Adhesivos y medios de
montaje
Adhesivo de Haupt
Composición
Gelatina--------------1 g.
Fenol-----------------2 g.
Glicerol------------15 ml.
Agua destilada----100 ml.
Disolver la gelatina en agua destilada a 30-35ºC. Cuando esté disuelta, añadir el
resto de ingredientes, remover, y filtrar. Se puede sustituir el fenol por acida
(0.03%).
Untar una fina capa sobre el portaobjetos, dejar secar, llenar con formalina al 4%,
y hacer flotar la tira.
Se trata de un adhesivo tradicional, ahora reemplazado por la fórmula del
adhesivo de Sass.
No debería ser utilizado ni para inmunolocalización ni para hibridación in situ ya
que las proteínas en la gelatina pueden no unirse específicamente con las sondas.
No usar con Feulgen o PAS ya que la formalina usada creará una tinción bastante
intensa de fondo.
Adhesivo de Sass
Composición
Gelatina----------------1%
Benzoato sódico-----0.5%
Agua destilada
Disolver la gelatina en agua destialda a 30-35ºC. Cuando esté disuelta, añadir los
otros ingredientes, remover y filtrar.
Untar una fina capa en el portaobjetos, dejar secar, llenar con formalina al 4% y
hacer flotar las tira.
Este es un adhesivo muy potente que debe guardarse a 4ºC. Poner brevemente en
el microondas para hacer líquido pero que no hierva.
No debería usarse para inmunolocalización o hibridación in situ ya que las
proteínas en la gelatina pueden no unirse específicamente con la sonda. No usar
con Feulgen o PAS de forma habitual ya que produce una tinción de fondo muy
grande.
Albúmina de Mayer.
Composición.
Clara de huevo batida-----------50 ml.
Glicerina------------------------50 ml.
Timol o Fenol---------- unos cristales.
Se toman dos o tres huevos y se separa la yema cuidadosamente. Las claras se
baten a punto de nieve; una vez llevada hasta el punto de nieve se filtran durante
varias horas. Se mezcla a partes iguales con glicerina y se le añaden unos
cristales de timol o fenol para evitar el ataque bacteriano. Agítese bien la mezcla
antes de usarse.
Alumbre cromo
Composición:
Gelatina---------------0.5%
Alumbre cromo---0.05%
Agua destilada
Los alumbres son sales dobles que contienen grandes cantidades de uniones con
agua. Los más comunes son los sulfatos alumínico y potásico (alumbre potásico),
sulfato alumínico amónico (alumbre amónico), sulfato férrico amónico (alumbre
hierro), y sulfato crómico potásico (alumbre cromo).
Disolver la gelatina en agua destilada a 30-35ºC. Cuando esté disuelta añadir el
alumbre cromo, remover, y filtrar. Untar los portas y secar en vertical.
Inundar con agua destilada y aplicar las tiras de cortes individuales.
No debería usarse para inmunolocalización ni hibridación in siut debido a que las
proteínas en la gelatina pueden unirse inespecíficamente a la sonda.
Glicerogelatina
Composición:
Gelatina ---------------------------7 g
Agua destilada ------------------42 ml
Glicerina------------------------50 ml
Acido fénico----------------------1 g
Calentar al baño María la, el agua destilada y la glicerina hasta conseguir una
solución homogénea; añadir seguidamente el ácido fénico y filtrar. Siempre que
se use debe ser calentada al baño María y mantenerla en caliente, ya que se
solidifica a temperatura ambiente.
Polilisina (pL)
Composición:
Polilisina 100 g-1mg/ml
Tris (10 mM), pH 8.0
Limpiar los portas en EtOH, lavar en agua destilada, secar los portas.
Poner en remojo los portas durante 30 minutos, secar al aire, mantener desecados
menos de dos semanas.
Inundar con agua destilada y aplicar las tiras.
Usar pesos moleculares muy altos (>600 kDa)
Es el método tradicional de sustitución para realizar experimentos de
hibridación in situ y de inmunolocalización.
No es tan adherente como el adhesivo de los portaobjetos Probe-On Plus.
Silano
Composición:
3-Aminopropilytrietoxi silano
Metacriloxipropil silano "MP-TMS","Bind-Silane"
1% silano en EtOH 100% más ácido acético (solución acuosa al 10%)
Limpar los portas en EtOH
Mezclar silano:AA en proporción 1:3, aplicar para limpiar los portaobjetos del
microscopio, y secar al aire. Enjuagar los portaobjetos en EtOH al 70% y dejar
secar al aire otra vez. Mantener desecado menos de dos semanas.
Inundar con agua destilada y aplicar cortes individuales o tiras. Dejar secar al aire
a una temperatura de 42ºC.
Se trata de un potente adhesivo para usar donde la gelatina no podría ser usada,
como en la hibridación in situ y la inmunolocalización.
Fuerza parecida a los portaobjetos Probe-On Plus.