CiB Staining Kits (2015)
Acid Fast Stain
Robert Koch (1882) reported the discovery of the tubercle bacilli and described the appearance of the bacteria resulting from a
complex staining procedure. There are different sophisticated staining methods. The present method provides a reliable and
effective way to demonstrate the acid-fast bacteria. In addition to educational purposes, the most important clinical application of
the staining kit is to detect Mycobacterium tuberculosis in sputum samples to confirm or rule out a diagnosis of tuberculosis in
patient; and thereafter the staining procedure is performed on samples to demonstrate the characteristic of acid fastness in certain
bacteria and the cysts of Cryptosporidium and Isospora.
‫ روش های رنگ آمیزی ماهرانۀ مختلفی وجود‬.‫ کخ با سیل سل را گزارش کرد و روش رنگ آمیزی پیچیده ای را برای قابل رؤیت کردن این باکتری ها شرح داد‬1882 ‫در سال‬
‫ مهمترین کاربرد بالینی این کیت رنگ‬،‫ افزون بر کاربردهای آموزشی‬.‫ روش حاضر شیوۀ قابل اطمینان و مؤثری را برای رنگ آمیزی باکتری های اسید فست عرضه می کند‬.‫دارند‬
‫ و‬Cryptosporidium ‫ در نمونه های خلط و پس از آن تشخیص برخی باکتری های دیگر و تشخیص کیست های‬Mycobacterium tuberculosis ‫ تشخیص باکتری‬،‫آمیزی‬
.‫ است‬Isospora
Albert Stain
Albert stain is primarily done to identify Corynebacterium diphtheria and next to characterize polyphosphate granules in different
bacteria. Body of the cell appears green and metachromatic granules appear blue black. Albert stain is basically made up of two stains
that is Toluidine blue ’O’ and Malachite green both of which are basic dyes with high affinity for acidic components like cytoplasm.
On adding Albert’s iodine, granules appear dark blue in color.
‫ جسم سلول سبز و دانه های‬.‫رنگ آمیزی آلبرت نخست برای تشخیص کورینه باکتریوم دیفتریا و سپس برای مشخص کردن گرانول های پلی فسفات در سایر باکتری ها کاربرد دارد‬
.‫ رنگ آلبرت متشکل از دو رنگ تولوئیدین آبی و ماالکیت سبز است که رنگ های بازی با تمایل زیاد به اجزای اسیدی مانند سیتوپالسم دارند‬.‫متاکروماتیک آبی سیاه دیده می شوند‬
.‫ گرانول ها به رنگ آبی تیره درمی آید‬،‫با افزودن محلول ید‬
Endospore Stain
Endospores were primarily observed and reported by Perty, 1852; Pasteur, 1869; Koch, 1876; and Cohn, 1872. Dorner’s method (1922) for staining endospores was
modified by Shaeffer and Fulton (1933) to make present spore staining method. Bacterial endospores are dormant form of life
formed within the vegetative cells. In bacteria, the endospores are dehydrated light scattering cells with especial multilayer
envelopes and serve as a protective structure for survival of the organisms under extreme conditions; they do not generally have a
role in reproduction. Endospores are sometimes visible within vegetative cells and out of them as free spores, when the endospore
bearing cells disintegrated (went under lysis). The endospores staining kit can be used for staining of bacteriql endospores, but also it
can be used for staining of sexual spores i.e. ascospores and basidiospores in fungi.
