Traducido del inglés al español - www.onlinedoctranslator.com ab102530 Peróxido de glutation Kit de ensayo (colorimétrico) Instrucciones de uso Para la medición rápida, sensible y precisa de la actividad de la glutatión peroxidasa en varias muestras. Ver hoja de datos del kit: www.abcam.com/ab102530 (utilizarwww.abcam.cn/ab102530 para China, owww.abcam.co.jp/ab102530 para Japón) Este producto es solo para uso de investigación y no está diseñado para uso de diagnóstico. Versión 11 Última actualización 11 de abril de 2019 Tabla de contenido INTRODUCCIÓN 1. ANTECEDENTES 2. RESUMEN DEL ENSAYO 2 3 INFORMACIÓN GENERAL 3. PRECAUCIONES 4. ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD 5. MATERIALES SUMINISTRADOS 6. MATERIALES NECESARIOS, NO SUMINISTRADOS 7. LIMITACIONES 8. CONSEJOS TÉCNICOS 4 4 5 5 6 7 PREPARACIÓN DEL ENSAYO 9. PREPARACIÓN DE REACTIVOS 10. PREPARACIÓN ESTÁNDAR 11. PREPARACIÓN DE MUESTRAS 8 9 10 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO y DETECCIÓN 12. PROCEDIMIENTO DE ENSAYO y DETECCIÓN 12 ANÁLISIS DE LOS DATOS 13. CÁLCULOS 14. DATOS TÍPICOS 14 15 RECURSOS 15. PROCEDIMIENTO DE ENSAYO RÁPIDO 16. RESOLUCIÓN DE PROBLEMAS 17. Preguntas frecuentes Descubre más en www.abcam.com 17 18 20 1 18. INTERFERENCIAS 19. NOTAS Descubre más en www.abcam.com 21 22 2 INTRODUCCIÓN 1.ANTECEDENTES Kit de ensayo de glutatión peroxidasa (colorimétrico) (ab102530), GPx reduce el hidroperóxido de cumeno mientras oxida el GSH a GSSG. El GSSG generado se reduce a GSH con el consumo de NADPH por GR. La disminución de NADPH (medida fácilmente a 340 nm) es proporcional a la actividad de GPx. El ensayo se puede utilizar para medir todas las peroxidasas dependientes de glutatión en plasma, lisados de eritrocitos, homogeneizados de tejidos y lisados de células con una sensibilidad de detección de ~0,5 mU/ml de GPx en las muestras. La familia de enzimas glutatión peroxidasa (GPx) juega un papel importante en la protección de los organismos contra el daño oxidativo. GPx convierte el glutatión reducido (GSH) en glutatión oxidado (GSSG) mientras reduce los hidroperóxidos lipídicos a sus correspondientes alcoholes o peróxido de hidrógeno libre a agua. Se han encontrado varias isoenzimas en diferentes localizaciones celulares y con diferente especificidad de sustrato. Los niveles bajos de GPx se han correlacionado con trastornos relacionados con los radicales libres. Descubre más en www.abcam.com 3 INTRODUCCIÓN 2.RESUMEN DEL ENSAYO Preparación de la curva estándar preparación de la muestra Agregue la mezcla de reacción e incube a temperatura ambiente durante 15 minutos. Mida la densidad óptica (OD 340 nm) Agregar hidroperóxido de cumeno Mida la densidad óptica (OD340 nm) en un modo cinético Descubre más en www.abcam.com 4 INFORMACIÓN GENERAL 3.PRECAUCIONES Lea atentamente estas instrucciones antes de comenzar el ensayo. Todos los componentes del kit han sido formulados y sometidos a pruebas de control de calidad para funcionar satisfactoriamente como un kit. Las modificaciones a los componentes o procedimientos del kit pueden resultar en una pérdida de rendimiento. 4.ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Guarde el kit a -20ºC en la oscuridad inmediatamente después de recibirlo. El kit tiene un tiempo de almacenamiento de 1 año a partir de la recepción, siempre que los componentes no hayan sido reconstituidos. Consulte la lista de materiales suministrados para conocer las condiciones de almacenamiento de los componentes individuales. Observe las condiciones de almacenamiento para los componentes preparados individuales en la sección 5. Alícuota de los componentes en volúmenes de trabajo antes de almacenarlos a la temperatura recomendada.Los componentes reconstituidos son estables durante 2 meses. Descubre más en www.abcam.com 5 INFORMACIÓN GENERAL 5.MATERIALES SUMINISTRADOS Articulo Cantidad Almacenamiento Almacenamiento Condición Condición Preparación) Preparación) (Antes (Después Tampón de ensayo de glutatión peroxidasa 50ml - 20°C - 20ºC* NADPH (liofilizado) 1 vial - 20°C 4ºC o -20ºC* glutatión reductasa 1 vial - 20°C 4ºC o -20ºC* Glutatión (GSH; liofilizado) 1 vial - 20°C 4ºC o -20ºC* hidroperóxido de cumeno 1 vial - 20°C 4ºC o -20ºC* Control positivo de glutatión peroxidasa (liofilizado) 1 vial - 20°C 4ºC o -20ºC* *Consulte la Sección 9 (Preparación de reactivos) para obtener más detalles. 