UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO PUNO FACULTAD CIENCIAS AGRARIAS “ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL” INFORME DE LA PRACTICA N° 3: EVALUACIÓN FISICOQUÍMICA Y MICROBIOLÓGICA DE LA MUESTRA DE CARNE DE RES: DETERMINACIÓN DE PH, ACIDEZ TITULABLE Y RECUENTO DE AGAR PLATE COUNT, AGAR SALMONELA SPP. CURSO: MICROBIOLOGIA AGROINDUSTRIAL II DOCENTE: ING. JUAN QUISPE CAMA PRESENTADO POR: PEÑASCO VELASQUEZ GLADYS NELY PUNO - PERU 2025 – I ÍNDICE: 1. INTRODUCCIÓN................................................................................................................................... 3 2. OBJETIVOS ........................................................................................................................................... 3 3. MARCO TEÓRICO................................................................................................................................. 3 3.1. Importancia de la carne de res como producto alimenticio .................... Ошибка! Закладка не определена. 3.2. Calidad fisicoquímica de la carne de res ............................Ошибка! Закладка не определена. 3.3. Análisis Microbiológico y Seguridad Alimentaria...............Ошибка! Закладка не определена. 3.4. Microbiología y seguridad alimentaria en la carne de res .Ошибка! Закладка не определена. 3.5. Importancia del control microbiológico en la carne de res ..................... Ошибка! Закладка не определена. 4. MATERIALES, EQUIPOS, MEDIOS DE CULTIVO, REACTIVOS, MUESTRAS Y MÉTODO ......................... 6 4.1. Materiales de laboratorio ............................................................................................................ 6 4.2. Equipos ......................................................................................................................................... 6 4.3. Medios de cultivo ......................................................................................................................... 7 4.4. Reactivos químicos....................................................................................................................... 7 4.5. Muestras analizadas..................................................................................................................... 7 5.1. Preparación de las muestras ..............................................Ошибка! Закладка не определена. 5.2. Determinación de pH .........................................................Ошибка! Закладка не определена. 5.3. Determinación de Acidez Titulable ....................................Ошибка! Закладка не определена. 5.4. Recuento de Agar PLATE COUNT, Agar SALMONELLA SPP Ошибка! Закладка не определена. 6. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL ..................................................................................................... 11 6.1. Preparación de materiales y esterilización ........................Ошибка! Закладка не определена. 6.2. Preparación del medio de cultivo Agar Plate Count, Agar Salmonella SPP ...Ошибка! Закладка не определена. 6.3. Esterilización del medio de cultivo ....................................Ошибка! Закладка не определена. 6.4. Preparación de la muestra de carne ..................................Ошибка! Закладка не определена. 6.5. Determinación del pH en la carne de res...........................Ошибка! Закладка не определена. 6.6. Vertido del medio en placas Petri ......................................Ошибка! Закладка не определена. 6.7. Dilución y siembra de la muestra.......................................Ошибка! Закладка не определена. 6.8. Incubación de las placas.....................................................Ошибка! Закладка не определена. 7. RESULTADOS Y DISCUSIÓN ............................................................................................................... 17 8. CONCLUSIONES ................................................................................................................................. 20 9. Referencias........................................................................................................................................ 