南台科技大學
生物科技系
學生專題
斜紋夜蛾病毒株之差異性
專題生:496H0030 洪卉伶
指導教授:李松泰
中
華
民
國
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0
年
5
月
摘要
經過研究結果顯示，桿狀病毒的應用性廣泛，其中的應用方式之一為生物防
治，因此本研究以不同生長地區的同種之病毒進行比較，進而找出最有致病力的
病毒株。
故研究目的為不同生長地區的桿狀病毒株對於蟲體的致病力及不同桿狀病毒
株的基因體之差異性。
本實驗利用常見的昆蟲活體，此蟲體為斜紋夜蛾的幼蟲，將病毒株塗抹於飼
料上並餵食昆蟲活體，使病毒株放大再純化病毒株的基因體，最後使用不同的限
制酶分析四株病毒株的基因體之差異性，結果顯示 TW 病毒株的致病力較高，而
且 TW 的基因片段較 TT、DC、WF 病毒株亮且表現明顯。
i
目次
摘要
目次
圖目錄
壹、前言
貳、文獻回顧
一、桿狀病毒之簡介
二、桿狀病毒之分類
三、桿狀病毒之生活史
四、桿狀病毒之基因表現
五、桿狀病毒之應用
參、材料與方法
一、病毒與蟲體
二、包涵體(occlusion body)之純化
三、病毒粒子之純化
四、病毒基因體之純化
五、確認是否抽到病毒基因體
肆、結果
伍、參考文獻
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5
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6
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7
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圖目錄
圖 1 斜紋夜蛾幼蟲尚未餵食病毒的狀態
圖 2 斜紋夜蛾餵食病毒的狀態
圖 3 斜紋夜蛾核多角體病毒─TW 包涵體(10µl)的鏡檢
圖 4 斜紋夜蛾核多角體病毒─TW 包涵體(10µl)的鏡檢
圖 5 糖梯高速離心
圖 6 病毒 DNA 電泳
圖 7 病毒 DNA 電泳
iii
8
8
9
9
10
10
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壹、前言
斜紋夜蛾(Spodoptera litura Fabricius)屬於鱗翅目(Lepidoptera)、夜蛾科
(Noctuidae)，為台灣重要之經濟害蟲之一，食性甚廣且增生力強。寄主範圍達 44
科 112 種植物(Moussa and Kotby ,1960)。據調查，台灣的芋頭、番茄、十字花科蔬
菜、花卉及豆科等植物，接受嚴重危害(施、徐，1983)。
由於斜紋夜蛾幼蟲常成群遷徙危害作物，棲息於作物隱密處，故施用化學藥劑
時難以接觸，造成防治效果不彰。另因化學藥劑在田間施用過於頻繁，以致本蟲
對化學藥劑會產生抗藥性且因施用不當造成農藥殘留與環境污染等問題(鄭，
1984)。在環保意識與健康無毒蔬果受到極大重視的今日，找尋對昆蟲具專一性且
安全性高之生物防治，則成為目前研究之趨勢。
桿狀病毒是一群感染節肢動物之專一性的雙股螺旋環狀 DNA 病毒，昆蟲是其
主要的寄主，蟲體受到感染後，病毒會啟動多角體蛋白基因產生大量的多角體蛋
白，以至於在寄主細胞中的細胞核內出現明顯的包涵體(Occlusion body)或稱多角
體，也因此而得名，多角體蛋白可以抵抗陽光、高溫及乾燥等氣候因子的衝擊，
故病毒可以持續發揮防治害蟲的功能。核多角體病毒的致病機制，主要是被蟲體
食入後，在蟲體的腸道溶解，釋出包含的病毒粒子(Harrap and Longworth, 1974)，
病毒粒子的外膜會與中腸上皮細胞微絨毛融合，使病毒核酸能被送至細胞核，進
行核酸複製產生新生代的病毒粒子。當多角體蛋白量增加後，可包住留在細胞核
內的病毒粒子，而形成包涵體(Occlusion body)病毒，待細胞裂解後釋出蟲體外，
這種釋放至外界環境中包涵體(Occlusion body)病毒，可以再感染其他昆蟲進而誘
發昆蟲間的流行病，而達到實際有效控制農業害蟲的目的。此病感染的方式，除
了水平感染還有垂直感染。
1973 年，世界衛生組織及批准成為有效防治農作物害蟲的微生物製劑。因此，
昆蟲桿狀病毒(尤其是核多角體病毒)作微生物性殺蟲劑，在生物農藥發展趨勢中深