6.MATERIALES REQUERIDOS, NO SUMINISTRADOS Estos materiales no están incluidos en el kit, pero serán necesarios para realizar correctamente este ensayo: - Agua MilliQ u otro tipo de agua bidestilada (ddH2O) PBS - Lector de microplacas colorimétricas: equipado con filtro para placa de 96 pocillos de - OD340 nm: placas transparentes para ensayo colorimétrico - Microcentrífuga - Pipetas y puntas de pipeta - Bloque térmico o baño de - agua Vortex - Dounce homogeneizador o pistilo (si usa tejido) Descubre más en www.abcam.com 6 INFORMACIÓN GENERAL 7.LIMITACIONES - Kit de ensayo diseñado para uso exclusivo en investigación. No debe utilizarse en los procedimientos de diagnóstico. - No utilice el kit o los componentes si ha superado la fecha de caducidad que figura en las etiquetas del kit. - No mezcle ni sustituya reactivos o materiales de otros proveedores o lotes de kits. Los kits se someten a pruebas de control de calidad como un conjunto de componentes y no se puede garantizar el rendimiento si se utilizan por separado o se sustituyen. Descubre más en www.abcam.com 7 INFORMACIÓN GENERAL 8.CONSEJOS TÉCNICOS - Este kit se vende en función del número de pruebas. Una 'prueba' simplemente se refiere a un único pocillo de ensayo. El número de pocillos que contienen muestra, control o estándar variará según el producto. Revise el protocolo por completo para confirmar que este kit cumple con sus requisitos. Póngase en contacto con nuestro personal de soporte técnico si tiene alguna pregunta. - Mantenga las enzimas, los componentes termolábiles y las muestras en hielo durante el ensayo. - Asegúrese de que todos los tampones y soluciones estén a temperatura ambiente antes de comenzar el experimento. - Las muestras que generan valores superiores al estándar más alto deben diluirse aún más en los tampones de dilución de muestra apropiados. - Evite la formación de espuma o burbujas al mezclar o reconstituir los componentes. - Evite la contaminación cruzada de muestras o reactivos cambiando las puntas entre las adiciones de muestra, estándar y reactivo. - Asegúrese de que las placas estén correctamente selladas o cubiertas durante los pasos de incubación. - Asegure la eliminación completa de todas las soluciones y tampones de los tubos o placas durante los pasos de lavado. - Asegúrese de tener el tipo correcto de placa para su método de detección elegido. - Asegúrese de que el bloque de calor/baño de agua y el lector de microplacas estén encendidos. Descubre más en www.abcam.com 8 PREPARACIÓN DEL ENSAYO 9.PREPARACIÓN DE REACTIVOS - Centrifugar brevemente los viales pequeños a baja velocidad antes de abrirlos. 9.1Tampón de ensayo de glutatión peroxidasa: Listo para usar como se suministra. Calentar a temperatura ambiente antes de usar. Conservar a -20ºC. 9.2Estándar NADPH: Reconstituir con 500 µL de dH2O para obtener una solución estándar de NADPH de 40 mM. Estándar de alícuota para que tenga suficiente para realizar el número deseado de ensayos. Almacene a -20 °C durante 1 mes oa 4 °C durante 1 semana. 9.3Glutatión reductasa: Diluya con 220 µL de tampón de ensayo. Alícuota de enzima para que tengas suficiente para realizar el número deseado de ensayos. Almacenar a -20°C por 1 mes oa 4ºC por 1 semana. Mantener en hielo durante el uso. 9.4Glutatión (GSH): Reconstituir con 220 µL de tampón de ensayo. Haga alícuotas de GSH para que tenga suficiente para realizar el número deseado de ensayos. Almacenar a -20°C por 1 mes oa 4ºC por 1 semana. 