Medios de Cultivo y Aislamiento de
Microorganismos
BIT-517
Prof. Manuel Pérez Cuevas
mperez@isa.edu.do
829-448-2479
Cultivo de microorganismos
• Para el estudio de las
microorganismos hay que
cultivarlos.
• Cultivar microorganismos es
proporcionarles las condiciones
adecuadas para su crecimiento y
multiplicación.
• El objetivo es obtener cultivo
puros (colonia que se obtiene de
una sola célula o espora).
• Los microorganismos requieren:
• Nutrientes (agua, carbono, nitrógeno, fósforo,
potasio, azufre, calcio, otros.
• Condiciones ambientales (luz, temperatura,
humedad, pH, otros).
Cultivo de
microorganismos
• Hongos crecen a pH de 4.5 a 9. y
temperatura de 27 grados Celsius.
• Bacterias crecen a pH de 6.5 – 7.5 y
temperatura de 37 grados Celsius.
¿Que es un medio de Cultivo?
• Es una solución liquida, semisólida o
solida de aspecto gelatinoso que contiene
los nutrientes básicos para el crecimiento
y multiplicación de los microorganismos.
Nutrientes en Medios de Cultivo
Agua
Fuente de
Carbono
Fuente de
Nitrógeno
Sales
Minerales
Fundamental en la solubilización, transporte e
hidrólisis de nutrientes.
Constituyente más abundante de las bacterias.
Esencial en la producción de moléculas (grasas,
carbohidratos, proteínas y ácidos nucleicos).
Fuentes inorgánicas (CO2) y orgánicas (Azúcares, alcohol).
Numerosas fuentes: orgánicas (hidrolizados de
proteínas, peptonas) e inorgánicas (nitratos).
Síntesis de proteínas.
Fosfato, azufre (sulfato), magnesio o calcio
Evolución de los Medios de Cultivo
Antes de Leewenhoek se observó en pan de
comunión una sustancia parecida a la sangre.
En 1817 un farmacéutico italiano (Bartholomeo
Bizio) confirmó que se trataba de la bacterias
Serratia mercescens.
Evolución de los Medios de Cultivo
En 1860, Pasteur desarrolló un medio de cultivo a
base de "sopa de levadura", cenizas, azúcar y sales
de amonio.
El propósito era crear un medio de fermentación para
demostrar que cada fermentación estaba asociada al
desarrollo de un microorganismo particular.
Evolución de los Medios de Cultivo
Koch uso rodajas de patata como soporte nutritivo sólido.
Usó de caldo de carne líquido, diseñado por Loeffler.
En 1881 le añadió gelatina, logrando un medio sólido
transparente.
En 1882 el médico alemán Walter Hesse introduce el
agar-agar (polisacárido extraído de algas rojas).
En 1887, Petri, colaborador de R. Koch, comienza a
utilizar placas de cristal planas, que se llaman desde
entonces placas de Petri.
Evolución de los Medios de Cultivo
Beijerinck y Winogradsky, 1888
realizaron sus investigaciones sobre
las bacterias quimioautótrofas.
Uso de nitrógeno y azufre, tuvieron
gran importancia en el desarrollo de
los medios selectivos y de
enriquecimiento.
Evolución de los Medios de Cultivo
En 1892 Würtz utilizó los medios
diferenciales.
Incorporó indicadores de pH a la
composición para observar la producción de
ácidos en la fermentación en ciertos
microorganismos.
Clasificación de los Medios de Cultivo
• Hay varios criterios:
• A) Por su consistencia o estado
físico.
Líquidos (caldos de cultivo, sin
agar, en matraces pequeños).
Semisólidos (0.5 % de agar en
matraces pequeños).
Sólidos (1.5 a 2 % de agar, se
preparan en placas de Petri o tubos
de ensayo).
Clasificación de los medios de cultivo
B) Por su función:
Selectivos (promueve o inhibe el
crecimiento de microorganismos).
Diferenciales (Permite distinguir
entre diferentes tipos).
De enriquecimiento (contiene un
nutriente que el microorganismo no
puede sintetizar).
Clasificación de los medios de cultivo
• C) Por su naturaleza:
Naturales (su composición no es
exactamente conocida)
Sintéticos (Se conoce con exactitud
su composición).