具潛力。斜紋夜蛾核多角體病毒(Spodoptera litura Nucleopolyhedrovirus)是目前台灣
農業上被廣泛使用的生物農藥。但是以微生物開發出的生物農藥，其特性之一就
1
是有些微生物本身具有地域性的差異。不同種類的桿狀病毒會有極大的差異性，
即使同種類但不同的分離株的病毒也同樣有可能具有差異(Reilly , Miller and
Luckow ,1992 )。
2
貳、文獻回顧
一、桿狀病毒之簡介
桿狀病毒（baculovirus）主要的宿主為昆蟲及甲殼類動物，目前知道已有 600
種以上昆蟲可被感染，其中又以鱗翅目昆蟲為其主要宿主，其它還包括:膜翅目
(Hymenoptera)、雙翅目（Diptera）、鞘翅目（Coleoptera）、脈翅目（Neuroptera）、
毛翅目（Trichopter）
。目前桿狀病毒作為高效、安全的無公害生物殺蟲劑廣泛應用
於害蟲防治。隨著分子生物學技術和方法的發展及應用，桿狀病毒在分子水平的
基礎研究迅猛發展，桿狀病毒作為一種新型的基因治療載體受到人們的高度重視。
桿狀病毒具有雙股環狀 DNA(大小約為 80-200kb)和核心蛋白（Wilson et al.,
1991）
，結合成一個核酸蛋白核心（nucleic acid-protein core）
（Summers and Anderson,
1972；Tweeten et al., 1980），被包覆在蛋白外鞘（capsid）內，形成一個桿狀的核
蛋白外鞘（nucleocapsid）
，桿狀病的命名及是從這而來，外層再由被膜（envelope）
包覆，形成直徑大小為 40-50nm，長度為 200-400nm（Harrap.,1972）的昆蟲桿狀
病毒粒子。
二、桿狀病毒之分類
桿狀病毒科（Baculoviridae）在早年分類上只有一個桿狀病毒屬（Baculovirus），
屬下有三個亞屬，其中二個亞屬為能產生包涵體的核多角體病毒（nuclear
polyhedrosis virus, 簡稱 NPV）和顆粒體病毒（granulosis virus, 簡稱 GV）另一亞
屬為無法產生封埋體的無包涵體病毒（nonoccluded virus, 簡稱 NOV）（Bilimoria,
1986）。
1991 年 Wilson 將桿狀病毒科分為真桿狀病毒亞科（Eubaculovirinae）及裸桿狀
病毒亞科（Nudibaculo- virinae）
。把能形成包涵體的核多角體病毒屬及顆粒體病毒
屬歸類為真桿狀病毒亞科，無法產生包涵體的無包涵體桿狀病毒屬歸類為裸桿狀
病毒亞科，在 2005 年已將裸桿狀病毒自桿狀病毒科分離出來，成為一群尚未定位
的病毒。
3
而目前桿狀病毒科是依其包涵體的組成與結構不同，分為兩個屬：即核多角體
病毒 （nucleopolyhedrovirus, NPV）和顆粒體病毒 (granulovirus, GV)。核多角體病
毒依病毒粒子內的核蛋白鞘數目多寡可分為：每個病毒粒子的被膜內只包裹一個
核蛋白鞘的單核多角體病毒（single envelope nuclocapsid NPV, SNPV），和包裹著
多個核蛋白鞘的繁核多角體病毒（multiple envelope nuclocapsid NPV, MNPV）。又
依據一個細胞內可產生包涵體數量的多寡分成眾多角體型(multiple polyhedra type,
簡稱 M type)及寡多角體型(few polyhedra type, 簡稱 F type)。每顆細胞內可產生超
過十個以上的包涵體為 M type 的核多角體病毒在；而包涵體數量少於十個以下為
F type 的核多角體病毒。顆粒體病毒只有在鱗翅目昆蟲有發現（Rohrmann, 1999；
Winstanley and O’Reilly, 1999）
，在每顆細胞內只產生少數包涵體，而每個包涵體內
通常也只含一個病毒粒子，裡面內只有一個核蛋白鞘。
根據出芽病毒進行胞吞作用時，病毒粒子被膜上的融合蛋白（fusion protein）
扮演的功能（Pearson and Rohrmann, 2002）和多角體蛋白（polyhedrin）(單一基因
序列的分析，可將感染鱗翅目昆蟲的核多角體病毒分成 Group I 與 Group II 兩群
（Bulach et al., 1999；Zanotto et al., 1993）
。Group I NPVs 的套膜上具有 GP64 融合