9.5Hidroperóxido de cumeno: Diluir con 1,25 ml de tampón de ensayo. Alícuota para que tenga suficiente para realizar el número deseado de ensayos. tienda en - 20°C durante 1 mes oa 4ºC durante 1 semana. 9.6Glutatión Peroxidasa (Control Positivo): Reconstituir con 100 µL de tampón de ensayo. Control positivo en alícuotas para que tenga suficiente para realizar el número deseado de ensayos Almacene a -20 °C durante 1 mes oa 4 °C durante 1 semana. Mantener en hielo durante el uso. Descubre más en www.abcam.com 9 ENSAYO PRE PREPARACIÓN DEL ENSAYO 10PREPARACIÓN ESTÁNDAR - Prepare siempre un nuevo conjunto de estándares para cada uso. - La solución estándar diluida es inestable y debe usarse dentro de las 4 horas. 10.1 Prepare el estándar de NADPH 1 mM diluyendo 25 µL de la solución estándar de NADPH 40 mM en 975 µL de dH2o 10.2 Con el estándar de NADPH 1 mM, prepare la dilución de la curva estándar como se describe en la tabla en una microplaca o tubos de microcentrífuga: Estándar Volumen de tampón de ensayo (µL) Volumen final estándar en pozo (µL) Terminar [NADPH] en # Estándar (µL) bien 1 0 300 100 0 nmol/pocillo 2 60 240 100 20 nmol/pocillo 3 120 180 100 40 nmol/pocillo 4 180 120 100 60 nmol/pocillo 5 240 60 100 80 nmol/pozo 6 300 0 100 100 nmol/pocillo Cada dilución tiene suficiente cantidad de estándar para configurar lecturas duplicadas (2 x 100 µL). Descubre más en www.abcam.com 10 ENSAYO PRE PREPARACIÓN DEL ENSAYO 11PREPARACIÓN DE LA MUESTRA Información general de la muestra: - Recomendamos realizar varias diluciones de su muestra para garantizar que las lecturas estén dentro del rango de valores estándar. - Le recomendamos que utilice muestras frescas. Si no puede realizar el ensayo al mismo tiempo, le sugerimos que complete el paso de preparación de la muestra antes de almacenar las muestras. Alternativamente, si eso no es posible, le sugerimos que congele rápidamente las células o el tejido en nitrógeno líquido después de la extracción y almacene las muestras inmediatamente a -80 °C. Cuando esté listo para analizar sus muestras, descongélelas en hielo. Sin embargo, tenga en cuenta que esto podría afectar la estabilidad de sus muestras y que las lecturas pueden ser más bajas de lo esperado. 11.1Muestras de células (adherentes o en suspensión): 11.1.1 Cosechar la cantidad de células necesarias para cada ensayo (inicial recomendación = 2 x 106células). 11.1.2 Lave las células con PBS frío. 11.1.3 Resuspender las células en 200 µL de tampón de ensayo frío. 11.1.4 Homogeneice las células rápidamente pipeteando hacia arriba y hacia abajo varias veces, en hielo. 11.1.5 Centrifugar 15 minutos a 4 °C a 10 000 g usando una microcentrífuga fría para eliminar cualquier material insoluble. 11.1.6 Recoja el sobrenadante y transfiéralo a un tubo limpio. 11.1.7 Mantener en hielo. 11.2Muestras de tejido: 11.2.1 Coseche la cantidad de tejido necesaria para cada ensayo (recomendación inicial = 100 mg). 11.2.2 Lave el tejido en PBS frío. 11.2.3 Vuelva a suspender el tejido en 200 µL de tampón de ensayo frío. Descubre más en www.abcam.com 11 ENSAYO PRE PREPARACIÓN DEL ENSAYO 11.2.4 Homogeneice el tejido con un homogeneizador Dounce sobre hielo, con 10 a 15 pases. 11.2.5 Centrifugar 15 minutos a 4 °C a 10 000 g usando una microcentrífuga fría para eliminar cualquier material insoluble. 11.2.6 Recoja el sobrenadante y transfiéralo a un tubo limpio. 11.2.7 Conservar en hielo. 11.3Eritrocitos: 11.3.1 Homogeneice 200 µL de eritrocitos en 200 µL de tampón de ensayo frío. 11.3.2 Centrifugar 15 minutos a 4°C a 10.000xgutilizando una microcentrífuga fría para eliminar cualquier material insoluble. 11.3.3 Recoja el sobrenadante y transfiéralo a un tubo limpio. 