FACULTAD DE INGENIERÍAS
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS NATURALES Y MATEMÁTICAS
CARRERA DE BIOLOGÍA
Asignatura: Bioquímica.
Profesor: Luz Elena Triana Vidal.
Laboratorio: Amilasa salival. Velocidad de la reacción enzimática con
relación al pH y la temperatura
Introducción
La saliva es una sustancia de carácter líquido que humedece la cavidad bucal, esta es
secretada por las glándulas salivales y tiene funciones vitales para la integridad de los tejidos
que se encuentran en la cavidad oral, como lo son: lubricación, capacidad de actuar como
buffer, acciones antimicrobianas, re-mineralización, digestión, entre muchas más; la saliva
logra realizar la mayoría de sus funciones gracias a diferentes moléculas, entre ellas se
destacan las enzimas; en esta práctica de laboratorio, se trabajara con una de ellas, la cual es
la amilasa, que es la responsable de ayudar a digerir carbohidratos.
La amilasa en una enzima hidrolasa que tiene la función de hidrolizar los enlaces α 1-4 entre
las unidades de glucosa. Esta enzima cuenta con pH de 6.9 y tiene una afinidad a los enlaces
que se encuentran en el centro de las cadenas de un polisacárido.
Preguntas previas



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
¿Por qué la saliva tiene un efecto buffer?
¿Por qué la amilasa no puede dar glucosa libre?
¿Por qué es necesario incluir el almidón para esta prueba?
¿Qué le pasa al almidón cuando se encuentra en contacto con la saliva?
¿Por qué el pH y la temperatura pueden cambiar la velocidad de la reacción de la
enzima amilasa?
¿Qué puede afectar una reacción enzimática? ¿Por qué?
Objetivo

Aprender y comprender la reacción enzimática de la amilasa en una prueba con lugol
y analizar su relación con pH y temperatura.
Materiales
Para realizar la práctica se necesitan: Chicle, 1 gradilla, 11 tubos de ensayo, 4 goteros, 2
pipetas 5 ml graduada, 1 ml graduada, 1 probeta, 1 termómetro, 1 plancha de calentamiento,
saliva, solución de yodo, solución de almidón, soluciones amortiguadoras con pH: 3.4, 5.0,
6.8, 8.0, 10.0, baño de agua con hielo, baño de agua a 37 °C.
Procedimiento
Se debe comenzar masticando un chicle, para aumentar el flujo salival y así llegar a la
cantidad necesaria de saliva de manera más fácil y rápida. Primero, se debe prepara una
solución en una probeta con las siguientes cantidades: 0.2 ml de saliva y 9.8 ml de agua.
Amilasa vs pH
Se van a preparar 5 concentraciones, cada una en un tubo de ensayo diferente con 2 ml de
almidón y 2 ml de amortiguador con un pH diferente (3,4; 5,0; 6,8; 8,0; 10,0), se le aplicara
a cada tubo de ensayo 1 ml de saliva de 2 % de la solución preparada en la probeta y se
procede a realizar las pruebas con lugol; para los casos de la solución con buffer de pH 6.8
y 8.0 se debe realizar una aplicación cada 20 segundos y para los demás casos una
aplicación cada 4 minutos.
Nota: Se debe aplicar una gota de lugol hasta que la concentración quede de un color azul.
Tubos
Tubo principal
(saliva al 2%)
Almidón
Buffer
1
1 ml
2
1 ml
3
1 ml
4
1 ml
5
1 ml
2 ml
pH 3,4
2 ml
PH 5,0
2 ml
PH 6,8
2 ml
PH 8,0
2 ml
PH 10,0
Amilasa vs temperatura
Se van a preparar dos grupos, cada con 3 soluciones. El primer grupo (A), se prepara con 2
ml de almidón y 2 ml de Buffer con pH en 6.8; en el otro grupo (B), se prepara una solución
de saliva al 2% de la solución anteriormente preparada en la probeta; cada tubo se dejará en
un ambiente diferente por 3 minutos. El primer par en un baño de agua hirviendo, el segundo
en un baño de agua a 37°c y el tercer par en un baño de hielo. Luego de que pasen los 3
minutos, se deben comenzar las pruebas mezclando las soluciones de cada grupo que se
encuentren en los mismos ambientes para comenzar a realizar las pruebas con lugol. Para el
par que estaba en el baño de agua a 37°C se debe realizar la prueba cada 20 segundos y para
los pares que estaban en baño de hielo y baño de agua hirviendo se realiza la prueba cada 4
minutos.
Nota: Se debe tener en cuenta que apenas se mezclan las soluciones es el tiempo 0.
Grupo A
Tubos
Buffer pH 6.8
Almidón
Ambiente (Agua)
1
2 ml
2 ml
Baño hirviendo
Grupo B
Tubos
1
Tubo principal (saliva 1 ml
al 2%)
Ambiente (Agua)
Baño hirviendo
2
2 ml
2 ml
Baño al 37 °C
3
2 ml
2 ml
Baño de hielo
2
1 ml
3
1 ml
Baño al 37 °C
Baño de hielo
Resultados
Velocidad de Reacción vs pH
Tiempo de la reacción
(t en segundos)
pH
Velocidad de la reacción
(1/t) t en minutos
3.4
5.0
6.8
8.0
10.0
Velocidad de Reacción vs Temperatura
Ambiente
reacción
de
la Temperatura
Ebullición
100°C
Corporal
37 °C
Baño de hielo
0°C
Ambiente
Aprox. 25 °C
Tiempo
de
reacción
(t en segundos)
la Velocidad de
reacción: (1/t)
(t en minutos)
la
Bibliografía
Ávalos, S. H. (2008). Degradación del almidón mediante la amilasa salival. Eureka, 104106.Tomado de:
https://www.researchgate.net/publication/26502264_Degradacion_del_almidon_mediante_l
a_amilasa_salival
Bárbara E. García TrianaI, O. D. (2012). Principales proteínas salivales: estructura, función y.
Habanera de Ciencias Médicas, 450-456 . Tomado de:
https://www.studocu.com/co/document/universidad-popular-del-cesar/bioquimica/practica6-amilasa-salival-velocidad-de/8104982
Higienistas vitis. (s.f). FUNCIONES DE LA SALIVA. Obtenido de Higienistas vitis:
https://www.higienistasvitis.com/funciones-de-la-saliva/
INFORME:
Introducción: Escribir todo el marco teórico necesario para la discusión de resultados,
terminando con los objetivos escritos en este documento. (1.2 punto)
Metodología: Forma resumida de los procedimientos (0.2 puntos)
Resultados: Presentar resultados en tablas, gráficos y fotografías; cada resultado debe llevar
un titulo y un pie de página que lo describa. (1.5 puntos)
Discusión o análisis: Cada resultado debe ser comparado con otros estudios y/o justificar
con una reacción química el cambio observado en el tubo. (1.7 puntos)
Conclusiones: Se concluye a partir del objetivo planteado. (0.4 puntos)
*Nota: 8 días después de la práctica se recibe borrador para correcciones y a los 15 días es
la entrega final.
Rubrica:
Quiz (25%) *nota: una pregunta previa, una de procedimiento y resumen de los resultados
al final de la práctica.
Preguntas previas ( 10%)
Informe (65%)