蛋白，而 Group II NPVs 則不具有相似 gp64 的基因（Pearson et al., 2002）。
近來研究學者比對多種昆蟲桿狀病毒基因序列，提出演化上桿狀病毒可分成四
個主要類群：分別是感染鱗翅目 Alphabaculovirus 的 NPV，（lepidopteran-specific
NPV）、感染鱗翅目 Betabaculovirus 的 GV，（lepidopteran-specific GV）、感染膜翅
目 Gammabaculovirus 的桿狀病毒（hymenopteran-specific NPV）及感染雙翅目
Deltabaculovirus 的桿狀病毒（dipteran-specific NPV）
（Lauzon et al.,2004；Jehle et al.,
2006；Okano et al., 2006）。
三、桿狀病毒之生活史
桿狀病毒因為生活史中產生的病毒粒子具有兩種不同的型態，所以其生活史被
稱為雙相複製生活史（biphasic replication cycle）。
在自然環境中，昆蟲因誤食含有桿狀病毒之包涵體的葉片而受感染。病毒藉由
食物到達昆蟲中腸道，在鹼性環境（pH9.0～11.5）及酵素作用下，包涵體被溶解
釋放出病毒粒子(Harrap and Longworth, 1974)。此病毒粒子藉被膜與昆蟲中腸上皮
層細胞（epithelial cells）的微絨毛（microvilli）進行膜融合，使核蛋白鞘進入細胞
4
內（Granados and Williams, 1986），此為桿狀病毒生活史中的初級感染（primary
infection）。一般在感染後 8 小時，即有核蛋白鞘在細胞核內產生，此核蛋白鞘以
出芽（budding）方式從細胞釋出，病毒粒子的被膜主要為被感染細胞的細胞膜和
病毒蛋白質如 gp64（Volkman et al., 1984）
，此病毒粒子即為出芽病毒（Budding, BV）
或稱胞外病毒（Extracellular, ECV）。出芽病毒由中腸細胞釋出穿過基底層到達血
液中，藉由血液循環或經由氣管系統散佈至蟲體各處（Keddie et al., 1989；Engelhard
et al., 1994）
，以胞吞作用（endocytosis）方式感染昆蟲其它組織器官細胞如脂肪體、
血球、肌肉，造成全身性感染，此為桿狀病毒生活史中的次級感染（secondary
infection）。病毒在細胞內進行基因表現、複製基因體、合成病毒的外鞘蛋白。此
時可以發現到細胞核變大的現象，呈透明狀的病毒基質（virogenic stroma）構造出
現在細胞內。組裝完成的病毒核蛋白鞘大量聚集於細胞核內，覆以被膜形成病毒
粒子，且包裹於包涵體內。這種病毒被稱為包涵體病毒（occluded-derived virus 簡
稱為 ODV）
。被病毒感染的蟲體因病毒大量繁殖身體會呈現液化的現象，造成蟲體
死亡（Miller, 1997），蟲體死亡後包涵體病毒會散布到環境中繼續感染。
四、桿狀病毒之基因表現
病毒在感染過程上大致可以分成三個基段：早期（early phase）約感染後 0~6 小時；
晚期（late phase）約感染後 6~24 小時；非常晚期（very late phase）約感染後 24
小時之後。在病毒的核蛋白鞘進入細胞釋放出病毒基因體進入細胞核，開始早期
基因（early gene）的表現。早期基因的表現是以寄主細胞的 RNA polymerase II 進
行轉錄作用，合成病毒複製 DNA 及晚期與非常晚期基因表現時所需的蛋白質。晚
期基因在 DNA 複製時開始表現，利用病毒自己的 RNA polymerase 進行轉錄作用
（Hoh and Weaver, 1990）
，其產物主要是病毒的構造蛋白。等到感染後期，非常晚
期基因即多角體蛋白基因及 P10 基因大量表現時，寄主細胞的基因以及大部分病
毒早期基因的表現都被抑制。
五、桿狀病毒之應用
生物性農藥：對於過去防治害蟲大多使用化學農藥，但其方式往往造成環境汙
染和農藥殘留在作物危害人體健康，再者使用蘇力桿菌（Bacillus thuringiensis,Bt）
對昆蟲產生專一毒性（Thiem Suzanne M., 1997）
，藉由破壞昆蟲腸道導致停止進食
5
最後死亡，但只對鱗翅目幼蟲有高毒殺效果。而桿狀病毒的寄主範圍較多，專一