21 1. INTRODUCCIÓN La carne de res es un alimento altamente susceptible a la contaminación microbiológica debido a su contenido de humedad, nutrientes y pH. Para garantizar su seguridad, se realizan evaluaciones fisicoquímicas y microbiológicas que incluyen determinaciones como el pH, la acidez titulable, y el recuento de microorganismos, como el Agar Plate Count y la determinación de Salmonella spp. Estas pruebas son fundamentales para evaluar la calidad y la seguridad de la carne en la industria alimentaria. 2. OBJETIVOS Objetivo General Evaluar la calidad microbiológica de la carne de res mediante la determinación de la carga microbiana total y la presencia de Salmonella spp., utilizando medios de cultivo como Agar Plate Count y agar Salmonella spp., con el fin de garantizar su inocuidad y cumplir con las normativas sanitarias vigentes. Objetivo Especifico 1. Cuantificar la carga microbiana total en muestras de carne de res mediante la técnica de siembra en medio Agar Plate Count. 2. Detectar y aislar Salmonella spp. en las muestras de carne utilizando agar Salmonella spp. como medio selectivo. 3. Evaluar la presencia de microorganismos patógenos y su posible impacto en la seguridad del producto. 4. Comparar los resultados microbiológicos con los límites establecidos por las normativas alimentarias y definir acciones correctivas si es necesario. 5. Analizar cómo los parámetros microbiológicos y fisicoquímicos se relacionan con la calidad y seguridad de la carne en las diferentes etapas de almacenamiento. 3. MARCO TEÓRICO 3.1. Importancia de la carne de res como producto alimenticio La carne de res constituye uno de los principales alimentos de origen animal en muchas culturas a nivel mundial. Es una fuente fundamental de proteínas de alto valor biológico, hierro hemo y vitaminas del complejo B. Según Díaz Huanca (2024), la calidad microbiológica y fisicoquímica de la carne de res influye directamente en su valor nutricional, seguridad y aceptabilidad sensorial. Sin embargo, por su naturaleza y proceso de producción, puede ser un vehículo para la transmisión de microorganismos patógenos si no se mantiene bajo condiciones higiénico-sanitarias estrictas, lo que ha llevado a que los controles microbiológicos sean una parte esencial en la industria cárnica para garantizar la inocuidad del producto. 3.2. Calidad fisicoquímica de la carne de res La evaluación de la calidad fisicoquímica de la carne de res incluye parámetros como pH, contenido de humedad, actividad del agua y color, que influyen en la conservación, textura y aceptación del consumidor. El pH en carne fresca suele estar en torno a 5.4 a 5.8; valores demasiado elevados o bajos pueden indicar alteraciones microbiológicas o procesos de spoiling. El pH también afecta la proliferación de microorganismos, ya que un pH bajo inhibe en parte el crecimiento bacteriano, incluyendo patógenos. La evaluación rutinaria de estos parámetros, utilizando instrumentos como pHmetros calibrados, permite detectar desviaciones que puedan reflejar una contaminación o mal manejo. Féliz et al. (2018) señalaron que cambios en el pH y la acidez titulable están relacionados con las condiciones de procesamiento y almacenamiento, siendo indicadores confiables de la frescura y calidad microbiológica del producto cárnico. 3.3. Microbiología y seguridad alimentaria en la carne de res La carne de res puede estar contaminada por un amplio espectro de microorganismos, incluyendo bacterias patógenas como Salmonella spp., Listeria monocytogenes, Escherichia coli O157:H7, Clostridium perfringens y Campylobacter spp.. Entre estos, Salmonella spp. y Listeria monocytogenes son de particular preocupación en productos cárnicos por su potencial de causar enfermedades graves en humanos. La detección de estos patógenos requiere técnicas microbiológicas específicas, que incluyen el uso de medios selectivos y diferenciadores como el agar Salmonella spp. y el agar Oxford, entre otros. Estudios realizados por Monje y Del Pilar (2023) resaltan que estos medios permiten distinguir colonias por su morfología característica, facilitando la identificación presumptive en menos tiempo y con mayor precisión. El control microbiológico también abarca el recuento de la carga bacteriana total mediante técnicas como la placa en medios como Agar Plate Count, que tiene como objetivo cuantificar la población total de microorganismos aeróbicos mesófilos. Este recuento ayuda a evaluar el nivel de higiene durante el proceso de faenado, manipulación y almacenamiento. Según Ramírez Cambo (2025), la presencia de altos recuentos está asociado con condiciones higiénico-sanitarias deficientes, disminuyendo la vida útil del producto y aumentando el riesgo de presencia de patógenos. 