como es el caso de la muestra 2 donde hay una ligera elevación de la actividad en suero, sin incremento en orina. Aunque estos casos asociados a macroamilasemia representan solo un 5% de las causas de elevación de la actividad de α-amilasa sérica. Conclusiones La amilasa y GGT aunque son especificas y se relaciona al páncreas, deben acompañarse de otras pruebas para dar un diagnóstico certero. La enzima GGT puede elevarse en enfermedades hepáticas, pancreáticas o por consumo de alcohol. Bibliografia. Bishop. M.L. Química clínica. Principios, procedimientos y correlaciones. 5ª Edición. McGraw Hill. México. pp. 255-257 ¿Cómo evaluar la elevación de las enzimas hepáticas en personas aparentemente sanas? Su importancia para el médico general. Recuperado de: http://www.scielo.org.pe/pdf/rgp/v33n3/a11v33n3.pdf Pregunta extra Pancreatitis aguda. 01082010000900010 https://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1130-