TRANSFORMAÇÃO DE E. coli
1- Descongelar a amostra de E. coli competente em banho de gelo (partindo do estoque a o
70 C) ou imediatamente após o seu preparo.
2- Adicionar 100-200µL da E. coli
Adicionar 0,05µg a 0,2µg de DNA
competente.
Plasmidial.
Obs.: Para uma reação de ligação utilizar
metade do volume da reação (e do
controle).
3- Banho de gelo por 20 - 30 minutos
o
4- Banho maria a 42 C por 2 minutos
5- Adicionar 1mL de meio LB e
o
incubar por 1 hora a 37 C
6- Plaquear 100-200µL
Obs: para produto de ligação, reduzir o
volume
(centrifugar
descartar
o
1min.,
sobrenadante
e
suspender o pellet no volume
residual ≅150µL) e plaquear todo
o volume.
LB + Amp 50µg/mL (ou antibiótico adequado).
o
Incubar a 37 C por 12 a 16 horas
Protocolos – Sandro R. Valentini