11.3.4 Mantener en hielo. 11.4Muestras de plasma y suero: Las muestras de suero se pueden analizar directamente agregando la muestra a los pocillos de la microplaca. Las muestras se pueden almacenar a -80ºC. NOTA:Sugerimos usar diferentes volúmenes de muestra para asegurar que las lecturas estén dentro del rango de la curva estándar. Descubre más en www.abcam.com 12 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO y DETECCIÓN 12PROCEDIMIENTO DE ENSAYO y DETECCIÓN ● Equilibre todos los materiales y reactivos preparados a temperatura ambiente antes de su uso. ● Se recomienda analizar todos los estándares, controles y muestras por duplicado. 12.1 Configure los pozos de reacción: - Pocillos estándar = diluciones estándar de 100 µL. - Pocillos de muestra = 2 muestras de 50 µL (ajuste el volumen a 50 µL/ pocillo con tampón de ensayo). - (Opcional) Control positivo = 5 – 10 µL del control positivo GPx (ajuste el volumen a 50 µL/pocillo con tampón de ensayo). - Pocillos de control de reactivos = 50 µL de tampón de ensayo 12.2 Mezcla de reacción: Inmediatamente antes del uso, prepare la mezcla de reacción para cada reacción: Componente colorimétrico Mezcla de reacción (µL) tampón de ensayo 33 Solución de NADPH 40 mM 3 solución GR 2 solución GSH 2 Mezcle suficientes reactivos para el número de ensayos (muestras, control positivo y control de reactivos) que se van a realizar. Prepare una mezcla maestra de Reaction Mix para garantizar la consistencia. 12.3 Agregue 40 µL de mezcla de reacción a la muestra, control(es) positivo(s) y pocillos de control de reactivo. 12.4 Mezcle bien e incube a temperatura ambiente durante 15 minutos para eliminar todo el GSSG de las muestras. NOTA: Mida la DO 340 nm antes de agregar hidroperóxido de cumeno.Si la OD a 340 nm es inferior a 1,0, agregue más NADPH para asegurarse de que haya suficiente NADPH en el sistema de reacción. 1 µL de NADPH 40 mM dará ~0.5 OD a 340 nm. Descubre más en www.abcam.com 13 ENSAYO PRE PROCEDIMIENTO DE ENSAYO y DETECCIÓN 12.5 Agregue 10 µL de solución de hidroperóxido de cumeno, solo a los pocillos de muestra, control positivo y control de reactivo, para iniciar la reacción de glutatión peroxidasa (GPx). Mezclar bien. 12.6 Salida de medida (A1) en un lector de microplacas a OD340 nm en T1. 12.7 Incubar a 25ºC durante 5 min (o más si la actividad GPx es bajo). Proteger de la luz. 12.8 Salida de medida (A2) en un lector de microplacas a OD340 nm en T2. NOTA:si un1la lectura es demasiado baja (<0.7), significa que hay demasiado GPx o demasiado GSSG en la muestra. Es posible que deba diluir las muestras o eliminar el GSSG de su muestra mediante métodos, como la diálisis de la muestra o el uso de filtros giratorios (ab93349) para eliminar el GSSG. NOTA:Imprescindible leer A.1y un2en el rango lineal de la reacción. Será más preciso si lee la cinética de la reacción. Luego elige A1y un2en el rango lineal de la reacción. Descubre más en www.abcam.com 14 13CÁLCULOS - Las muestras que produzcan señales mayores que las del estándar más alto deben diluirse más en un tampón apropiado y volver a analizarse, luego multiplicar la concentración encontrada por el factor de dilución apropiado. - Por razones estadísticas, recomendamos que cada muestra se analice con un mínimo de dos repeticiones (duplicados). 13.1 Promedie la lectura duplicada para cada estándar y muestra. 13.2 Restar el valor medio de absorbancia del blanco (estándar # 1) de todas las lecturas estándar y de muestra. Esta es la absorbancia corregida. 13.3 Grafique los valores de absorbancia corregidos para cada estándar en función de la concentración final de NADPH. 13.4 Dibuje la mejor curva suave a través de estos puntos para construir la curva estándar. La mayoría de los programas de lectura de placas o Excel puede trazar estos valores y ajustar la curva. Calcule la ecuación de la línea de tendencia en función de los datos de su curva estándar (utilice la ecuación que proporcione el ajuste más preciso). 