‫) اصالح شد و‬1933(0 ‫ بعدها توسط شیفر و فالتون‬،‫ روشی که دورنر برای رنگ آمیزی آندوسپور ابداع کرد‬.‫ کخ و کوهن مشاهده شد‬،‫ پاستور‬،‫آندوسپور نخستین بار توسط پرتی‬
‫ انکسار دهندۀ نور با پوشش های‬،‫ آندوسپور سلولی کم آب‬،‫ در باکتری ها‬.‫ آندوسپور باکتری ها اشکال نهفته حیات است که درون سلول رویشی شکل می گیرد‬. ‫هنوز کاربرد دارد‬
‫ آندوسپورها در درون سلول یا رها شده و آزاد (پس از تجزیۀ‬،‫ گاهی بدون رنگ آمیزی اختصاصی‬.‫ بطور کلی آندوسپورها نقشی در تولید مثل ندارند‬.‫چند الیۀ ویژه است که بقای گونۀ خود را در شرایط دشوار حفظ می کند‬
.‫ بلکه برای رنگ آمیزی اسپورهای تولید مثل جنسی قارچ ها یعنی آسکوسپور و بازیدیوسپور می توان بکار برد‬،‫ کیت رنگ آمیزی آندوسپور را نه تنها برای رنگ آمیزی باکتری های اسپوردار‬.‫سلول مادر) قابل مشاهده اند‬
Giemsa
Microscopic examination of the blood film is one of the world’s most widely and frequently used tests. Giemsa stain is used to differentiate nuclear and/or cytoplasmic
morphology of platelets, RBCs, WBCs, and parasites. Traditionl Geimsa stain formula and related staining procedure were developed in 1902 and then modified several
times. The stain must be diluted for use with water buffered to pH 6.8 or 7.0 to 7.2, depending on the specific technique used.
Either should be tested for proper staining reaction before use. The stock is stable for years, but it must be protected from
moisture because the staining reaction is oxidative. Therefore, the oxygen in water will initiate the reaction and ruin the stock
stain. The aqueous working dilution of stain is good only for 1 day.
‫ رنگ‬.‫ ارائه شد و سپس بارها اصالح شد‬1902 ‫ روش قدیمی رنگ آمیزی گیمسا در‬.‫بررسی میکروسکوپی الیۀ نازک خون از شایعترین آزمایش ها در سراسر جهان است‬
‫ بسته به تکنیک‬.‫ گلبول های قرمز و سفید و نیز انگل های خونی بکار می رود‬،‫ پالکت ها‬،‫گیمسا برای متمایز کردن ریخت شناختی هسته و سیتوپالسم سلول های خونی‬
‫ برای رنگ آمیزی دقیق باید رنگ را قبل از انجام آزمون با نمونه‬.‫ رقیق شود‬7/2 ‫ یا‬7/0 ، 6/8 pH ‫ رنگ ذخیره باید قبل از مصرف در محلول بافری با‬،‫مورد نظر در رنگ آمیزی‬
‫ محلول رنگ‬.‫ واکنش ها را آغاز کرده و رنگ ذخیره را فاسد می کند‬،‫ بنابراین وجود اکسیژن در آب‬.‫ ولی باید دور از رطو بت نگهداری شود زیرا واکنش رنگ اکسیداتیو است‬،‫ رنگ ذخیره برای سالها پایدار است‬.‫شاهد تست کرد‬
.‫ بازسازی شده در بافر برای یک روز قابل استفاده است‬،‫آمادۀ مصرف‬
Gram Stain and KOH Test
The Gram stain was first used by Hans Christian Gram (1884). Gram-positive cells have a thick highly cross-linked and multi-layered peptidoglycan layer which is
dehydrated following alcoholic treatment and traps the blue to purple CVI complex stain within the cell. Gram-negative cells has a 2-3 layered thin peptidoglycan
which becomes leaky following alcoholic treatment and because of dissolving lipid outer membrane losses the first dark stain and
shows red to pink color. The Gram stain is fundamental to the phenotypic characterization of bacteria. The staining procedure
differentiates organisms of the domain bacteria according to cell wall structure. Although the staining procedure is the first
choice, gram-positive cells can be discriminated from gram-negative cells by other methods without need to microscopic
examination. KOH test is one the most reliable and quick methods among the gram reaction tests.
