2017년 2학기: 발효식품 제조 및 관리
2주. 배지의 제조
[1] 배지 제조법
1. 배지(culture medium)란?
 미생물이 필요로 하는 각종 영양소를 골고루 함유하는 물질.
 미생물의 영양소에는 탄소원, 질소원, 비타민류, 무기염 등이 있다.
 미생물의 종류와 성질에 따라 사용하는 배지의 조성은 각각 다르다.
 곰팡이와 효모용 배지는 pH 5.0∼6.0, 세균용 배지는 pH 7.0∼8.0으로 조절하는 것이
좋다. 배지의 pH가 최적 pH에서 지나치게 벗어나면 미생물의 생육은 거의 중지된다.
 조제된 배지는 건조나 변질을 막기 위하여 항상 빛이 들지 않는 찬 곳에 보존한다.
 미생물은 생리적 성질과 이용 목적에 알맞은 조건에서 배양하여야 한다.
2. 배지의 종류
(1) 성분종류에 따른 분류

천연배지: 천연물질로 만든 배지로 미생물의 증식, 분리, 배양에 사용
Ex) 국즙(koji extract), 맥아즙: 효모나 곰팡이
감자배지: 곰팡이

육즙(meat extract): 세균증식용 배지
합성배지: 화학적 성분이 분명한 순수한 물질로 제조한 최소영양배지로 최소영양배지로
미생물의 생화학적 성상, 균체성분, 대사 및 유전 등에 사용
(2) 물리적 성상에 따른 분류

액체배지(liquid medium, broth): agar를 첨가하지 않은 배지로 미생물의 증식, 당분해,
생화학적 성상, 대사산물 검출 등에 사용
 배양도중에 pH 변화나 교반이 필요한 경우.
 미생물의 대량 배양, 생리 화학적 연구에 이용.
Ex) Nutrient broth

고체배지(solid
medium):
고형화를
위해
agar를
첨가한
배지로
집락의
형태관찰,
순수분리, 장기보관 등에 사용

액체배지에 한천, 젤라틴 등을 첨가하여 제조한 것.

미생물의 순수분리, 보존, 배양 등에 이용.

종류로는 평판배지, 고층배지, 사면 배지 등이 있다.
Ex) Nutrient agar
* 멸균 후 냉각, 고화시킬 때 목적에 따라 사면배지, 고층배지, 평판배지 등으로 만든다.
▶평판배지: colony 를 형성시켜 미생물을 순수 분리할 때 사용
▶사면배지: 호기성세균의 배양 및 보존에 사용
▶고층배지: 젖산균 등의 혐기성균의 배양에 사용
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 평판배지(plate medium): Petri dish에 4 mm (15-20 mL) 두께로 굳힌 것으로 미생물 분
리, 배양, 집락관찰, 용혈능 및 항생제 감수성 검사 등
 사면배지(slant medium): 시험관에 고체배지를 30°경사로 굳힌 것으로 호기성 미생물
증식 및 보존, 생화학 검사 등
 고층배지(stab medium): 시험관에 고체배지를 수직으로 굳힌 것으로 미호기성균과 혐
기성균 배양, 균주보존, 세균 운동성 시험 등
[Fig. 1] 고체배지의 종류

반고체배지(semisolid medium): 젤리 같은 형상으로 소량(0.3-0,5%)의 agar를 첨가하여
세균의 설탕 이용성이나 운동성 관찰에 사용
(3) 사용목적에 따라

