N.Gonorrhoae بنام خداوند بخشندهٌ مهربان Neisseria gonorrhoeae Department of Medical Microbiology N.Gonorrhoae سومین بیماری مقاربتی( )STDدر آمریکا و در ایران ؟ فیزیولوژی – مورفولوژی. سلولهای باکتری نشبتآ کوجک µ 2-1و بشکل دیپلوکوکسی. کلنیهای آن برروی محیطهای کشت شکالت آگار،تایرمارتین و مارتین لویس آگار در ابتدا شفاف،کوچک و حدود1میلیمتراست. اسیدهای چرب و یونهای فلزی ازرشد باکتری ممانعت می کنند. N.Gonorrhoae ادام ٌه فیزیولوژی باکتری بشدت به خشکی،نوروبی غذائی (خارج از بدن)حساس بوده،برای رشددرمحیط کشت نیاز به آتمسفری از co2%5دارد تیپ کلنیهای باکتری از T5 – T1می باشد. تیپهای T1و T2ویروالن بوده بقیه غیر ویروالن هستند. برای تعیین هویت باکتری بایستی مورفولوژی کلنی ها در محیط کشت-داشتن سیتوکروم اکسیدازوتجزی ٌه اکسیداتیو گلوکوزو... بررسی الکتروفورتیک آنزیمهای هگزوکیناز N.Gonorrhoae ساختــار سلولی اندوتوکسین آن شباهت زیادی به اندوتوکسین مننگوکک دارد. حاوی lipidAو coreپلی ساکاریدی است ولی o side chainندارند. در اینجا نیز همانند مننگوکک اندوتوکسین باکتری به فضای(آب) میان بافتی ترشح( )releaseمی شود. LOSباکتری می تواند دراتصال به سطح سلولهای اپی تلیال با پیلی همکاری کند. N.Gonorrhoae ادام ٌه ساختــار سلولی (Pilusجمع )piliباکتری اتصال اصلی گونوکک به سلولهای اپی تلیال را تآمین ) )columnarEpt.cell not Squamous cellsمی کند. باید یادآور شد که باکتری می تواند در سلولهای مربوط به گلو و رکتوم نیز کلونیزه شود. این اتصال مي بایست مستحكم شده و با سطح سلولهاي اپیتلیال سازگار شود. بخش N-Terminalپروتئین pilinثابت و محكم()conserveوبخش C-Terminalآن متغیر()Variableاست. باكتریها براساس داشتن و نداشتن piliمتحمل phase variationمي شوند . N.Gonorrhoae تغییرات فازیك Pili درپاساژهاي متعدد از بین مي رود p- ---p+:ویا fim- ---- fim+ اما در تغییرات آنتي ژنیك ژن كد كنندهٌ پروتئین PilEكه پروتئین اصلي پیلي است،دستخوش تغییراتي در سكانس خود مي شود .وبا ژن PilSایجاد نوتركیبي مي كند. گفته مي شود تا 1000واریانت ممكن است بوجود بیاید. تغییرات در بیان شدن پیلي در طي عفونت به این ترتیب است كه: در پیشابراه مردان 17.5كیلو دالتون است. در مجراي ادراري اولین زن سالمي كه مرد آلوده با او تماس مي گیرد19-18.5 كیلودالتون ،ودر Cervixعدد وزن ملكولي پیلي به 17كیلودالتون تقلیل مي یابد. در Cervixدومین زن تماس گرفته شده این عدد به 18.3كیلو دالتون خواهد رسید. S= Silent E= Effective N.Gonorrhoae ادام ٌه پیلي %20پیلي دستخوش تغییر مي گردد. بدلیل تغییرات در بخش پیلي است كه تا بحال واكسن مطمئني وجود ندارد. بعضي از محققین معتقدندپیلي فقط جهت اتصال نیست بلكه باعث نوعي حركت براي باكتري مي شود. twitching motility: PilAبخش اصلي پیلین است،بخش انتهائي را PilCتشكیل مي دهد. PilQحالت ترشح شونده داردتا PilAاز OMبگذرد. PilTنقش نوعي ATPaseرا بازي مي كند(.)Retraction motor نقش موتور انقباضي(،)PilTمنقبض ،منبسط كردن PilAاست Speculative model of type IV pili. The major pilin (PilA) is the structural subunit. The tip adhesin in Neisseria is PilC (labelled here as C1/Y1). NB Anchored in the Inner Membrane PilQ a secretin for PilA to cross the OM & is a pore protein PilT an ATPase Retraction ‘motor’ PilA collapses into the OM & IM (retraction) N.Gonorrhoae پروتئین هاي OM پروتئین Iیا ، porIپروتئین اصلي( OM )Majorاست كه به عنوان یك porinعمل كرده،اجازه مي دهد بعضي مواد diffuseشوندوبراي زنده ماندن داخل فاگوسیتها ضروري است. پروتئین IIیا ) ) opaیك minorپروتئین است،كه در اتصال به PMNs شركت كرده در endocytosisدخالت مي كند:این پروتئین نیز دستخوش تغییرات مي شود. پروتئین )rmp(IIIدر تجمع با porIبراي باكتري poreها را مي سازند. گفته شده است این پروتئین باعث بلوكه شدن اثر باكتریسیدال سرم(توسط )IgGمي شود ،یعني نوعي عمل Blocking Abانجام مي دهد. N.Gonorrhoae باقیماندهٌ ویروالنس فاكتورها یكي دیگر از ویروالنس فاكتورهاي مهم باكتري IgA1است كه باعث شكسته شدنIgA مخاطي مي شود. توانا ئي جذب آهن سرم (توسط سیدروفورخاصي كه باكتري در جریان خون میسازد). پاتوژنز اتصال با piliو opaو حمل ٌه باكتري شبیه نمائي با ساختارهاي میزبان ( ) Molecular Mimicry آزاد شدن ملكولها و تركیبات سیستم ایمني(سلولي و هومورال)وآزاد شدن membrane blebs:enhance endotoxic mediated toxicity and protect . replicating bacteria by binding protein-directed Ab. ممانعت از فعالیت PMNsوفعال شدن كمپلمان از طریق آلترناتیو ایجاد انفالماسیون،فعال