‫ بدنبال تیمار‬،‫ باکتری های گرم مثبت که دیواره ضخیم چند الیه با پیوندهای تقاطعی دارند‬.‫ بکار برده شد‬1884 ‫رنگ آمیزی گرم نخستین بار توسط هانس کریستین گرم در‬
‫ الیه دارند که بدنبال تیمار‬2-3 ‫ باکتری های گرم منفی پپتیدوگلیکان ظریف‬.‫کریستال ویوله را در خود بدام می اندازند‬-‫الکلی آبگیری شده و کمپلکس رنگ آبی تا بنفش ید‬
‫ رنگ آمیزی گرم اساس شناسایی فنوتیپی باکتری‬.‫الکلی نشتی داده و با حل شدن غشای بیرونی رنگ تیره را از دست می دهند و رنگ صورتی تا قرمز را نشان می دهند‬
‫ اگرچه ر وش رنگ آمیزی گرم انتخاب اول است ولی روش های دیگری نیز وجود دارد که به مشاهده میکروسکوپی نیازمند نیست و‬.‫ این روش رنگ آمیزی باکتری ها را بر اساس ساختار دیواره سلولی متمایز می کند‬.‫هاست‬
.‫ آزمون پتاس یکی از سریعترین و قابل اعتمادترین این روش ها است‬.‫واکنش گرم باکتری ها را تأیید می کند‬
1
CiB Staining Kits (2015)
Inclusion Body Stain
Sudan black dye solution differentially stains hydrophobic granules and inclusions. These dark colored intracellular bodies can be
microscopically observed within a light red matrix of the cell structure which is stained by Safranin. Using appropriate solvents helps
to discriminate fat bodies from other inclusions. Xylene, for example, dissolves fat bodies and facilitates identification of natural
plastics. PHAs are not dissolved in xylene.
‫ این اجسام درون سلولی تیره رنگ را می توان در زیر میکروسکوپ در زمینۀ ساختار‬.‫محلول رنگ سودان سیاه بطور افتراقی گرانول ها و اینکلوژن های آبگریز را رنگ آمیزی می کند‬
.‫ استفاده از حالل های مناسب متمایز کردن اجسام چربی را از دیگر ذرات درون سلولی امکان پذیر می کند‬.‫ قرمز روشن رنگ آمیزی شده است‬،‫سلولی مشاهده کرد که با سافرانین‬
.‫ انواع پلی هیدروکسی آلکانوآت در زایلن حل نمی شود‬.‫مانند زایلن که چربی را حل می کند و تشخیص ذرات چربی از پالستیک طبیعی را امکان پذیر می نماید‬
LactoPhenol Cotton Blue Stain
The lactophenol cotton blue (LPCB) wet mount preparation is the most widely used method of staining and observing fungi
and is simple to prepare. The preparation has three components: phenol, which will kill any live organisms; lactic acid which
preserves fungal structures, and cotton blue which stains the chitin in the fungal cell walls. LPCB is useful stain for detection
of Cyclospora and Isospora oocysts in direct wet mounts of stool. LPCB stained these parasites blue, and differentiated their
internal structures clearly, thereby facilitating detection and accurate identification of these parasites.
.‫ این رنگ سه جزء دارد‬.‫ ) بسیار ساده است و بطور گسترده برای رنگ آمیزی و مشاهدۀ قارچ ها بکار می رود‬LPCB( ‫آماده سازی قطره مرطوب با رنگ الکتوفنل کاتن بلو‬
‫ این رنگ برای تشخیص‬.‫ اسید الکتیک ساختار سلولی قارچ را تثبیت می کند و کاتن بلو کیتین دیواره سلولی را رنگ آمیزی می کند‬،‫فنل میکروارگانیسم ها را می کشد‬
.‫تخم انگل ها و تمایز ساختارهای درون سلولی آنها نیز بکار می آید و تشخیص برخی از انگل ها را امکان پذیر می کند‬
Methylene Blue Dairy Stain
Methylene blue Milk somatic cell stain is frequently used for staining of milk samples suspected to be contaminated to
infectious bacteria in different pathogenic cases such as mastitis and Brucellosis. In addition to bacterial cells, somatic cells of
animal including epithelial cells, macrophages and white blood cells are stained. The staining procedure is simple one run
procedure. Xylene in the dye mixture dissolves fat particles in milk and makes staining of hydrophilic cell structures possible.
