TÉCNICAS INMUNOHEMATOLÓGICAS Héctor Palacio UNIÓN ANTÍGENOANTICUERPO Unión siempre reversible Enlaces no-covalentes Sitio unión antígeno (epitope) Sitio unión anticuerpo (paratope) UNIÓN ANTÍGENOANTICUERPO Unión siempre reversible UNIÓN ANTÍGENOANTICUERPO Enlaces no covalentes = uniones débiles UNIÓN ANTÍGENOANTICUERPO Temperatura Tiempo Proporción Relativa de ANTÍGENO y ANTICUERPO pH del medio Potencial iónico del medio UNIÓN ANTÍGENOANTICUERPO TEMPERATURA Reacción exotérmica A baja temperatura menos fijación UNIÓN ANTÍGENOANTICUERPO TIEMPO UNIÓN ANTÍGENOANTICUERPO Proporción relativa Ag-Ac SOLUCIÓN SALINA ISOTÓNICA SOLUCIÓN SALINA ISOTÓNICA pH del medio Concentración de iones H en solución Acidez-Alcalinidad Se presume rango fisiológico de actividad óptima Conservación adecuada de la Solución Salina Isotónica Relacionado principalmente con reactivos comerciales MEMBRANA ERITROCITARIA Carga neta negativa MEDIO DE RESUSPENSIÓN (SN. FISIOLÓGICA) Aniones Cationes MEDIO DE RESUSPENSIÓN (SN. FISIOLÓGICA) Cargas positivas forman una nube alrededor de la membrana del glóbulo rojo MEDIO DE RESUSPENSIÓN (SN. FISIOLÓGICA) Los globulos rojos tienden a separarse POTENCIAL Z Aplicado a la distancia entre glóbulos rojos en suspensión AGLUTINACIÓN Un antígeno reacciona con su anticuerpo específico Complementariedad Ag-AC AGLUTINACIÓN Sensibilización Unión Ag-Ac Aglutinación Unión de glóbulos rojos sensibilizados AGLUTINACIÓN Un antígeno reacciona con su anticuerpo específico Complementariedad Ag-AC AGLUTINACIÓN Tipos de anticuerpos IgM IgG AGLUTINACIÓN IgM Pentámero 35 nm Mayor peso molecular Respuesta primaria Generalmente aglutinantes AGLUTINACIÓN IgG Monomero 14 nm Respuesta crónica Generalmente no aglutinante AGLUTINACIÓN IgG 14 nm IgM 35 nm GR 7200 nm (7,2 um) Potencial Z 25 nm AGLUTINACIÓN AGLUTINACIÓN AGLUTINACIÓN Ambos anticuerpos son sensibilizantes IgM aglutinante IgG no aglutinante NO ES UNA REGLA AGLUTINACIÓN Por lo general IgM: aglutinantes IgG: no aglutinantes Ex: IgM antiA: Aglutinantes IgG antiD: NO aglutinantes NO es una regla IgG anti A,B: aglutinantes IgM anti Jka: no aglutinante AGLUTINACIÓN Técnica in vitro Visualización de la unión Ag-Ac Antígenos Aglutinógenos Anticuerpos Aglutininas Unión Ag-Ac Aglutinatos SENSIBILIZACIÓN Unión de la porción FAb al epítope antigénico Unión Ag-Ac propiamente dicha SENSIBILIZACIÓN Unión de un anticuerpo al determinante antigénico FACTORES QUE AFECTAN A LA SENSIBILIZACIÓN Proporción Antígeno-Anticuerpo Aumento de concentración de anticuerpos pH del medio pH entre 6,5 y 7,5 Temperatura Reacciones exotérmicas Tiempo Tipo de antígeno AGLUTINACIÓN Visualización de la unión Ag-Ac Aglutinación propiamente dicha Acercamiento entre células con antígenos sensibilizados AGLUTINACIÓN Red de glóbulos rojos sensibilizados visible macroscópicamente FACTORES QUE AFECTAN A LA AGLUTINACIÓN Potencial iónico del medio Modificación del medio Densidad y movilidad del antígeno A mayor densidad mayor probabilidad de establecer puentes entre hematíes Característica del anticuerpo Unión Antígeno-Anticuerpo IN VITRO Visualización macroscópica de la unión AG-AC Diferentes soportes físicos Tubos de ensayo Gel Microplaca Platina IN VIVO No hay visualización directa inmediata Hallazgo posterior Estudios inmunohematológicos Unión Antígeno-Anticuerpo IN VITRO Reactivos comerciales AB0 Reactivos monoclonales Anti-A, Anti-B, Anti-AB IgM Rh Reactivos monoclonales Reactivos policlonales IgM /IgG (blend) Reactivos monoclonales Reactivos comerciales Reactivos comerciales Reactivos comerciales MONOCLONALES POLICLONALES Reconocen un único epítope No son específicos para un epítope Alta especificidad / Puede no unirse si hay un cambio en la proteína Reconoce diferentes partes de la proteína o pequeños cambios en su estructura Alta reproducibilidad Variabilidad entre lotes Fabricación costosa Más barato Reactivos comerciales