性高，確認不會在人類細胞中從事病毒基因表現、繁殖，以及造成任何病原性後，
現今被當作有效的蟲害防治微生物。
表現外源基因：桿狀病毒基因中之多角體蛋白基因（polyhedrin gene）和 p10
基因具有極強的起動子（promoter），且在病毒中屬於非必要的結構性基因，因此
利用分生技術構築出桿狀病毒表現載體（baculovirus expressing vector system,
BEVS），在啟動子後方接入想獲得之外源蛋白。至今已發展成為研究和生產蛋白
質的高效率系統。
基因治療：在 1990 年代中，科學家陸續發現這病毒雖然不會表現自己的起動
子，但若裝入可被人類細胞認識的起動子，則這病毒可進入少數人類細胞，如肝
細胞，表現外源基因。由於桿狀病毒對人無病原性，也不會增殖，因此安全性比
目前基因療法使用的腺病毒及反轉錄酶病毒等人類病毒為高，將可運用在新興的
人類基因療法上。
6
參、材料與方法
一、病毒與蟲體
本實驗使用四株斜紋夜蛾核多角體病毒，分別為 TW、TT、DC 及 WF，並以斜紋
夜蛾幼蟲進行活體實驗。
1.1 斜紋夜蛾核多角體病毒─TW (Spodoptera litura
Nucleopolyhedrovirus─TW)
由台灣大學提供。
1.2 斜紋夜蛾核多角體病毒─TT (Spodoptera litura
Nucleopolyhedrovirus─TT)
草屯的分離株。
1.3 斜紋夜蛾核多角體病毒─DC (Spodoptera litura
Nucleopolyhedrovirus─DC)
大甲的分離株。
1.4 斜紋夜蛾核多角體病毒─WF (Spodoptera litura
Nucleopolyhedrovirus─WF)
霧峰的分離株。
1.5 斜紋夜蛾(Spodoptera litura)
由台灣大學提供。
二、包涵體(Occlusion body)之純化
將因感染而死亡的斜紋夜蛾幼蟲用研磨器磨碎，過濾磨碎的蟲體，依序使用大過
濾、中過濾與真空過濾(6µm)，使用桌上型離心機，於 4
下 1500g 離心 30 分鐘，
然後去除上清液，再加入 3 倍體積的無菌去離子水回懸浮，再加入等體積的正己
烷，然後使用桌上型離心機，於 4℃下 1500g 離心 30 分鐘，離心完全後加入 3ml
的無菌去離子水。
將超高速離心管(BECKMAN Ultra-ClearTM Centrifunge Tubes)中製備好連續梯度之
糖液，由 35%、45%、55%、65%組成，然後將上述製備好之已感染的蟲體細胞全
部加入超高速離心管之最上端，然後上超高速離心(BECKMAN COULTER
7
OptimaTM L-90K Ultracentrifuge, use SW41 Rotor)，於 4℃下 74000g 離心 30 分鐘，
離心完畢後，拍照記錄並將出現之環帶分層收集起來，分別放入不同的離心管，
各管再加入 3 倍體積的無菌去離子水混勻，再使用桌上型離心機，於 4℃下 2500g
離心 30 分鐘，離心完後，去除上清液，然後保存於 4℃冰箱。
三、病毒粒子之純化
各管離心管分別加入 2ml 3X DAS，再以 parafirm 封好，然後使用桌上型震盪器，
將病毒包涵體(Occlusion body)打破，每隔 30 分鐘，取少量以 400X 光學顯微鏡
(Nikon ECLIPSE TE2000-U)下鏡檢觀察包涵體是否完全破裂，若尚未完全破裂，則
再加入 2ml 3XDAS，然後震盪 30 分鐘後，同樣以顯微鏡鏡檢至包涵體完全破裂，
當包涵體全部破裂，保存於 4℃冰箱。
將超高速離心管(BECKMAN Ultra-ClearTM Centrifunge Tubes)中製備好連續梯度之
糖液，由 35%、45%、55%、65%組成，然後將已破裂的包涵體，分別加入各個超
高速離心管之最上端，然後上超高速離心(BECKMAN COULTER OptimaTM L-90K
Ultracentrifuge, use SW41 Rotor)，於 4℃下 74000g 離心 1 小時，離心完畢後，拍照
記錄並將出現之環帶收集至離心管中，再加入 3 倍體積的 0.1X TE buffer 混勻，再
將其抽至超高速離心管(BECKMAN Ultra-ClearTM Centrifunge Tubes)中，然後上超