13.5 Extrapolar lecturas de muestra de la curva estándar trazada usando la siguiente ecuación: Δ _340 = (( 1- 2) - ( 1- 2)) 13.6 Aplicar el Δ_A340nma la curva estándar de NAPDH para obtener la cantidad B de NADPH: ( ) = Δ _340 ‒ 13.7 La concentración de GPx en las muestras de prueba se calcula como (nmol/min/mL = mU/mL): ( = ( 2‒ 1)∗ Descubre más en www.abcam.com ) ∗ 15 Donde: B = cantidad de NADPH que disminuyó entre T1y T2 (en nmol). T1= Hora de la primera lectura (A1) (minutos). T2= Hora de la segunda lectura (A2) (minutos). V = Volumen de muestra pretratada añadida al pocillo de reacción (ml). D = Factor de dilución de la muestra. Definición de unidad:Una unidad se define como la cantidad de enzima que provocará la oxidación de 1,0 µmol de NADPH a NADP.+ bajo las condiciones del kit de ensayo por minuto a 25°C. 14DATOS TÍPICOS CURVA ESTÁNDAR TÍPICA–Datos proporcionados parafines de demostración solamente. Se debe generar una nueva curva estándar para cada ensayo realizado. Figura 1. Curva típica de calibración estándar de NADPH usando lectura colorimétrica. Descubre más en www.abcam.com dieciséis Figura 2: Actividad de glutatión peroxidasa medida en lisados celulares que muestra la cantidad (nmol) por 1 millón de células después de 10 minutos de incubación Figura 3:Actividad de glutatión peroxidasa medida en fluidos biológicos que muestra la cantidad (nmol) por 1 ml después de 10 minutos de incubación. Descubre más en www.abcam.com 17 15.PROCEDIMIENTO DE ENSAYO RÁPIDO NOTA: Este procedimiento se proporciona como una referencia rápida para usuarios experimentados. Siga el procedimiento detallado cuando realice el ensayo por primera vez. - Preparar estándar NADPH, glutatión reductasa, GSH, hidroperóxido de cumeno, control positivo GPx (alícuota si es necesario); preparar el equipo. - Prepare la curva estándar adecuada. - Configure la placa para pocillos estándar (100 µL) y muestras (50 µL), control positivo (50 µL) y control de reactivo (50 µL), por duplicado. Encuentre las diluciones óptimas para adaptarse a las lecturas de la curva estándar. - Preparar mezcla de reacción (Número de muestras + estándares + 1). Componente tampón de ensayo - colorimétrico Mezcla de reacción (µL) 33 Solución de NADPH 40 mM 3 solución GR 2 solución GSH 2 Añada 40 µL de la mezcla de reacción solo a los pocillos de muestra, control positivo y control de reactivo. - Incube la placa a temperatura ambiente - durante 15 min. Lea a OD 340 nm. - Agregue 10 µL de solución de hidroperóxido de cumeno solo a los pocillos de muestra, control positivo y control de reactivo. - Salida de medida (A1) en un lector de microplacas en T1a DO340 nm. - Incubar a 25ºC durante 5 min, protegido de la luz (o más). Salida de - medida (A2) en un lector de microplacas en T2a DO340 nm. Descubre más en www.abcam.com 18 dieciséis.SOLUCIÓN DE PROBLEMAS Problema Porque Uso de tampón enfriado con hielo Ensayo no Placa leída en Fluorométrico: pocillos negros/transparentes Muestras de células/tejidos no homogeneizado completamente Muestras utilizadas después múltiples libres/descongelados ciclos Uso de viejos o almacenado inapropiadamente muestras Presencia de sustancia que interfiere en la muestra mal descongelado Más bajo/ Más alto lecturas en muestras y Estándares Compruebe la longitud de onda y el filtro Uso de un 96- diferente buen plato desproteinizado (si indicado en el protocolo) lecturas temperatura ajustes del instrumento Muestras no errático Los tampones deben estar en la habitación. longitud de onda incorrecta trabajando Muestra con Solución componentes Permitir que los reactivos sentarse por tiempos prolongados sobre hielo Incubación incorrecta tiempos o temperaturas