شدن TNFها و دیگر اینترلوكین ها Inflammationنهائي وایجاد عالئم. Neisseria gonorrhoeae Spread and multiplication Once attach to non-ciliated cells, multiply rapidly and spread up urethra (male) or through cervix (female) Are not motile; aided external mechanisms Eddy current in mucus Attached to spermatozoa Protected from IgA by IgA protease Neisseria gonorrhoeae Spread and multiplication Invasion Once attach, microvilli extend and embrace organisms Internalized by endocytosis into “nonprofessional phagocytes” and transported in cell by phagocytic vesicles Neisseria gonorrhoeae Spread and multiplication Invasion After internalization, transported to base of non- ciliated cells Vacuoles fuse with basement membrane and discharge contents into subepithelial connective tissue Either cause local damage or enter blood vessels and cause disseminated disease Neisseria gonorrhoeae Survival in bloodstream Most strains killed by antibodies Target surface proteins and LOS Resistant strains cause disseminated disease Distinguising characteristics More sensitive to penicillin Have specific nutritional requirements Attachment sialic acid to CHO portion LOS; blocks complement of activation and binding to other surface proteins Neisseria gonorrhoeae Pathogenesis Process Introduced into vagina or urethral mucosa of penis—attach to surface of epithelial cells and multiply Attach to unidentified specific receptors by pili (also prevent phagocytosis) Protein II—once cells brought close enough by pili, adherence to cell occurs (also called OPA) Neisseria gonorrhoeae Damage Ciliated cells—done by endotoxin and fragments of murein (muramyl monomers, same as Bordetella pertussis) Studied most in fallopian organ culture Ciliary mechanism important for transporting egg from ovary to uterus and for clearing bacteria from mucosal surface After damage, fallopian tube susceptible to bacteria from vaginal flora that ascend through the cervix and uterus Neisseria gonorrhoeae Damage Submucosal connective tissue, due to inflammatory response Male urethra—leads to local symptoms (pain on urination and pus discharge) Other diseases cause by other pathogens have some of the same symptoms Pain is more intense and urethral discharge is more copious, thicker, and greenish-yellow Neisseria gonorrhoeae Outcome of infection Males—symptoms usually subside in several weeks, even without treatment Repeated infections, in untreated, can lead to scarring and stricture of urethra Relatively unusual, because males usually seek treatment Neisseria gonorrhoeae Outcome of infection Females—local urogenital infection frequently asymptomatic Complications yield symptoms Sequellae of fallopian tube damage Ectopic pregnancy, recurrent PID by other organisms, chronic pelvic pain, and infertility due to blockage or damage to tubes Can lead to death of woman and her unborn child Neisseria gonorrhoeae Prompt treatment for either gender decreases chances of disseminated disease Epidemiology: sexual transmission Males—20% after intercourse Females—50% after intercourse Neisseria gonorrhoeae Diagnosis Gram— intracellular diplococci in vaginal, cervical, or urethral specimens is suggestive; start antibiotic therapy Important to culture for confirmation Biochemical tests Oxidase+ Oxidize glucose, not maltose nor sucrose Neisseria gonorrhoeae Treatment Used to be massive doses of penicillin Now: If -lactamase resistant (plasmid; same as Haemophilus influenzae); cephalosporin, cefriaxone-IM Resistance to penicillin, tetracycline, aminoglycosides (chromosomal; change in cell surface)—susceptibility test Single dose oral therapy Neisseria gonorrhoeae Treatment Single dose oral therapy: ciprofloxacin; cifixime Resistance increasing If complicated by Chlamydia: doxycycline; azithromycin Studying Disease and Development of Vaccine Phase variation: Expression of Ag Antigenic variation: Expression of different copies High frequency processes