3.4. Técnicas microbiológicas y medios de cultivo Para la detección y cuantificación de microorganismos en la carne de res, el método estándar involucra la preparación de diluciones seriadas de las muestras, la siembra en medios específicos y la incubación en condiciones controladas de temperatura y tiempo. Agar Plate Count es un medio nutritivo y no selectivo que permite determinar la carga microbiana total, misma que debe mantenerse dentro de los límites establecidos por las normativas internacionales para garantizar la calidad del producto. Por su parte, Agar Salmonella spp. es un medio selectivo y diferenciado que inhibe el crecimiento de flora no patógena y favorece el aislamiento de Salmonella. Este medio contiene ingredientes como cloruro de litio, acriflavina y cefotetan, que suprimen la flora competidora y permiten identificar colonias por su morfología característica (colonias rojas o transparentes, con o sin precipitados). La confirmación definitiva suele realizarse mediante pruebas bioquímicas complementarias, como la prueba de motilidad o identificación mediante técnicas inmunoquímicas o moleculares. 3.5. Importancia del control microbiológico en la carne de res El control estricto de los microorganismos en la carne de res no solo reduce el riesgo de enfermedades transmitidas por alimentos, sino que también prolonga la vida útil del producto al disminuir la carga microbiana en su superficie y dentro de los tejidos. La implementación de buenas prácticas de higiene, manejo adecuado de la cadena de frío y rutinas de análisis microbiológicos son esenciales para cumplir con los requisitos normativos establecidos por agencias reguladoras como la FDA, la EFSA y las regulaciones nacionales. El uso de medios selectivos como Agar Salmonella spp. y técnicas de recuento en placa facilita la detección rápida y efectiva de potenciales contaminantes, permitiendo a las industrias tomar medidas inmediatas en caso de resultados no conformes. La vigilancia microbiológica en la carne de res contribuye también a fortalecer la confianza del consumidor y a promover prácticas de producción segura y responsable. 4. MATERIALES, EQUIPOS, MEDIOS DE CULTIVO, REACTIVOS, MUESTRAS Y MÉTODO 4.1. Materiales de laboratorio Los materiales utilizados en esta práctica fueron seleccionados para realizar mediciones fisicoquímicas y procesos microbiológicos de forma segura y precisa: Vasos de precipitado (100 y 250 mL) Probetas graduadas Pipetas graduadas (1 y 10 mL) Tubos de ensayo Frascos de dilución estériles Cajas Petri estériles Varillas de agitación Bureta de 25 mL Gradilla porta tubos Toallas de papel desechables Marcadores indelebles Cajas porta muestras 4.2. Equipos Se utilizaron instrumentos de laboratorio para la medición precisa de parámetros fisicoquímicos y para mantener condiciones de cultivo adecuadas: pHmetro digital calibrado Balanza analítica (precisión 0.01 g) Estufa de incubación a 37 °C Refrigerador (4 °C) Cabina de flujo laminar Autoclave Baño María Mechero Bunsen Termómetro digital Agitador magnético 4.3. Medios de cultivo Agar Plate Count: medio para determinar la carga bacteriana total en las muestras de carne de res, ayudando a evaluar la higiene y condiciones de conservación. Agar Salmonella spp.: medio selectivo y diferencial para la detección específica de Salmonella spp. en las muestras. Contiene ingredientes que inhiben bacterias competidoras y permiten identificar colonias sospechosas de Salmonella. Estos medios se prepararon siguiendo protocolos en condiciones asépticas, según las instrucciones de los fabricantes, para asegurar su calidad y correcto funcionamiento en los análisis microbiológicos. 