JONATHAN HERNÁNDEZ CASTILLO – DIMP
BIOLOGÍA DEL PARASITISMO I
DNA synthesis increases during the first hours post-emergence in Anopheles albimanus
mosquito midgut
En insectos hematófagos el intestino medio es esencial para la digestion de la sangre ingerida y es
una barrera contra infecciones, sitio donde Plasmodium y otros patógenos escapan de la respuesta
inmune y realizan su ciclo de desarrollo. Para responder a esta invasión y posibles ataques el
intestino medio sintetiza péptidos y proteínas rápidamente para limitar el desarrollo de parásitos y
patógenos y existe evidencia de que durante la interacción con patógenos no infecciosos, se puede
desarrollar una respuesta adaptativa induciendo memoria inmune (priming) después de un segundo
encuentro con una forma infecciosa del patógeno y la respuesta inmune es intensa y más robusta,
pero la información sigue siendo limitada. En el intestino medio de Anopheles albimanus y Aedes
aegypti se produce una síntesis significativa de ADN, cromosomas politénicos y endorreplicación
durante la preparación inmunitaria.
Estas observaciones sugirieron que la producción de moléculas inmunes en el segundo encuentro
con patógenos podría lograrse mediante la amplificación de genes, lo que conduciría a un aumento
en el número de plantillas disponibles para la transcripción, como sucede con la producción de
varias proteínas en insectos, en el presente estudio sustentado por hallazgos como la observación
de endorreplicación, reparación después de lesiones por agentes químicos y la división de las células
del intestino medio de los mosquitos adultos después del daño inducido por la ingestión de
productos químicos y bacterias, se describió el ciclo celular en el intestino medio de mosquitos
recién emergidos (tenerales).
Se criaron mosquitos Aedes albimanus para trabajar en muestras de intestino medio a diferentes
tiempos posteriores a la eclosión; empleando BLAST y Clustal W se identificó el dominio de ciclina
(proteínas importantes durante el ciclo celular) entre otras especies de Anopheles¸ otros insectos y
secuencias de ciclinas humanas. A partir de las muestras de intestino se realizó RT-qPCR obteniendo
el ARN, citometría de flujo a partir de células disgregadas, microscopía confocal y al trabajar con los
mosquitos vivos se les alimentó con sacarosa al 10% adicionada con (Saccharomyces cerevisiae) para
probar una posible respuesta inmune.
Los resultados demostraron que entre las ciclinas estudiadas (A, B y E) comparadas con otras
especies, todas comparten un dominio conservado. La citometría de flujo se empleó para identificar
a través del tiempo el contenido de ADN y la etapa del ciclo celular en diferentes tiempos posteriores
a la eclosión encontrando que la mayor parte de la población celular tiene contenido de ADN de 2
N (71,17 %) y una parte de las células (28,84 %) es de 4 N, con posteriores disminuciones en las
horas siguientes en el valor de 2N y aumentos en el de 4N respectivamente.
Por microscopía confocal se detectaron las células mitóticas por inmunodetección de PH3 en
intestino medio in situ. En los mosquitos tenerales, solo una pequeña cantidad de células fueron
positivas, esta detección solo ha sido posible en mosquitos después del daño con químicos o
patógenos. La síntesis de ADN se evaluó mediante la incorporación de EdU (5-etinil-2'-desoxiuridina
en núcleos celulares en células del intestino medio de mosquitos. Al mismo tiempo, se evaluó la
presencia de PH3 (como marcador de división celular) en el intestino medio de mosquitos adultos
después de una administración oral con levadura inactivada por calor. Los datos sugieren que el
aumento del contenido de ADN en las células del intestino medio ocurre por poliploidía durante las
primeras horas posteriores a la eclosión, y la progresión del ciclo celular se detecta en el tejido del
intestino medio teneral en mosquitos adultos.