细菌的人工培养
细菌培养基种类和制备
培养基
培养基是人工配制的，适合微生物生长繁殖或产生代谢产
物的营养基质。
培养基几乎是一切对微生物进行研究和利用工作的基础
任何培养基都应该具备微生物生长所需要六大营养要素：
碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水
任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理；
常规高压蒸汽灭菌：
1.05kg/cm2,121.3℃15-30分钟；0.56kg/cm2,112.6℃15-30分钟
按
物
理
状
态
不
同
划
分
在液体培养基中加入一定量凝固剂，
使其成为固体状态，琼脂含量一般
为1.5%-2.0%
solid medium
固体培养基
semisolid medium
半固体培养基
liquid medium
液体培养基
固体培养基常用来进行微生物的分离、
鉴定、活菌计数及菌种保藏
琼脂含量一般为0.2%-0.7%
观察微生物的运动特征、分类鉴定
及噬菌体效价滴定
不加任何凝固剂
大规模工业生产及在实验室进行微
生物的基础理论和应用方面的研究
牛肉膏蛋白胨培养基是最常用
含有一般微生物生长繁殖所需
的基本营养物质的培养基
的基础培养基
按
用
途
不
同
划
分
基础培养基
加富培养基
选择培养基
鉴别培养基
在基础培养基中加入某些特殊营养物
质制成的一类营养丰富的培养基
特殊营养物质包括血液、血清、酵母
浸膏、动植物组织液等
在培养基中加入相应的特殊营养物质或
用来将某种或某类微生物从混杂的微
化学物质，抑制不需要的微生物的生长，
生物群体中分离出来的培养基
有利于所需微生物的生长
用于鉴别不同类型微生物的培养基
微生物产生某种代谢产物，与培养基
中的特殊化学物质发生特定的化学反
应，产生明显的特征变化
临床常用的培养基





基础培养基：肉汤，普通琼脂平板
营养培养基：血液琼脂培养基，巧克力血培养基
选择培养基：SS琼脂培养基
鉴别培养基：EMB琼脂培养基
特殊培养基：厌氧培养基
细菌接种
分离培养
Stationary Phase
Logarithmic
growth phase
Lag Phase
Death Phase
细菌在培养基中生长现象

固体培养基：菌落colony
平板接种
杂菌污染
巧
克
力
平
板
鉴别及选择培养基

EMB琼脂平板上大肠菌
菌落具有金属光泽

SS琼脂平板上大肠菌为
粉红菌落

半固体培养基观察细菌动力
无动力
有动力
细菌在液体培养基中生长现象
沉
淀
生
长
混
浊
生
长
表
面
生
长
斜面接种
纯培养
双糖铁培养基培养结果

－
－
＋
H2S
⊕
H2S＋



Triple Sugar Iron agar slant (TSI slant) Use : For the
differentiation of members of the Enterobacteriaceae base on their
fermentation of lactose, sucrose and glucose and the production of
H2S.
Control organisms :
Escherichia coli : A/A (G)
Shigella flexneri : K/A
Proteus vugaris : K/A, H2S
Pseudomonas aeruginosa : K/N
Incubate : Aerobic 35° C, 24 hrs
Shelf life : 8 weeks
Price (Baht) : 5 (return tube)
Lowenstein-Jensen Medium

结核分枝杆菌菌落 颗粒状粗糙,干燥
尿素酶琼脂斜面
negative
positive
Klebsiella
pneumoniae
Escherichia coli
Proteus
mirabilis





MacConkey agar plate (MC)
Use : For the selective isolation, cultivation and differentiation of coliformsand
enteric pathogens based on the ability to ferment lactose. Lactose–fermening
organisms appear as red to pink colonies. Lactose-nonfermenting organisms appear
as colorless or transparent colonies
Control organisms :
Escherichia coli : Pink colonies (lactose fermentation)
Proteus mirabilis : Colorless colonies ,no spreading
Enterococcus sp. : No growth
Incubate : Aerobic, 35° C, 24 hrs.
Shelf life : 4 weeks
Price (Baht) : 12 (return plate) , 15 (disposable plate)
人工培养细菌的意义



在医学中的应用：诊断；细菌鉴定；生物制品。
在工农业生产中的应用 ：
在基因工程中的应用
手指消毒前后细菌检测
飞沫中细菌检查
紫外线杀菌作用
滤过除菌法 Filtration

赛氏滤器

薄膜滤器
分枝杆菌染色

示范


结核分枝杆菌：抗酸染色法
操作

病人痰液（结核分枝杆菌）抗酸染色法
结核分枝菌细胞壁结构
脂阿拉伯甘露聚糖
甘露磷酸肌醇
实验过程
取痰液→ 涂片（略厚）→干燥→固定 →
石炭酸复红染色8~10分钟后→
用3%的盐酸酒精脱色约1~2分钟，
脱色时轻摇玻片，直到涂片颜色脱去为止
水洗后，用碱性美蓝复染1分钟→水洗，
印干 → 镜检
抗酸染色法(acid-fast stain)过程：


取痰液→ 涂片（略厚）→干燥→固定 →以5
％石炭酸复红染色8~10分钟后→用3%的盐酸
酒精脱色约1~2分钟，脱色时轻摇玻片，直
到涂片颜色脱去为止→ 水洗后，用碱性美蓝
复染1分钟→水洗，印干 → 镜检
分枝杆菌呈红色(+)，其他细菌和背景物质为
蓝色(-)。
结核分枝杆菌(M.tuberculosis)
形态：
细长，略弯曲的杆菌，多聚集成团。无鞭毛,芽胞。
染色性：
不易着色，齐尼抗酸染色阳性。菌体呈红色，背景中其他物质蓝色。



Kovac's reagent Use : For determination of bacteria that posses the
enzyme tryptophanase are capable of cleaving tryptophan, thereby
producing indole, pyruvic acid and ammonia. Indole can be detected
in tryptophan medium by observing the development of red color
after adding a solution containing p-dimethylamino-benzaldehyde.
(Kovac's reagent)
Control organisms :
Escherichia coli : Red (Indole positive)
Klebsiella sp. : remained yellow (Indole negative)
Shelf life : 1 year
Price (Baht) : 400 per 100 ml