4.4. Reactivos químicos Los reactivos utilizados fueron preparados en condiciones estériles y conforme a los protocolos estandarizados: Hidróxido de sodio (NaOH) 0.1 N Solución buffer para calibración de pHmetro (pH 4.0, 7.0) Indicador fenolftaleína al 1% Agua destilada y esterilizada Solución peptonada 0.1% (diluyente microbiológico) Alcohol etílico al 70% para desinfección 4.5. Muestras analizadas Se trabajó con muestras de carne de res frescas, adquiridas en condiciones controladas y de diferentes lotes o días de compra para garantizar la variedad en los análisis: Carne de res cruda, sin aditivos ni condimentos, en condiciones de frescura y dentro de su plazo de consumo. Se emplearon 3 muestras distintas (de diferente lote o día de adquisición) para contrastar parámetros microbiológicos. Almacenamiento previo: las muestras se conservaron a 4 °C hasta su análisis, siguiendo los criterios de cadena de frío, con el fin de mantener la calidad y evitar contaminaciones durante su traslado y almacenamiento. 5. METODOLOGÍA La presente práctica se llevó a cabo en el laboratorio de microbiología agroindustrial bajo condiciones controladas de asepsia, con el objetivo de determinar parámetros fisicoquímicos (pH y acidez titulable) y microbiológicos (recuento de Salmonella spp. y conteo total de aerobios mesófilos) en muestras de carne de res. El proceso se realizó siguiendo normas técnicas estandarizadas y protocolos documentados. 5.1. Preparación de las muestras Muestra: Se selecciona aproximadamente 25 g de carne de res fresca, preferiblemente del músculo del muslo o lomo, cortada en cubos pequeños, en condiciones higiénicas. La muestra debe representativa y tomada en condiciones asépticas para evitar contaminación externa. Homogeneización: La carne se homogeniza en un homogeneizador mecánico en 225 mL de solución peptonada (0.1%) esterilizada, formando una suspensión homogénea. Esto permite distribuir uniformemente las bacterias y facilitar el análisis microbiológico y fisicoquímico. Diluciones: Para obtener enumeraciones microbiológicas precisas, se realizan diluciones en serie decimales (10⁻¹, 10⁻², 10⁻³...) usando solución peptonada estéril como diluyente. 5.2. Determinación de pH El pH es un parámetro fundamental que indica el estado de frescura y calidad de la carne. Un pH dentro de un rango adecuado (5.4 - 5.8) indica carne fresca, mientras que valores más altos pueden señalar deterioro, inmunidad microbial comprometida o procesos de descomposición. Procedimiento: Calibración: Se calibra el pHmetro con soluciones buffer pH 4.0 y 7.0, asegurando mediciones precisas. Muestra: Se toma exactamente 9 mL, colocándola en un vaso de precipitado limpio y seco. Medición: Se introduce el electrodo en la muestra, asegurando que quede en contacto con la masa de carne, y se registra el valor de pH una vez que la lectura se estabiliza. Se realiza en al menos triplicado para obtener un valor promedio. Resultado esperado: Para carne fresca, pH en torno a 5.4 - 5.8. Valores significativamente fuera de este rango requieren mayor análisis microbiológico y sensorial. 5.3. Determinación de Acidez Titulable La acidez titulable refleja la cantidad de ácidos lácticos y otros ácidos producidos durante las procesos de fermentación o deterioro. Es un indicador clave de frescura y calidad microbiológica. Procedimiento: Pesado y Toma de Muestra: Se pesan 10 g de carne homogenizada en un vaso de precipitado limpio. Dilución: Se añaden 9 mL de agua destilada estéril, agitando suavemente para extraer los ácidos. Indicador: Se agregan 3 gotas de fenolftaleína, que indica el viraje de ácido a base en la titulación. Titulación: Se titula lentamente con NaOH 0.1 N, agitando continuamente, hasta que se observe un viraje rosado pálido y persistente durante al menos 30 segundos. Cálculo de la acidez: Se emplea la fórmula: 𝑚𝐿 NaOH×N×0.09 Acidez (% acido láctico) = 𝑝𝑒𝑠𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 (𝑔) donde: N=0.1 (Normalidad del NaOH) 0.09 es el factor de conversión para ácido láctico. 5.4. Recuento Microbiológico 5.4.1. Recuento de Salmonella spp. en Agar Salmonella spp. Preparación del medio y siembra: Se reconstituyó el medio de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se esterilizó en autoclave a 121 °C durante 15 minutos. Se vertió en placas Petri y se dejó solidificar. Se realizaron diluciones decimales de las muestras en solución peptonada estéril (hasta 10⁻⁴). Se sembraron 1 mL de cada dilución mediante el método de estriado en la superficie del medio Agar Salmonella spp. Las placas se incubaron a 37 °C durante 24 a 48 horas en posición invertida. Identificación: La presencia de colonias específicas de Salmonella spp. se identificó mediante características culturales típicas (color, forma, olor). 