Descubre más en www.abcam.com Colorimétrico: placas transparentes placa inferior Utilice el protocolo de precipitación PCA para desproteinización Use el homogeneizador Dounce, aumente el número de golpes Muestras en alícuotas y congeladas si es necesario usarlas varias veces Utilice muestras frescas o guárdelas a -80°C (después de congelarlas instantáneamente en líquido) nitrógeno) hasta su uso Comprobar el protocolo de sustancias que interfieren; desproteinizar muestras Descongele todos los componentes por completo y mezclar suavemente antes de usar Siempre descongele y prepare fresco mezcla de reacción antes de usar Verifique los tiempos y temperaturas de incubación correctos en el protocolo 19 Problema Porque Solución Errores de pipeteo en Evite pipetear volúmenes pequeños (< 5 µL) y prepare una mezcla maestra estándar o reacción Estándar las lecturas hacen no seguir un patrón lineal mezcla burbujas de aire formadas en bien El stock estándar está en incorrecto concentración Medido en incorrecta longitud de onda imprevisto resultados Las muestras contienen entrometido sustancias Lecturas de muestra encima/debajo del rango lineal Descubre más en www.abcam.com cuando sea posible Pipetear suavemente contra la pared de los tubos Consulte siempre las diluciones en protocolo Verifique el equipo y la configuración del filtro Solucionar problemas si interfiere con el kit Concentrar/diluir la muestra para que sea dentro del rango lineal 20 17Preguntas más frecuentes ¿Cuál es la detección mínima de este kit? El ensayo tiene una sensibilidad de detección de 0,5 mU/ml de glutatión peroxidasa en las muestras. ¿Se puede utilizar este kit con plasma y sangre entera? El protocolo contiene instrucciones para los eritrocitos. La sangre completa se puede procesar de manera similar. El plasma se puede diluir en un rango y luego la dilución que da lecturas dentro del rango lineal de la curva estándar se puede usar para el ensayo. ¿Cuál es el nivel de actividad del control positivo? ¿Cómo podemos aumentar su valor para que sea comparable con nuestras muestras? El control positivo es solo una muestra de referencia. Mientras los valores estén dentro del rango de la curva estándar, está bien. El control positivo no se utiliza para comparar valores con las muestras. El control positivo se proporciona para validar que todos los componentes del ensayo funcionan. Descubre más en www.abcam.com 21 18INTERFERENCIAS Estos productos químicos o materiales biológicos causarán interferencias en este ensayo, lo que hará que los resultados se vean comprometidos o que falle por completo. - SDS: desnaturalizará las proteínas y afectará la actividad enzimática. El búfer RIPA contiene SDS. Descubre más en www.abcam.com 22 19NOTAS Descubre más en www.abcam.com 23 Reino Unido, UE y resto del mundo Correo electrónico: técnico@abcam.com | Teléfono: +44-(0)1223-696000 Austria Correo electrónico: wissenschaftlicherdienst@abcam.com | Teléfono: 019-288-259 Francia Correo electrónico: supportcientifique@abcam.com | Teléfono: 01-46-94-62-96 Alemania Correo electrónico: wissenschaftlicherdienst@abcam.com | Teléfono: 030-896-779-154 España Correo electrónico: soportecientífico@abcam.com | Teléfono: 911-146-554 Suiza Correo electrónico: técnico@abcam.com Teléfono (alemán): 0435-016-424 | Tel (francés): 0615-000-530 Estados Unidos y América Latina Correo electrónico: us.technical@abcam.com | Teléfono: 888-77-ABCAM (22226) Canadá Correo electrónico: ca.technical@abcam.com | Teléfono: 877-749-8807 China y Asia Pacífico Correo electrónico: hk.technical@abcam.com | Teléfono: 400 921 0189 / +86 21 2070 0500 Japón Correo electrónico: technical@abcam.co.jp | Teléfono: +81-(0)3-6231-0940 www.abcam.com | www.abcam.cn | www.abcam.co.jp Copyright © 2016 Abcam, Todos los derechos reservados. 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