증식배지(growth medium): 여러 영양소를 적당량 함유하여 미생물 증식, 순수배양. 보존
등 일반적인 목적에 사용

증균배지(enrichment medium): 많은 균 중에서 특정 균종만을 빨리 증식시켜 분리하고자
특정 물질(증식 촉진 혹은 억제)을 첨가
 선택배지(selective medium): 목적하는 미생물의 생육을 증진시키고 다른 미생물은
생육을 억제하도록 만든 배지.
 감별배지(differential medium): 미생물의 생화학적 성질을 이용하여 여러 미생물이
혼재되어 있는 곳에서 목적하는 미생물을 판별 또는 확인하기 위해서 만들어진 배지로
특정 지시약 등을 배지에 첨가하여 균을 분리.
Ex) 장내 세균 분별- EMB배지
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3. 배지 제조법 실습 – 액체배지, 평판배지
: 실험 전 무균대(clean bench) 살균 - 70% 알코올, 자외선 등
(1) 액체배지 만드는 법
 준비물: 미량 저울(balance), 비커나 삼각 플라스크, 메스실린더, 자석교반기 + magnetic
bar, 테스트 튜브, 튜브마개, 호일, autoclave(고압 증기 멸균기), 무균대(clean bench),
알코올램프, 소독용 알코올
 방법
① 칭량: 미량 저울을 이용하여 배지재료와 증류수를 칭량– 비커나 삼각플라스크 사용
② 용해: 증류수를 일부 넣는다.
자석교반기와 마그네틱 바를 이용하여 잘 섞어준다.
자석을 이용하여 magnetic bar를 꺼낸 후 나머지 증류수를 넣는다.
③ 분주:
삼각플라스크나 테스트 튜브에 분주한다.
통기성 마개로 막고 호일로 감싸준다.
④ 멸균:
autoclave에 넣고 121℃, 15min 간 살균한다.
압력이 내려가면 오토클레이브에서 꺼낸 후 70% 소독용 알코올로 표면을
살균한 뒤 무균상에 넣는다.
⑤ 실험 시 알코올램프로 입구를 살균하여 사용한다.
(2) 고체 배지 만드는 법
 준비물: 액체배지용 기구와 동일+ 페트리디쉬(petri dish),
 방법
① 칭량 ② 용해: 증류수를 넣고 자석교반기와 마그네틱 바를 이용하여 잘 섞어준다.
③ 가열: 열을 가하여 한천을 녹인다. 자석을 이용하여 magnetic bar를 꺼낸다.

평판배지: 통기성 마개로 플라스크 입구를 막고 호일로 감싸준다.
 사면배지나 고층배지: 테스트 튜브에 분주한 후 통기성 마개로 막고 호일로
감싸준다.
④ 멸균: autoclave에 넣고 121℃, 15min 간 살균한다.
⑤ 멸균이 끝나면 오토클레이브에서 꺼낸 후 70% 소독용 알코올로 표면을 살균한 뒤
무균상에 넣는다.
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⑥ 굳히기
 평판배지: 적당히 식힌 후 호일을 벗기고 삼각플라스크 입구를 알코올램프
불꽃으로 화염살균한 후 패트리디쉬에 분주한다.
배지가 적당히 굳을 때까지 패트리디쉬 뚜껑을 조금 열어 두었다가 굳으면 완전히
덮어서 보관한다.

사면배지: 테스트 튜브를 유리봉과 같은 적당한 장치로 경사지게 하여 굳힌다.
균주보존용으로 많이 사용

고층배지: 시험관대에 꽂아 반드시 세워서 굳힌다. 혐기성균의 배양에 사용.
⑦ 바로 사용하지 않을 경우 냉장 보관한다.
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(3) 제조 시 주의사항
① 배지를 담을 용기는 깨끗한 것으로 준비
② 특별히 언급하지 않으면 증류수 사용
③ 상품화된 배지는 보관법, 기간, 제조법, 멸균법 등을 준수
④ 장시간 가열 또는 필요이상의 온도와 압력에서 배지성분 파괴주의
⑤ 중탕 또는 가열한 배지는 투명해야 함(필요 시 여과)
⑥ 멸균 시 거품으로 넘칠 수 있기에 용기는 두 배 용량을 선택
⑦ 시험관에 배지를 부을 때 위쪽 벽면에 묻지 않도록 주의
⑧ 시험관 입구는 멸균 시 반드시 봉함