PROCEDIMIENTOS NORMALIZADOS DE OPERACION
UNIDAD ¨HOSPITAL PEDIÁTRICO DE MANZANILLO¨.
VICE-DIR. ASEGURAMIENTO MÉDICO
DPTO. LAB. CLINICO
TITULO: RECUENTO DE LEUCOCITOS
(CONTEO GLOBAL DE LEUCOCITOS)
Aprobado por:
Cargo: Jefe del Servicio de Lab. Clínico
Firma:
OBJETIVO:
La sangre mezclada con una solución de ácido acético pierde los
eritrocitos por hemólisis, fenómeno que se completa luego de
transcurrir 5 minutos después que se mezcla la muestra. El
recuento de leucocitos se facilita por la pérdida de dichos
elementos.
ALCANCE: Sangre total obtenida por flebotomía.
ESPONSABILIDADES: Cualquier bioanalista.
CONDICIONES DE SEGURIDAD: Remitido al Manual de Bioseguridad
y al comité de seguridad del centro.
EQUIPAMIENTO, LOCALES, MATERIALES Y REACTIVOS.
EQUIPOS.
* Microscopio
* Cámara contadora (Cuadriculado de Neubauer)
* Tabulador de células
MATERIALES.
* Jeringuillas
* Agujas
* Lancetas desechables 3 x 1 mm
* Aspirador
* Pipeta de 1 mL
* Pipeta de Sahly
* Tubo de ensayo 12 x 75 mm
* Botellas de 8 ml con tapa de goma
* Alcohol al 70 %
* Torundas.
REACTIVOS.
* Heparina dilución 1/10 (250 Uds. /mL)
* EDTA 20 % (2 mg / ml de sangre)
* Ácido acético al 2 % (Solución de Tuerk)
LOCALES:
*
*
*
*
Lab. Central: Sección de extracciones y Hematología.
Lab. de Urgencias
Lab. de Neonatología.
A la cabecera del enfermo (Salas).
OPERACIONES PRELIMINARES:
Remítase regulaciones de muestreo.
Preparar tubo de ensayo 12 x 75 mm con 1 ml de ácido acético al 2
% (Sol. de Tuerk). Puede prepararse con 0.38 ml, especialmente si se
sospecha leucopenia.
Preparar frascos o tubos para recolección de sangre anticoagulada
(Heparina como se describió o EDTA). Ver tubos de autoanalizadores
hematológicos 8 ml.
PROCEDIMIENTO:
MUESTRAS DE FLEBBOTOMÍA:
La sangre tratada con anticoagulante se mezcla de 10 a 12 veces por
inversión suave.
Al tubo de ensayo 12 x 75 que contiene 1 mL de ácido acético al 2 %
se le agrega 0.02 mL de sangre (pipeta de Sahly) teniendo cuidado
de
limpiar correctamente la parte exterior de la pipeta y de no
sobrepasar demasiado el aforo superior.
Mezclar y dejar en reposo por 5 minutos a temperatura ambiente.
Transcurrido el tiempo de reposo se mezcla bien el contenido y se llena
la cámara contadora (Neubauer) la que se coloca en cámara húmeda
por 3 minutos hasta que las células sedimentan, lo cual facilitará el
enfoque microscópico y el recuento.
El conteo se establece en los cuatro grandes cuadrados de las esquinas.
MUESTRA POR PUNCION CAPILAR:
Puncionar el pulpejo del dedo o el talón en el neonato con lanceta
desechable de 3 x 1 mm
Eliminar la primera gota de sangre.
Cargar la pipeta de Sahly cuidando limpiarla bien por fuera y de no
sobrepasar demasiado el aforo superior
Seguir los pasos correspondientes señalados arriba para la muestra
por flebotomía.
CALCULOS:
CC X AC X Dm/4 X 0.001
DONDE:
CC = Células contadas
AC = Altura de la Cámara
Dm = Dilución de la muestra
/4 = Para buscar valor de 1
0.001 = Factor de conversión SI
Dm: Se obtiene dividiendo el volumen del diluente entre el
volumen del soluto.
Ej: 1 ml ácido acético/0.02 de sangre = 50 (Dilución 1/50)
Por lo tanto:
10 X 50
--------- = K = 125
4
K = Constante.
Se obtiene que:
CC X K = C X 109 /L
Establecido el conteo se procede a comprobar éste contra lámina
periférica con el objetivo de 40 para corroborar y chequear el mismo.
Informe:
Los resultados son expresados en números enteros por el
medidas como concentración de número por litro.
Valores de alarma: < 0.5 X 109 /L
SI de
RECUENTO LEUCOCITARIO CORREGIDO.
En el curso de la hemólisis, el número de eritroblastos circulantes
puede conducir a errores importantes en la apreciación del recuento de
leucocitos ya que en la cámara de Neubauer es virtualmente imposible
distinguir los normoblastos, que pasan por linfocitos. Este sesgo puede
corregirse utilizando el recuento diferencial de leucocitos, contando los
eritroblastos ortocromáticos como categoría aparte.
La fórmula sería:
RCL = CTL x 100/100 + No. Ebl
Donde
RCL = Recuento corregido de leucocitos.
CTL = Cómputo total de leucocitos, que incluye a los normoblastos.
No. Ebl = Número de eritroblastos en el recuento diferencial.
Ej:
CTL = No. E 10.000
No. Ebl = 025.0 %
RCL = 10.000 x 100/125
= 8.0 x 109/L (8000 µL)
INTERFERENCIAS.
* Pipeteo incorrecto
* No esperar la Lisis total (reposo de 5 mins. antes del conteo)
* Mal montaje de la cámara.
* No haber mezclado la muestra por macro de 10 a 12 veces.
REFERENCIAS:
VALORES DE REFERENCIA: 4.5-10 X 109 /L
BIBLIOGRAFIA:
OPS PUBLICACION CIENTIFICA No 439.
NC-00-14-78 SNNMCC REGLAS GENERALES DE ELABORACION DE
NORMAS.
NC-00-14-80 SNNMCC GUIA PARA ELABORAR NORMAS DE METODOS
DE CONTROL (ENSAYO ANALISIS Y MEDICION)
WHO, LABORATORIO MANUAL DE TECNICAS BASICAS PARA
LABORATORIO DE SALUD OPS.
FRANCES.
FISCHBACH
A
MANUAL
OF
LABORATORY
AND DIAGNOSTIC TESTS 4ta Edición J.B Lippincott New York 1992.