Semisintéticos (Medios sintéticos a
los que se le agregan algunos
productos naturales).
Aplicaciones de los Medios de Cultivo
• Diagnóstico clínico en medicina humana y veterinaria.
• Detección de microorganismos patógenos a partir de
muestras de fluidos, tejidos y excretas y sus toxinas
causantes de enfermedades.
• Diagnóstico de enfermedades en plantas.
• Industria farmacéutica y biotecnológica
Cultivo masivo de microorganismos productores de
metabolitos (proteínas, factores de crecimiento,
aminoácidos, péptidos, antibióticos, etc.)
Control de la calidad (en proceso, materias primas,
productos terminados, aguas, residuales y ambiente).
Aplicaciones de los Medios de Cultivo
Industria alimenticia
Cultivo de microorganismos productores de sustancias
nutritivas y alimentos (proteínas y compuestos
saborizantes, entre otros)
Obtención de alimentos fermentados (yogurt, quesos y
productos alimenticios).
Control de la calidad (control de proceso, materias
primas, productos terminados, y ambiente)
Agricultura y otras industrias
Cultivo masivo de microorganismos (obtención de
polímeros, azúcares y otros).
Control del medio ambiente (aire, suelos).
Preparación de Medios de Cultivo
Los medios de cultivo
comercialmente disponibles
se presentan como polvos
deshidratados, estériles.
Deben conservarse en envases
originales bien cerrados.
Deben prepararse en material
de vidrio limpio y seco.
Procedimiento para Preparación de Medios de Cultivo
a
Calcular la cantidad de polvo según las instrucciones y la cantidad
a preparar.
b
Se pesa sobre papel de aluminio o taras y se vuelca en el recipiente.
c
Las soluciones con agar, en ocasiones requieren ser calentadas casi
hasta ebullición con agitación constante.
d
e
f
Los tubos que contengan estas soluciones que serán esterilizadas en
autoclave deben contener sólo dos terceras partes de su volumen
total ocupado por el líquido para evitar desbordes.
En autoclave 15 a 20 min a 121 grados Celsius y 15 psi.
Se dejan enfriar (sin solidificarse), se sirven en plagas y se
conservan refrigerados.
Autoclaves
Horizontales
Verticales
Aislamiento de microorganismos de suelo
1
Tomar 1 gramo de suelo y se coloca en 9 mL de agua peptona estéril (10-1).
2
Se homogeniza y deja reposar por 1 min. para decantar los sólidos.
3
Se realizan diluciones seriadas hasta 10-4.
4
Se realizan diluciones seriadas hasta 10-4.
5
Se coloca en el medio de cultivo (PDA, Agar nutritivo, Rosa de Bengala,
otros) desde 0.3 a 1.o ml de las soluciones 10-3 y 10-4.
6
Se esparce en la superficie de la planta con un asa bacteriológica.
7
Se incuban las placas a temperatura ambiente y se evalúa diariamente
el crecimiento.
Aislamiento de Microorganismos de Suelo
Banco de diluciones: disolución seriadas.
Preparación de muestra.
1. Se toma 1 ml o 1 gramo de la muestra.
2. Se coloca en 1 tubo con 9 ml de agua destilada estéril (10 -1 ).
3. De la solución (o suspensión) 10-1 se toma 1 ml y se vierte en
otro tubo con 9 ml de agua (10-2).
4. Así sucesivamente hasta al menos 10 -4
Siembra por Banco de Diluciones:
diluciones seriadas
Siembra de microorganismos por agotamiento
o estriado superficial.
Cultivos Monospóricos de Hongos
Cultivos a partir de una espora simple.
Se obtuvieron de un cultivo puro.
Se le le agregan 20 ml de agua destilada
estéril.
Con una varilla de vidrio se realiza un
raspado del micelio, para remover las
esporas.
De esta suspensión se realizan diluciones
sucesivas de 1:10, 1:100 y 1:1000.
Importancia de cultivos
monospóricos?...
Cultivos monospóricos
Cuando no es posible obtener esporas se puede
recurrir al cultivo de punta de hifas.
Gracias por su atención
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