‫رنگ آمیزی متیلن بلو برای سل ول های پیکری در شیر کاربرد فراوانی در مشاهدۀ شیرهای آلوده به باکتری های عفونی در عفونت های مختلف مانند التهاب پستان گاو و‬
‫ روش سادۀ رنگ‬.‫ ماکروفاژها و کلبول های سفید رنگ آمیزی می شوند‬،‫ سلول های پیکری جانور مانند سلول های پوششی‬،‫ عالوه بر سلول های باکتریایی‬.‫بروسلوز دارد‬
.‫ زایلن در ترکیب رنگ ذرلت چربی موجود در شیر را حل کرده و رنگ آمیزی بخش های آب دوست سلول را با رنگ امکان پذیر می کند‬.‫آمیزی یک مرحله ای است‬
Neisser Stain
Neisser staining procedure can be used for differential staining of Environmental samples containing different populations of
microorganisms such as papermills, refineries, sheaths, coatings, polysaccharides, microalgal mats, soil and water biofilms,
etc. This stain procedure is most useful in checking for filaments that are coiled deep within the floc. It is based on the dye
retention mechanism of basic material in the cell walls or granules of certain bacteria. Blue/gray cells (sometimes purple in
appearance) are considered positive and yellow/brown cells negative for this staining.
،‫ سطوح و پوشش ها‬،‫ پاالیشگاهها‬،‫این روش رنگ آمیزی برای رنگ آمیزی افتراقی جمعیت های میکروارگانیسم ها در نمونه های محیطی مختلف مانند فرآوری خمیر کاغذ‬
‫ این روش رنگ آمیزی به ویژه برای متمایز کردن باکتری های رشته ای در عمق‬.‫ نازک الیه های آبی و خاکی و ضخیم الیه های ریزجلبکی بکار می رود‬،‫پلی ساکاریدها‬
‫ رنگ آبی خاکستری و گاه بنفش مثبت (نایسر مثبت) و سلول های زرد‬.‫ این رنگ آمیزی مبتنی بر جذب تأخیری رنگ در دیواره سلولی و گرانول ها است‬.‫فالک مفید است‬
.‫مایل به قهوه ای منفی (نایسر منفی) تلقی می شوند‬
Rose Bengal Stain
Aqueous alcoholic solution of Rose Bengal is simply used for staining of fungal structures. Various tissues in fruiting body of
macroscopic fungi absorb different concentrations of dye and basidiospores, basidia, ascospores, tricogynes and other vegetative
and generative hyphae can be differentiated. Rose Bengal dye solution is also used to stain and designate endophytic fungi,
especially those mycelial fungi which have not developed fruiting bodies in their host. Phenicated Rose Bengal can be used for
staining of environmental samples such as soil. The dye penetrates organic structures and helps to differentiated vital cells (pink to
red) from dead organic residues (dark red to brown) and inorganic structures (no color to yellow).