高速離心(BECKMAN COULTER OptimaTM L-90K Ultracentrifuge, use SW41
Rotor)，於 4℃下 74000g 離心 30 分鐘，離心完後，去除上清液，加入少量 1X TE buffer
回溶，使用桌上型震盪器，將其混勻，再分裝至微量離心管(eppendoff)中，保存於
4℃冰箱。
四、病毒基因體之純化
每管微量離心管(eppendoff)中加入 1/10 倍體積的 proteinase，1/10 倍體積的
10%SDS，1/10 倍體積的 KCL，小心混合均勻，再放置於水浴槽，於 65℃下 3 小
時，然後加入等體積的 phenol chloroform，小心混合均勻，然後使用桌上型離心機，
於 4℃下 10000g 離心 10 分鐘，抽取上清液至微量離心管(eppendoff)中。加入等體
積的 chloroform，小心混合均勻，然後使用桌上型離心機，於 4℃下 10000g 離心
10 分鐘，最後抽取上清液至微量離心管(eppendoff)中。加入 1/10 倍體積的 NaOAC
8
(3M Sodium acetate)，2 倍體積的 100%酒精，小心混合均勻，然後放入- 80℃冰箱
中 30 分鐘，然後放置桌上型離心機，於 4℃下 10000g 離心 30 分鐘，去除上清液，
加入少量 70%酒精，並馬上倒掉，放入真空乾燥機中進行乾燥，不能過乾，最後
加入 50μl 1X TE buffer 回溶，保存於 4℃冰箱。
五、確認是否抽到病毒基因體
從被病毒感染後的細胞中獲得之病毒，純化病毒之基因體 DNA，基因體 DNA 與
限制酶 HindIII、Bsp1286I（TaKaRa 和 biolab）反應體積 10μl，放置 37℃水浴槽 3
小時，注入製備好之 agarose gel（VEGONIA），以電壓 20V 下跑其膠體，顯影。
9
肆、結果
圖 1 斜紋夜蛾幼蟲尚未餵食病毒的狀態。此圖的幼蟲蟲齡為三 ~ 四齡，身體呈現
深黑色。
10
圖 2 斜紋夜蛾餵食病毒後的狀態。當蟲體受到病毒感染時，其身體會腫大且出膿。
圖 3 斜紋夜蛾核多角體病毒─TW 包涵體(10µl)的鏡檢。在顯微鏡下，其光點的部
分為包涵體病毒。
11
圖 4 斜紋夜蛾核多角體病毒─TW 包涵體(10µl)的鏡檢。在顯微鏡下，未有光點出
現，其表示包涵體全部破裂。
圖 5 糖梯高速離心。病毒包涵體之純化，超高速離心後，各層糖梯的環帶由下至
上，分別為 65%、55%、45%、35%。
12
M
DC
DC
TW
TW
M
圖 6 病毒 DNA 電泳。M 為 marker，斜紋夜蛾核多角體病毒株─DC、斜紋夜蛾核
多角體病毒株─TW 與限制酶 HindIII、Bsp1286I 反應後之膠體圖。
13
M
WF
DC
TT
M
圖 7 病毒 DNA 電泳。WF DC TT M 為 marker，斜紋夜蛾核多角體病毒株─WF、斜
紋夜蛾核多角體病毒株─DC、斜紋夜蛾核多角體病毒株─TT 與限制酶 HindIII 反應
後之膠體圖。
14
伍、參考文獻
【1】施劍瑩、徐碧華。1981。斜紋夜盜之生物特性、生命表及內在增殖率。台灣
第三屆蘆筍學術研討會試驗研究報告,53-59 頁。
【2】鄭允。1984。蔬菜鱗翅目害蟲之化學防治及抗藥性。蔬菜害蟲研討會專刊,
pp.100-110。
【3】靳子蓉。2005。引發昆蟲流感病毒─核多角體病毒。科學發展期刊，391 期。
韋焜寶。2009。加州苜蓿夜蛾核多角體病毒之變異株的特性比較。南台科技大學
生物科技研究所碩士論文。
【4】Akinfenwa, S. 1975. Biolcological study of Maruca testulalis (Geyer)
(Lepidoptera:Pyralidae) in the Zaria area of northern Nigeria. M. Sc. Thesis, Deprtment
of Crop Protection, Ahmadu Bello University,Zaria, Nigeria.
【5】Ayres, M. D., Howard, S. C., Kuzio, J., Lopez-Ferber, and M.Possee, R. D. 1994.
The complete DNA sequence of Autographa californica nuclear polyhedrosis
