[1]刘胜男,梁栋,李苗云,等.不同抑菌剂对枯草芽孢杆菌芽孢动态生长的影响[J].食品安全质量检测学报,2024,15(01):163-170.DOI:10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.2024.01.006.
将 Bacillus subtilis 168 菌株在 LB 平板上划线过夜培养至长出单菌落, 挑选新鲜的单菌落转接到 20 mL
LB 液体培养基中培养至 OD600 为 1.2~1.5, 然后按 1:100 比例转接到促芽孢生长培养基 DSM 中培养。24
h 后用相差显微镜观察芽孢形态, 当视野中大部分芽孢从母细胞中脱落时停止培养, 迅速将芽孢液冷却至
4℃, 防止芽孢萌发。离心收集芽孢, 并用无菌去离子水洗 5 次以除去芽孢悬液中的营养体和杂质, 当视野
中≥95%都为透亮的芽孢且无明显杂质时方可使用。
李苗云,梁栋,王娜,等.快速制备和纯化枯草芽孢杆菌芽孢的方法:CN202210443916.9[P].CN114806943A[2024-07-12].
将活化三代后的 b. subtilis 168 菌株在 LB 平板上划线过夜培养至长出单菌落，挑选新鲜的单菌落转接
到 20ml LB 液体培养基中 200 rpm、37℃过夜培养至 OD600 为 1.2-1.5；将细菌悬液转接到促芽孢生长培养
基 DSM 中培养 20-24h；离心收集芽孢悬液，得到未纯化芽孢悬液，用相差显微镜镜检芽孢形态，产芽孢
率≥85%
[1]梁栋,陈芳,张良,等.枯草芽孢杆菌中胞壁肽的分离纯化及其对芽孢的影响[J].中国食品学报,2021,21(03):369-374.DOI:10.16429/j.1009-7848.2021.03.042.
菌种先用 LB 琼脂培养基活化 3 代以上，接入 2×SG 培养基中涂板培养。在 37 ℃培养 2 d 后，用相
差显微镜镜检芽孢，当视野中大部分芽孢从母细胞中脱落后，用冷的无菌去离子水将培养基上的芽孢清洗
收集到离心管中，离心条件为 8000 g、4 ℃、10 min，离心数次。离心过程中保证全程在低温条件中进行。
离心后除去上清液， 获得的芽孢沉淀重悬于 ACES 缓冲液（0.05 mol/L，pH 7.0）中，最后用相差显微镜
镜检，视野中≥95%的芽孢呈现明亮状方可使用。芽孢浓度约为 1.0×108 CFU/mL，存放于 4 ℃冰箱，1 个
月内使用