Practica de laboratorio: Presencia de micronúcleos en células
bucales en diferentes etapas de adultez
Santiago Astudillo Caicedo1 & Maria Kanaseki Martínez1
1
Universidad Javeriana Cali, Facultad de ciencias e ingenierías, Programa de biología, Genética, Cali, Colombia
INFORMACION DEL ARTICULO:
RESUMEN
Palabras clave:
Extracción
Micronúcleos
Células binucleadas
Mutación
División celular
Objetivo: Analizar el procedimiento y los resultados en las pruebas de micronúcleos con base a la literatura e
hipótesis planteadas anteriormente.
Resultados: se realizó una serie de ensayos de micronúcleos de las células bucales, en diferentes etapas de la
adultez, para verificar que la edad es una variable significativa en la presencia y cantidad de micronúcleos. Los
resultados arrojaron unan diferencia directamente proporcional entre la edad y la cantidad de micronúcleos
presentes en las células bucales.
Conclusión: se demostró que la edad es una variable que sí influye en la presencia y cantidad de micronúcleos
en las células bucales, pero estos no son muy significativos, ya que la varianza en estos no es mucha con respecto
a la diferencia de edad.
ABSTRACT
Keywords:
Extraction
Micronuclei
Binucleate cells
Mutation
Cellular division
1.
Objective: Analyze the procedure and the results in the micronucleus tests based on the literature and
hypotheses raised above.
Results: A series of micronucleus assays of buccal cells were performed at different stages of adulthood to
verify that age is a significant variable in the presence and quantity of micronuclei. The results showed a directly
proportional difference between age and the number of micronuclei present in the buccal cells.
Conclusion: It was shown that age is a variable that does influence the presence and quantity of micronuclei in
the buccal cells, but these are not very significant, since the variance in these is not great with respect to the
difference in age.
INTRODUCCIÓN
La saliva es un líquido que humedece la cavidad bucal y es
secretado por las glándulas salivales, que están formadas por
células acinares y ductales. Dentro de sus propiedades
fundamentales se encuentran la protección de la mucosa
bucal y dientes, defensa a través de las lisozimas,
cooperación en la digestión, regulación del pH por su función
de tampón al evitar las lesiones producidas por el exceso de
bases y ácidos y la limpieza de la boca a través de los
movimientos masticatorios, que se pueden efectuar por la
humectación de la saliva. Además, esta contiene
principalmente agua, mucina, proteínas, sales, enzimas,
además de bacterias que normalmente residen en la cavidad
bucal, células planas producto de la descamación del epitelio
bucal, linfocitos y granulocitos degenerados llamados
corpúsculos salivales (Hernandez A., & Aranzazu G., 2012).
El ensayo de micronúcleos (MN) en células bucales
exfoliadas es un método útil y mínimamente invasivo para
seguimiento del daño genético en humanos (Holland N. et al.,
2008). Este se usa como biomarcador del daño genómico, por
lo que, la presencia y cantidad de estos en un tejido o muestra
puede significar un daño o irregularidad en diferentes sistemas
celulares, como la replicación o división celular.
La edad es un factor muy importante en el ciclo de vida de
un individuo. Conocemos que los organismos poseen
reguladores
genéticos,
morfológicos,
moleculares,
bioquímicos, etc., para el buen funcionamiento de este. Con el
paso del tiempo y de la constante división celular que sucede
en el organismo, es normal que estos reguladores sean menos
eficaces, por lo que es normal que, con la vejez, vengan
problemas genómicos como el cáncer, inestabilidades
genómica o trastornos genéticos. Por ende, la presencia de
micronúcleos podría estar significativamente respaldada bajo
estas condiciones biológicas y, por lo tanto, por medio de este
laboratorio se podrá desmentir o confirmar que la edad es una
variable significativa en la presencia y cantidad de