virus.Virology. 202,586-605.
【6】Bauser, C.A., Elick, T. A., and M.J.Fraser. 1996. Characterization of hitchhiker, a
transposon insertion frequently associated with baculovirus FP mutants derived upon
passage in the TN-368 cell line. Virology 216: 235-237.
【7】Barrion, A. T., J. P. Bandong, C. G., Cruz, R. F., and Aposts, J. A. Litsinger. 1987.
Natural enemies of the bean pod borer Maruca testulatis in the Philippines. Trop. Grain
Legume Bull.34: 21-22.
【8】Bilimoria, S. L. 1986. Taxonomy and identification of baculoviruses. In ‘‘The
Biology of Baculoviruses’’ (R. R. Granados and B. A. Federici, Eds.), Vol. 1, pp. 37–59.
CRC Press, Boca Raton, FL.
【9】Booker, R. H. 1963. Notes on the pest complex of cowpea in Northern
Nigeria.Proc. 1st Nigerian Grain Legume Conf.Inst. Agri. Res., Samaru, Zaria, Nigeria,
pp. 9-12.
【10】Bulach, D. M., C. A. Kumar, A. Zaia, B. Liang, and D. E. Trible. 1999. Group II
nucleopolyhedrovirus subgroups revealed by phylogenetic analysis of polyhedrin and
DNA polymerase gene sequences. J. Invertebr. Pathol. 73: 59-73.
【11】Chakraborty, S., and Reid, S. 1998 . Serial Passage of a Helicoverpa armigera
Nucleopolyhedrovirus in Helicoverpa zea Cell Cultures.Journal of Invertebrate
Pathology 73,303-308.
【12】Chen, T. R., Wu, C. Y., Lee, S. T., Wu, Y. J., Lo, C. F., Tsai, M. F., and Wang, C.
H. 2008. Genomic and host range studies of Maruca vitrata nucleopolyhedrovirus. J
Virol 89,2315-2330.
【13】Cheng, X., Carner, G. R., and Fescemyer, H. W. 1998. Polyhedrin sequence
determines the tetrahedral shape of occlusion bodies in Thysanoplusia orichalcea
single-nucleocapsid nucleopolyhedrovirus.J.Gen,Virol.79,2549-2556
【14】David R. O’Reilly, Lois K. Miller, and Verne A. Luckow(1992).Baculovirus
expression vectors-a laboratory manual. W.H. Freeman and Company, New York
【15】Engelhard, E. K., Kam-Morgan, L. N. W., Washburn, J. O., and Volkman, L. E.