5.4.2. Recuento Total de Aerobios Mesófilos en Agar Plate Count Preparación del medio y siembra: Se reconstituyó el medio de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se esterilizó en autoclave a 121 °C durante 15 minutos. Se vertió en placas Petri y se dejó solidificar. Se realizaron diluciones decimales de las muestras en solución peptonada estéril (hasta 10⁻⁴). Se sembraron 1 mL de cada dilución mediante el método de estriado superficial. Las placas se incubaron a 37 °C durante 24 a 48 horas en posición invertida. Cálculo del recuento: 𝑈𝐹𝐶 𝑁𝑢ˊ𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖𝑎𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑑𝑎𝑠 × 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜ˊ𝑛 = 𝑔 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑠𝑒𝑚𝑏𝑟𝑎𝑑𝑜 (𝑚𝐿) Se seleccionó la dilución con un recuento entre 25 y 250 colonias para asegurar confiabilidad. 6. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL 6.1. Preparación de los Materiales Pesaje de los reactivos: Se pesaron los reactivos necesarios para la preparación de los medios de cultivo, como el Agar Plate Count y el Agar Salmonella spp.. La carne se pesa cuidadosamente usando una balanza de precisión (ver imágenes de la balanza con la carne y los reactivos). El peso de la carne es un paso crucial para determinar la proporción de muestra a utilizar en cada prueba. 6.2 Preparación de los frascos y materiales: Se prepararon frascos de vidrio estériles, los cuales serán utilizados para el cultivo y la medición de los parámetros fisicoquímicos. Los frascos se sellaron con cinta y etiquetados correctamente para evitar confusión. 6.3 Preparación de la Muestra de Carne Trituración de la Carne: La carne de res fue triturada utilizando una licuadora o mezclador para obtener una muestra homogénea, que posteriormente se utilizaría en las pruebas microbiológicas. La carne se tritura para liberar los nutrientes necesarios para el crecimiento de los microorganismos en el medio de cultivo. 6.4 Medición del pH de la Carne: Se determinó el pH de la carne utilizando un medidor de pH para evaluar su acidez. El pH es un parámetro crítico, ya que influye directamente en la viabilidad de microorganismos patógenos y en las características sensoriales de la carne. 6.5 Preparación de los Medios de Cultivo Preparación del Agar Plate Count: Se preparó el Agar Plate Count según las indicaciones del fabricante. Este medio es utilizado para el recuento de bacterias mesófilas aerobias presentes en la carne. Se disolvieron los reactivos en agua destilada y se esterilizaron en una autoclave a 121°C para asegurar la eliminación de cualquier microorganismo contaminante. Preparación del Agar Salmonella spp.: Se preparó el Agar Salmonella spp., específicamente diseñado para la detección de la bacteria Salmonella. Este agar se usó para realizar el análisis de presencia de este patógeno en la carne. 6.6 Inoculación y Siembra Inoculación de las Placas de Agar: La muestra triturada de carne se sembró en las placas de agar, utilizando una técnica de siembra en superficie, asegurando una distribución uniforme de la muestra. Las placas fueron incubadas en una estufa de cultivo a 37°C por 24 a 48 horas, lo que permitió el crecimiento de las bacterias presentes. 6.7 Análisis de la Acidez Titulable 1. Determinación de la Acidez: La acidez titulable se determinó mediante la neutralización con una solución de base fuerte (como NaOH), utilizando un indicador para observar el punto final de titulación. Este proceso es fundamental para determinar la capacidad de la carne para resistir la descomposición y la proliferación bacteriana. 6.8 Recuento Microbiológico 1. Crecimiento en las Placas de Agar: Después de la incubación, las colonias bacterianas fueron contadas en las placas de Agar Plate Count. La cantidad de colonias obtenidas se utilizó para calcular la carga bacteriana total de la carne de res. En las placas de Agar Salmonella spp., se identificaron las colonias sospechosas de ser Salmonella y se confirmaron con pruebas adicionales si es necesario. 6.9 Esterilización y Limpieza 1. Desinfección del Material: Al final del procedimiento, todo el material utilizado (frascos, frascos de vidrio, balanzas, etc.) fue desinfectado y esterilizado nuevamente, siguiendo los protocolos de seguridad del laboratorio. 7. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 1. Resultados de Medios de Cultivo: Medio de Cultivo Agar Plate Count Concentración para 100 Concentración por ml Cantidad para 60 ml (g) (g) ml (g) 23.5 0.235 3.78 0.063 3.78 Agar Salmonella 63 spp. 2. Procedimiento de Titulación y Medición de pH: Parámetro Valor Obtenido Dilución Realizada 10^-1 Titulación (gasto) 0.12 pH de la Carne 5.85 Temperatura 15.0°C 3. Recuento de Colonias Microbianas: Placa Colonias Observadas Placa -1 7 Placa -2 27 Placa -3 2 Imagen Placa -1 Totalmente cubierto Placa -2 15 Placa -3 11 4. Observaciones: Observación: El pH de la carne es adecuado para el crecimiento de ciertos microorganismos. El recuento microbiológico muestra una alta cantidad de colonias en algunas placas. La presencia de colonias sugiere una posible contaminación bacteriana en la muestra. 8. CONCLUSIONES 1. El análisis microbiológico de la carne de res muestra una carga bacteriana significativa, con un alto número de colonias observadas en las placas de Agar Plate Count. Esto indica que la carne puede tener una contaminación considerable, lo que sugiere la necesidad de mejorar los procesos de manejo y conservación para evitar el crecimiento bacteriano excesivo. 2. La siembra en Agar Salmonella spp. mostró crecimiento bacteriano, lo que podría ser indicativo de la presencia de Salmonella, un patógeno altamente peligroso para la salud humana. Esto resalta la importancia de realizar pruebas rutinarias de Salmonella en la carne, especialmente en productos crudos. 3. El pH de la carne de res, medido a 5.85, está dentro de un rango que es favorable para el crecimiento de diversas bacterias, lo que refuerza la necesidad de controlarla adecuadamente para minimizar el riesgo microbiológico. Además, el proceso de titulación para determinar la acidez titulable, cuyo valor no se especificó, proporciona información adicional sobre la calidad de la carne y su capacidad de conservación. 4. El manejo adecuado de la carne, así como la preparación de medios de cultivo, son fundamentales para la obtención de resultados confiables en los análisis microbiológicos. El uso de materiales estériles y la correcta medición de reactivos son clave para evitar contaminaciones cruzadas y asegurar la exactitud en los resultados. 5. Dado el crecimiento bacteriano observado, es recomendable implementar medidas adicionales de higiene y control en el proceso de manejo de la carne de res. Esto incluye el control de la temperatura de almacenamiento, el uso de conservantes adecuados y la implementación de sistemas de monitoreo microbiológico continuo para garantizar la seguridad alimentaria. 6. Las técnicas utilizadas en este trabajo, como la medición de pH, la titulación de acidez y el recuento microbiológico, son esenciales para evaluar la calidad y seguridad de los productos cárnicos. Su aplicación regular en la industria cárnica contribuye significativamente a la prevención de brotes de enfermedades transmitidas por alimentos. 9. REFERENCIAS Becerril Sánchez, A. L., & Dublán García, O. (2019). La calidad sanitaria del chorizo rojo tradicional que se comercializa en la ciudad de Toluca, Estado de México. Revista Mexicana de Ciencias Pecuarias, 10(2), 35-45. https://www.scielo.org.mx/scielo.php?pid=S200711242019000100172&script=sci_arttext González, M., Hurtado, E., & Gamboa, L. (2008). Tiempo de vida útil de panquecas elaboradas a base de harina de trigo (Triticum aestivum L.) y zanahoria (Daucus carota). Redalyc, 12(4), 100-110. https://www.redalyc.org/pdf/4277/427739434008.pdf Jarrín Jarrín, V. F. (2016). Efecto del sobrenadante de lactobacillus plantarum Y lactobacillus lactis sobre Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Clostridium perfringens y Staphylococcus aureus en productos cárnicos. Sired Udenar. https://sired.udenar.edu.co/9049/ Vásquez Véliz, G. K. (2007). Del efecto de la reducción de la actividad de agua, pH y adición de ácidos orgánicos en el crecimiento de Escherichia coli en filetes de res almacenados a temperatura de refrigeración. Revista de Tecnología Alimentaria, 6(2), 12-18. https://repositorio.utb.edu.ec/handle/49000/18094 Villarroel-Bastidas, J. (2024). Efecto del mucílago de cacao en la bioconservación de carnes. Informacion Tecnica, 20(4), 56-67. https://www.aida-itea.org/aidaitea/files/itea/revistas/2024/120-3/(269-287)%20A103076%20120-3.pdf
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