micronúcleos por medio del ensayo de micronúcleos bucales
humanos (Holland N. et al., 2008).
2. MATERIALES Y METODOS
2.1 Lugar de estudio
El estudio se realizó en la Pontificia Universidad Javeriana
de Cali, ubicada en Cali, Colombia.
2.2 Población de estudio
En el estudio participaron 6 personas para realizar la prueba
de micronúcleos. 2 personas por cada etapa de la adultez
según el MPS (El Ministerio de Salud Protección Social de
Colombia), las cuales serían: Juventud (14 - 26 años), Adultez
(27- 50 años) y Persona mayor (50 años o más).
2.3 Prueba de micronúcleos
Los micronúcleos se originan a partir de fragmentos de
cromosomas o cromosomas enteros que se retrasan en la
anafase durante la división nuclear. El índice micronúcleos en
células de humanos se ha convertido en uno de los criterios de
valoración citogenéticos estándar y biomarcadores utilizados
en toxicología genética in vivo o ex vivo. En humanos, esta
prueba puede ser fácilmente evaluado en eritrocitos, linfocitos
y células epiteliales exfoliadas células (por ejemplo, orales,
uroteliales, nasales) para obtener una medida del genoma daño
inducido in vivo. El ensayo de micronúcleos se puede realizar
en células bucales y otras células exfoliadas que se originan al
dividirse rápidamente tejido epitelial sin necesidad de división
nuclear ex vivo, por lo que los cultivos celulares necesarios
para los ensayos citogenéticos basados en análisis de los
cromosomas en metafase, como el cromosoma aberraciones e
intercambios de cromátidas hermanas, no son necesarios.
Según los biomonitoreos que se les ha realizado a estas pruebas
hay diversos factores que intervienen en la presencia y cantidad
de micronúcleos, entre los que se encuentran, exposiciones
ambientales y ocupacionales, radioterapia, quimio prevención,
suplementos vitamínicos, estilo de vida, hábitos, cáncer y otras
enfermedades (Holland N. et al., 2008).
2.4 Proceso en laboratorio
2.4.1
Recolección de muestra
Cada persona fue sentada, y se le realizo un raspado suave
con un copito, luego se le indico que escupiera en el vaso
plástico. La muestra de saliva fue puesta en un eppendorf junto
con su mismo volumen de buffer Tris.
2.4.2
Procesamiento de la muestra
Las muestras fueron rebajadas hasta quedar a un mismo
volumen, luego fueron centrifugadas en una centrifugadora
MIKRO 18S a 1200 RPM durante 10 minutos para retirar la
fase acuosa.
Preparación de las placas
2.4.3
A muestra en el eppendorf se le agregó 50 µL de dimetil
sulfatoxido mezclando ambos. Posteriormente se sacan 20 µL
de la solución y se colocan en un portaobjetos. A la placa junto
con la solución se le añaden 40 µL de metanol frio y se esperan
20 minutos. Luego se agregan 20 µL de tinción Giemsa al 4%
y se esperan 10 minutos. Por ultimo se fija la muestra a la placa
con ayuda de un mechero para su futura observación.
3. RESULTADOS
4. DISCUSIÓN
CONCLUSIÓN
REFERENCIAS
Figura 1. Diagrama esquemático de diferentes tipos de
micronúcleos y daños en células bucales y los posibles
mecanismos para su origen (Holland N. et al., 2008).

Hernández Castañeda, A. A., & Aranzazu Moya, G.
C. (2012). CARACTERÍSTICAS Y PROPIEDADES
FÍSICO-QUÍMICAS DE LA SALIVA: UNA
REVISIÓN. UstaSalud, 11(2).
https://doi.org/10.15332/us.v11i2.1123

Holland, N., Bolognesi, C., Kirsch-Volders, M.,
Bonassi, S., Zeiger, E., Knasmueller, S., & Fenech,
M. (2008). The micronucleus assay in human buccal
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cells as a tool for biomonitoring DNA damage: The
HUMN project perspective on current status and
knowledge gaps. In Mutation Research - Reviews in
Mutation Research (Vol. 659, Issues 1–2).
https://doi.org/10.1016/j.mrrev.2008.03.007

Torres-Bugarín, O., & Zavala-Cerna, M. (2013).
Procedimientos básicos de la prueba de micronúcleos
y anormalidades nucleares en células exfoliadas de
mucosa oral. New.Medigraphic.Com.
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