15
1994. The insect tracheal systerm:A conduit for the systemic sporead of Autographa
californica M nuclear polyhedrosis virus. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91, 3224-3227
【16】Granados, R. R., and Williams, K. A. 1986. In vivo infection and replication of
baculoviruses. In ‘‘The Biology of Baculoviruses’’(R. R. Granados and B. A. Federici,
Eds.), Vol. 1, p p. 90–108. CRC Press, Boca Raton, FL.
【17】Guzo, D., Rathburn, H., Guthrie, K., and Dougherty, E. 1992. Viral and host
cellular transcription in Autographa californica nuclear polyhedrosis virus-infected
gypsy mmoth cell lines. J. Virol. 66, 2966-2972.
【18】Harrap, K. 1972. The structure of nuclear polyhedrosis viruses. J. Virology 50.
114–123.
【19】Harrae, K. A. and Longworth, J. F. 1974. An evaluation of purification methods
for baculoviruses. Journal of Invertebrate Pathology 24, 55-62.
【20】Huang, A. S., and Baltimore, D. 1970. Defective viral particles and viral disease
processes. Nature 226: 325-327.
【21】Harrison, R.R., and Summer, M. D. 1995. Mutations in the Autographa
californica multinucleocapsid nuclear polyhedrosis virus 25kDa protein gene result in
reduced virion occlusion, altered intranuclear envelopment and enhanced virus
production. J.Gen.Virol.76,1451-1459
【22】Hitchman, R. B. 2002. Pathogen dynamics and variation in insect population.
Ph.D.thesis. Oxford Brookes University,UK.
【23】Hicks, B.J. 2001.The history,ecology and potential control of the pine beauty
moth, Panolis flammea（Lepidoptera:Noctuidae）in Scotland. Ph.D. thesis, University of
Aberdeen, UK.
【24】Hink, W. F., and Strauss, E. 1976. Replication and passage of alfalfa looper
nuvlear polyhedrosis virus plaque variant in cloned cell cultures and larval stages of
four host species. J. Invertebr. Pathol. 27, 49-55.
【25】Jehle, J. A., Blissard, G. W., Bonning, B. C., Cory, J. S., Herniou, E. A.,
Rogrmann, G. F., Theilmann, D. A., Thiem, S. M. and Vlak, J. M. 2006. On the
classification and nomenclature of baculovirus:a proposal for revision. Arch Virol 151,
1257-1266.
【26】Keddie, B.A. and Volkman, L.E. 1985. Infectivity difference between the two
phenotypes of the 64K envelope glycoprotein. J. Gen. Virol. 66.1195-1200.
【27】Krell, P. J. 1996. Passage effect of virus infection in insect cells. Cytotechnology
20:125-137.
【28】Kamita, S.G., and Maeda, S. 1993. Inhibition of Bombyx mori nuclear
polyhedrosis virus（NPV）replication by the putative DNA helicasee gene of Autographa
californica NPV. J.Virol.67, 6239-6245.
【29】Katou, Y., Ikeda, M., and Kobayashi, M. 2006. Abortive replication of Bombyx
mori nucleopolyhedrovirus in Sf-9 and High Five cell:Defective nuclear transport of the
virions.Virology 347, 455-465
【30】Lauzon, H. A., Lucarotti, C. J., Krell, P. J., Feng, O., Retnakaran, A. and Arif, B.
M. 2004. Sequence and organization of the Neodiprion lecontei nucleopolyedrovirus
genome.J Virol 78,7023-7035.
【31】Lee, S. T., Srinivasan, R., LO, Y. J. and Talekar, N. S. 2007.
Identification,characterization and bioassays of Marua vitrata multiple
nucleopolyedrovirus（MaviNPV）against Maruca vitraya
（Lepidoptera,Pyralidae）.BioControl 52,801-819.
16
【32】Lin, G., and lissard, G. W. 2002. Analysis of an Autographa californica
multicapsid nucleopolyhedrovirus lef-6-null virus: LEF-6 is not essential for viral
replication but appears to accelerate late gene transcription J. Virol.76, 5503-5514.