‫ بافت های مختلف در اندام زادآوری قارچ های ماکروسکوپی با غلظت های متفاوت رنگ را جذب‬.‫الکلی رزبنگال براحتی برای رنگ آمیزی قارچ ها قابل استفاده است‬-‫محلول آبی‬
‫ محلول رنگ رز بنگال برای رنگ‬.‫ آسکوسپورها و هیف های تریکوجین و سایر هیف های رویشی و زایشی را می توان از یکدیگر متمایز نمود‬،‫ بازیدها‬،‫می کنند و بازیدیوسپورها‬
‫ محلول فنلی رزبنگال برای‬.‫ به ویژه در مورد قارچ های میسلیومی که اندام زادآوری در میزبانشان پدید نمی آورند‬،‫آمیزی و تشخیص قارچ های آندوفیت نیز بکار برده می شود‬
‫ رنگ در ساختارهای آلی نفوذ می کند و به تمایز سلول های زنده (به رنگ صورتی تا قرمز) از بقایای آلی (قرمز تیره‬.‫رنگ آمیزی نمونه های محیطی مانند خاک نیز کاربرد دارد‬
.‫تا قهوه ای) و ساختارهای معدنی (بی رنگ تا زرد) کمک می کند‬
2
‫کیت های رنگ آمیزی آموزشی در ظروف قطره چکانی ‪ 30‬و بطری ‪( 60‬راست) و حرفه ای در حجم ‪ 230‬میلی لیتری و به صرفه اقتصادی(چپ)‬
‫مزیت های مقایسه ای کیت های رنگ آمیزی میکروسکوپی‬
‫انجام آزمون های تأییدی اضافی مانند تست ‪ KOH‬برای واکنش گرم‬
‫•‬
‫انجام واکنش تکمیلی برای رنگ آمیزی‬
‫•‬
‫بسته بندی در ظروف شفاف برای امکان بررسی رسوب رنگ‬
‫•‬
‫صرفه جویی در مصرف رنگ با ظروف قطره چکانی همراه‬
‫•‬
‫پایدارسازی رنگ ها برای رنگ آمیزی بهتر و با دوام تر‬
‫•‬
‫استفاده از جعبه های مقاوم در بسته بندی‬
‫•‬
‫کنترل کیفی و تضمین کیفیت محصول‬
‫•‬
‫امکان سفارش از طریق تلفن‪ ،‬پیامک و سایت‬
‫•‬
‫تحویل به موقع و منظم‬
‫•‬
‫توضیح ساده و آسان روش رنگ آمیزی و نکات مهم آن‬
‫•‬
‫تعداد دفعات رنگ آمیزی بیشتر و مصرف رنگ کمتر‬
‫•‬
‫دسترسی به منابع و اطالعات پایه‪ ،‬برحسب درخواست‬
‫•‬
‫شرح اطالعات کیت فارسی و التین روی سایت‬
‫کیت رنگ آمیزی‬
‫گرم (‪)Gram‬‬
‫بسته بندی مناسب برای کیت های آموزشی و حرفه ای‬
‫ظروف قطره چکانی در کیت های آموزشی و حرفه ای صرفه جویی‬
‫در مصرف رنگ و کاهش آلودگی محیط زیست را ممکن می سازد‪.‬‬
‫کاربرد رنگ آمیزی‬
‫افتراق اساسی باکتری ها‬
‫گیمسا (‪)Giemsa‬‬
‫سلولهای خونی و پارازیتها‬
‫اسید فست (‪)Acid Fast‬‬
‫باکتری های اسیدفست (مایکوباکتریا)‬
‫آلبرت (‪)Albert‬‬
‫دانه های متاکروماتیک‬
‫آندوسپور (‪)Endospore‬‬
‫آندوسپور باکتری و اسپورجنسی قارچها‬
‫سودان بلک )‪(Sudan B‬‬
‫ذرات چربی و پلی استر‬
‫نیومن (‪)Newman‬‬
‫شیر و سلولهای سوماتیک (عفونت)‬
‫کاتن بلو الکتوفنل (‪)LPCB‬‬
‫گلیسروپتاس (‪)PG‬‬
‫انواع قارچ های گندرو‪ ،‬گیاهی و جانوری‬
‫مشاهده آنها در بافت های کراتینیزه‬
‫نایسر (‪) Neisser‬‬
‫جلبک‪ ،‬خزه‪ ،‬پروتیستا‪ ،‬آب و پساب‪ ،‬خاک‪ ،‬لجن‬
‫رزبنگال (‪) Rose Bengal‬‬
‫قارچ ها بویژه آندوفیت ها‬
‫قیمت تا مهر ‪1394‬‬
‫برای دریافت تخفیف تماس بگیرید‬
‫کیت حرفه ای‪ 350/000 :‬ریال‬
‫کیت آموزشی‪ 120/000 :‬ریال‬
‫‪3‬‬
Acid Fast Staining.
