Pemeriksaan Kolesterol Total, HDL, LDL, Trigliserida Fasilitator: Dr. dr. Astuti Giantini, Sp.PK(K) Kelompok: Yan, dkk. Pre-Analitik Puasa Minimal 12 jam Penyimpanan Dapat disimpan pada suhu 4ºC untuk beberapa hari Variasi Biologis 6.5% ⇢ ukur beberapa kali dengan jarak beberapa minggu Pre-Analitik Menurun saat Meningkat Kapiler < vena, berbaring seiring usia pilihan antikoagulan: EDTA Pre-Analitik Obat-obatan § Kontrasepsi § Estrogen § Anti-hipertensif Penyakit § Tiroid § Penyakit hati § Penyakit ginjal 01 Kolesterol Total Metode: Enzimatik 01 02 Kolesteril ester + H2O Kolesteril esterase Kolesterol + FFA Kolesteril ester hidrolase akan memisahkan asam lemak bebas dari kolesterl ester Kolesterol + O2 Kolesteril oksidase choles-4-en-3-one + H2O2 Gugus –OH dioksidasi menjadi keton Peroksidase 03 2H2O2 + fenol + aminoantipirin Pilihan: menghitung O2, choles-4-en-3-one, H2O2 Quinoneimine 500 nm RSCM: Architect c8000 Interferensi > 5 mg/dL 5 – 15 % > 30 mg/dL Bilirubin Absorbsi pada 500 nm Asam askorbat Koreksi: menggunakan serum blank Namun, bilirubin dioksidasi H2O2 à penyulit Tinggi palsu Merupakan agen pereduksi, dan berkompetisi dengan kromogen Sterol lain Contoh: sterol tanaman Rendah palsu Interferensi Turbid -ity Et causa hipertrigliseridemia Hemoglobin Aktivitas pseudo-peroksidase , warna kemerahan Hemolisis Produk hemolisis (katalase) berkompetisi dengan hidrogen peroksida Konsumsi hidrogen peroksida 02 Trigliserida Trial timeline Trigliserida + H2O Experiment Lipase bakterial Asam lemak + gliserol 1 Earth is the third planet from the Sun 2 3 4 Preclinical Conclusion Saturn is a gas giant and has rings Mercury is the closest planet to the Sun Metode: Enzimatik Lipase bakterial Trigliserida + 3H2O Gliserol + asam lemak Gliserol = trigliserida à overestimate gliserol unesterified endogen Gliserol + ATP Gliserokinase Gliserofosfat + ADP Gliserofosfat Gliserofosfat + NAD Dehidrogenase NADH + H4 340 nm NADH + tetrazolium Diaforase Dihidroksiaseton + Formazan + NAD+ 500 - 600 nm 1 2 3 4 Blank Trigliserida Adanya gliserol dalam 2 bentuk: terikat dan bebas, dan gliserol bebas meningkat pada: - Aktivitas berat - DM tidak terkontrol - Kontaminasi pada tutup kontainer darah - Penyakit bawaan Dibuatkan ‘blank’ untuk trigliserida Apabila nilainya meningkat, maka terdapat gliserol bebas à lakukan koreksi Cara lain: konsumsi gliserol bebas Interferensi Asam askorbat Merupakan pereduksi kuat Bilirubin Berwarna kemerahan Hemolisis Berwarna kemerahan, dan dilusi lipid RSCM: Architect c8000 Intro: Apolipoprotein [metode] Metode Ultrasentrifugasi Presipitasi Pemisahan fraksi berdasarkan densitas lipoprotein à sulit, mahal dan lama Berdasarkan ukuran, muatan dan kandungan lipoprotein Contoh: heparin, dextran sulfat Elektroforesis Kromatografi Berdasarkan ukuran partikel, dan muatan Kecepatan: HDL > VLDL > LDL Berdasarkan ukuran dan afinitas 03 High Density Lipoprotein (HDL) Metode Referensi (CDC) Ultrasentrifugasi Membuang VLDL 1.500 g, 10 – 30 menit ATAU 10.000 15.000 g, 3 menit Presipitasi Membuang LDL Heparin manganese Analisis Assay Abell - Kendall Metode Abell - Kendall (Kalium hidroksida alkoholik) 1. Saponifikasi ester kolesterol (Asli: petroleum ether, modifikasi: hexane) 2. Ekstraksi hidrolisat kolesterol (Asam anhidrida dan asam sulfat, dibaca pada 410 nm) 3. Evaporasi solvent dan pewarnaan Assay Homogen Reaksi Pertama Bereaksi dengan lipoprotein non-HDL à kompleks stabil Reaksi Kedua Melepaskan HDL Analisis Enzimatik Polimer sintetik + polianion à blokir protein non-HDL Deterjen selektif à melepaskan HDL Enzim polietilen glikol Assay Homogen Imunoinhibisi untuk memblokir lipoprotein nonHDL Reagen 1: eliminasi kolesterl non HDL Reagen 2: melepaskan HDL dari kolesterol Berbeda merk à berbeda reagen dan metode RSCM: Architect c8000 04 Low Density Lipoprotein (LDL) Metode Direk Indirek Assay homogen Persamaan Friedewald Kuantifikasi Beta Persamaan Friedewald Dalam mmol/L: Kolesterol total – HDL - !"#$%#&'"#() *%)&+) ,..,/ Dalam mg/dL: Kolesterol total – HDL - !"#$%#&'"#() *%)&+) / Kuantifikasi Beta PRINSIP Asumsi bahwa kolesterol terdiri dari 3 jenis lipoprotein, yaitu VLDL. LDL, HDL METODE Ultrasentrifugasi (18 jam, 105.000 g) – mengukur kolesterol - presipitasi LDL à dikurangi RSCM: Architect c8000 Selamat Belajar TERIMA KASIH