【33】Linda M. Reillyt and Linda A. Guarino, 1994. The pk-1 gene of Autographa
californica multinucleocapsid nuclear polyhedrosis virus encodes a protein kinase
Journal of General Virology, 75, 2999-3006
【34】Okano H, Onmori R, Tomita N, and Ikada Y. 2006. Effects of a
moderate-intensity static magnetic field on VEGF-A stimulated endothelial capillary
tubule formation in vitro. Bioelectromagnetics 27:628–640.
【35】Pearson, M. N., and Rohrmann, G. F. 2002. Transfer, incorporation, and
substitution of envelope fusion proteins among the Baculoviridae,Orthomyxoviridae,
and Metaviridae (insect retroviruses). J. Virol. 76,5301-5304.
【36】Pham DQ, Hice RH, Sivasubramanian N, and Federici BA. 1993. The 1629-bp
open reading frame of the Autographa californica multinucleocapsid nuclear
polyhedrosis virus encodes a virion structural protein.Gene. 31;137(2):275-80.
【37】Pijlman, G. P., E. V. D. Born, D. E. Marten, and J. M. Vlak. 2001. Autographa
californica baculoviruses with large genomic deletions are rapidly generated in infected
insect cells. Virology 283: 132-138.
【38】Rohrmann, G.F. 1999. Nuclear polyhedrosis viruses. In: Webster, R.G., Granoff, A.
(Eds.), Encyclopedia of Virology, 2nd ed. Academic Press, London, UK.
【39】Summers, M and Anderson, D. 1972. Granulosis virus deoxyribo-nucleic acid: a
closed bouble-stranded molecule. J. Virology 9. 710–713.
【40】Suzanne M. Thiem. 1997 .Prospects for altering host range for baculovirus
bioinsecticides. Current Opinion in Biotechnology 8;317-322.
【41】Slavicek, J, M., Mercer, M. J., Kelly. M. E., and Hayes-Plazolles, N. 1996.
Isolation of a baculovirus variant that exhibits enhanced polyhedra production stability
during serial passage in cell culture. J.Invertebr. Pathol.67,153-160.
【42】Taylor, T. A. 1978. Maruca testulalis: an important pest of tropical grain legumes.
pp. 193-202. In: S. R. Singh, H.F. Van Emden and T. A. Taylor, eds.Pests of Grain
Legumes: Ecology and Control. Academic Press, New York.
【43】Tweeten, K. A., Bulla, L. A., and Consigli, R. A. 1980. Characyerization of an
extremely basic protein derived from granulosis virus nucleocapsids. J. Virology 33.
866–876.
【44】Volkman, L. E., Goldsmith, P. A., Hess, R. T., and Faulkner, P. 1984.
Neutralization of budded Autographa californica NPV by a monoclonal antibody:
identification of the target antigen. Virology 133, 354-362.
【45】Weitzman, M. D., Possee, R. D., and King, L.A. 1992. Characterization of two
variants of panolis flammea nuclear polyhedrosis virus. J. Gen Virol.73,1881-1886.
【46】Wilson, M. 1991. Baculoviridae. In “Archives of virology supplementum
2:Classification and nomenclature of virus”pp117-123. Springer-Verlag, New York.
【47】Winstanley, D., and O’Reilly, D.R. 1999. Granuloviruses. In: Webster,
R.G.,Granoff, A. (Eds.), Encyclopedia of Virology, 2nd ed. Academic Press, London,
UK.Wood, H. A., 1980. Isolation and replication of an occlusion body-deficient mutant
of the Autographa californica nuclear polyhedrosis virus. Virology 105,338-44.
【48】Yeh, S. C., Lee, S. T., Wu, C. Y. and Wang, C. H. 2007. A cell line (NTU-MV)
established from Maruca vitrata (Lepidoptera: Pyralidae): characterization, viral
susceptibility, and polyhedra production. J Invertebr Pathol 96, 138–146.
17
【49】Zanotto, P. M., B. D. Kessing, and J. E. Maruniak. 1993. Phylogenetic
interrelationships among baculoviruses: evolutionary rates and host associations. J.
Invertebr. Pathol. 62:147-164.
18