1.
Prepare air-dried, heat-fixed smear of cells.
2.
Drop the Acid Fast (A) on smear.
3.
Heat the slide (without boiling) for 5 min.
4.
Rinse the slide in tap water.
5.
Add decolorizing agent (B) until running change to pink
6.
Drop the counter stain Acid Fast (C) on smear for 30 s.
7.
Wash with tap water; dip dry.
8.
Examine the slide microscopically under the oil immersion.
Result: Acid-fast Mycobacteria will appear as dark-pink to red rods against a blue
background when examined microscopically.
Albert metachromatic Staining.
1.
Prepare air-dried, heat-fixed smear of cells.
2.
Stain with Albert A stain for 3-5 min.
3.
Rinse with water.
4.
Blot dry.
5.
Stain with Albert B for 1 min.
6.
Rinse with water
7.
Drain or blot to dry.
Result:Cytoplasm appears light green, granules blue-black.
Endospores Staining.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Air Prepare air-dried, heat-fixed smear of cells.
Cover with a square of blotting paper to fit the smear.
Saturate the paper with malachite green (A) for 5 min.
Steam the slide over a container of boiling water.
Wash the slide in tap water.
Counter-stain with safranin (B) for 30 s.
Wash with tap water; blot dry.
Examine the slide microscopically under oil immersion using 100X
objective.
Result: Endospores are bright green and vegetative cells are brownish red to
pink.
5.
6.
Rinse with water.
Observe drained and dried stained slide microscopically.
Result: Differential dying of bacteria, fungi and Protista in environmental samples
such as activated sludge, lichens, etc.
Methylene Blue (Milk Somatic Cell Staining).
1.
Add a sized drop (10 µl or more) of milk on one end of a slide using
sampler.
2.
Spread the milk as a monolayer thin smear using appropriate spreader.
3.
Air-dry the smear of milk.
4.
Use ventilated hood to carry out steps 4-6.
5.
Floodthe slide with methylene blue stain for 2 min.
6.
Drain off excess stain by resting edge of slide on absorbent paper.
7.
Drain and Dry thoroughly (Dip dry, air dry or use cool forced air).
8.
Examine the slide microscopically under oil immersion using 100X
objective.
Result: observe blue stained cells and report the number of bacteria and somatic
cells to indicate mastitis or other inflammatory diseases.
Lactophenol Cotton Blue Staining.
1.
To avoid inhaling hazardous materials carry out staining procedures using
ventilated hood, or an appropriate mask.
2.
Add one drop of the stain on a glass slide.
3.
Add one drop of liquid culture or transfer fungal mycelia from the growing
fungi on an agar plate.
4.
Put a cover slide on wet smear while avoiding from formation of air bubbles.
5.
Gently heat the slide to warm, but prevent from boiling or obvious
evaporation for 1 to 3 min.
6.
Mount the slide and examine it under microscope using 10 and 40 X
objective.
Result: The stain has a good penetration capacity. Mycelia and conidia are stained
from light to deep blue, depending on their aging.
Rose Bengal Staining.
1.
Giemsa (Blood staining).
Giemsa working solution: MixGiemsastock solution in supplimented phosphate buffer
solution. Store working solution at 8°C.
1.
Add a sized drop (10 µl or more) of blood on one end of a slideon one end of
a slide using sampler.
2.
Spread the blood as a monolayer using appropriate spreader.
3.
After air-drying, place the slide in methanol, 5-10 min.
4.
Stain in Giemsa working solution for 10 min
5.
Rinse thoroughly with phosphate buffer for 2×1 min
6.
Drain and dry slides and mount.
Result:
Nuclei: reddish-purple (blue)
Cytoplasm: reddish / orange / gray / light blue / light blue
Result in the staining of blood smears:
Nuclei of leukocytes / early stage of erythrocytes: reddish-purple (blue)
Cytoplasm of erythrocytes: pink
Cytoplasm of lymphocytes: light blue
Cytoplasm of monocytes: gray-blue
Eosinophilic granules: brick red to orange
Basophilic granules: dark purple
Neutrophil granules: violet ligh
Gram Differential Staining.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Prepare air-dried, heat-fixed smear of cells.
Flood 1 min with crystal violet stain.
Rinse with water.
Flood slide with the mordant: Gram's iodine (1 min).
Rinse with water.
Add decolorizing agent drop by drop until running stainless
Flood slide with counter-stain, safranin; Wait 30 s.
Rinse with water.
Observeair-driedstainedslidesmicroscopically.
Result: At the completion of the Gram Stain, gram-negative bacteriawill stain
pink/red and gram-positive bacteria will stain blue/purple.
Gram Reaction (KOH Test).
1.
Add onetinydrop of 3% KOH solution on a glass slide.
2.
Using a sterile loop, takealoopful of colony.
3.
Constantlystir over an area about 1.5 cm in diameter just for 3 s.
4.
Raise the loop about 1 cm from the slide andobserve stringiness.
Result: gram negative bacteria (but not gram positive)markedlyshow viscid or
jellified appearance.
Neisser Deferential Staining.
1.
2.
3.
4.
4
Prepare air-dried, heat-fixed smear of cells.
Flood 30 s with one drop of Neisser(A) stain.
Rinse with water.
Flood slide with counter-stain, Neisser (B) for 1 min.
To avoid inhaling hazardous materials carry out staining procedures using
ventilated hood, or an appropriate mask.
2.
Add one drop of liquid culture or transfer a mass of cellsinto one drop of
water. Smears can be prepared by suspending of environmental samples
such as lichen, soil, mud, water and wastewater is similarly possible.
3.
Air dry the smear and heat fix using flame or steam.
4.
Stain the smear for 1 to 3 min using drops of Rose Bengal stain
5.
Gently heat the slide to warm, but prevent from boiling or obvious
evaporation for 1 to 3 min.
6.
Wash with tap water; dip dry.
7.
Examine the slide microscopically under the oil immersion.
8.
Mount the slide and examine it under microscope using 10 and 40 X
objective.
Result: Rose Bengal is able to differentiate living cells from dead ones and minerals.
It can successfully be used to stain endophytic fungi and other eukaryotic and
prokaryotic cells.
Sudan Inclusion Stain (Fat body and Polyesters).
1.
Prepare two air-dried, heat-fixed separate smears of cells on a slide.
2.
Drop the Sudan (A)on smears for 10 min.
3.
Rinse the slide in tap water and blot dry.
4.
For 1 min, add xylene (B) just to the smear No. 1, but not to smear No. 2.
5.
Drop the counter stain (C) on both smearsandstain for 20 s.
6.
Wash with tap water.
7.
Examine the slide microscopically under the oil immersion.
Result: inclusions are observed black and bacterial body looks red. If the smear No.
1 positive indicates polyester inclusions, and if the smears
Glycerol Potash Reagent.
1.
2.
Use a clean dry glass slide.
Prepare the specimens as samples gathered on scotch tape, or sections
prepared from paraffin blocks or freeze etching.
3.
Place the specimens in a drop of Glycerol- KOH and wait for 15 min.
4.
The reagent will dissolve at a greater rate than fungi because fungi have
chitinous cell walls. The clearing effect throughout the clinical specimen can
be accelerated by gently heating the KOH preparation.
5.
Examine slides with reduced light(narrow the iris diaphragm) and examine
negative smears on several consecutive days.
6.
In unstained preparations (KOH without ink or specimen with no reagent),
the fungal structures may be enhanced by using a phase-contrast microscope.
Result: KOH may be used to examine hair, nails, skin scrapings, fluids, exudates, or
biopsies. The fungal structures such as hyphae, large yeasts,spherules, and
sporangia may be distinguished.
Staining kits have been supplemented with a
syringe to help putting tiny water drops
forbetter smear preparation.
Keep in touch with us through our websiteto
get further information on other products,
detailed instructions and images,etc.
www.cibbiotech.com