EU rev. CEA-021116 Attention : cette notice d'utilisation est conforme à la directive 98/79/CE relative aux dispositifs médicaux de diagnostic in vitro et est destinée à être utilisée par des clients travaillant dans un Etat membre de l'Union européenne. ST AIA-PACK CEA MATERIEL FOURNI N° réf. 0025254 ST AIA-PACK CEA 5 trousses x 20 cupules de tests Cupules de test en plastique contenant douze billes magnétiques lyophilisées recouvertes d'anticorps monoclonaux de souris anti-ACE et de 50 µl d'anticorps monoclonaux anti-ACE conjugués avec de la phosphatase alcaline d'origine bovine, ainsi que de l'azide de sodium en guise de conservateur. MATERIEL NECESSAIRE MAIS NON FOURNI INDICATION Le ST AIA-PACK CEA, dont l'usage est exclusivement réservé au diagnostic in vitro, sert à mesurer la quantité d'antigène carcino-embryonnaire (ACE, CEA) présente dans le sérum humain ou le plasma hépariné sur des analyseurs AIA de Tosoh. PRESENTATION DU TEST L'antigène carcino-embryonnaire ou ACE est une ß-globuline polysaccharide protéinique dont le poids moléculaire est d'environ 200 000 daltons et le coefficient de sédimentation de 7S-8S (1,2,3). Il est normalement présent à de très faibles concentrations dans le sang des adultes en bonne santé. Même si, au départ, les niveaux élevés d’ACE dans le sérum ont été associés au cancer colorectal (4,5), il s'est avéré que toute une série de processus néoplasiques et morbides étaient susceptibles de provoquer une hausse significative de l’ACE (6-13). L’ACE est par conséquent utilisé en tant que marqueur tumoral pour le traitement de patients atteints de carcinomes colorectaux, du sein, des poumons, de la prostate, du pancréas, des ovaires et autres, dans la mesure où ces tumeurs sécrètent de l’ACE. Les niveaux d’ACE préopératoires peuvent avoir une valeur de pronostic dans la mesure où le niveau d'élévation est lié à la charge corporelle de la tumeur (8,14,15). Une élévation persistante ou une augmentation des niveaux d’ACE peuvent indiquer la présence d'une malignité résiduelle ou disséminée(16). Dans la mesure où la concentration d’ACE diminue souvent en cas de succès du traitement et augmente lors de la progression de la maladie, la surveillance des niveaux d’ACE dans le sérum des patients souffrant de tumeurs produisant de l’ACE facilite le traitement clinique de la maladie. Le dosage de l’ACE dans le sérum n'est pas recommandé en tant que procédure de dépistage, dans la mesure où une augmentation du niveau d’ACE se produit également dans différentes maladies non néoplasiques et bénignes telles que la cirrhose alcoolique, l'hépatite, la colite ulcéreuse et la maladie de Crohn (17,18) ainsi que chez les gros fumeurs (19). De même, comme toutes les tumeurs ne produisent pas d’ACE, un dosage de l’ACE dans le sérum compris dans l'intervalle de référence chez des sujets en bonne santé apparente n'exclut pas l'éventualité d'une maladie maligne. PRINCIPE DU DOSAGE Les matériels suivants sont nécessaires pour procéder à l'analyse de l'antigène carcino-embryonnaire à l'aide du ST AIA-PACK CEA (n° réf. 0025254) sur les analyseurs AIA de Tosoh. Vous pouvez obtenir le matériel suivant séparément auprès de Tosoh. Matériel N° réf. AIA Nex•IA ou AIA-21 0018539 AIA Nex•IA ou AIA-21 LA 0018540 AIA-1800 ST 0019836 AIA-1800 LA 0019837 AIA-2000 ST 0022100 AIA-2000 LA 0022101 AIA-600 II 0019014 AIA-600 II BCR 0019328 AIA-900 0022930 AIA-360 0019945 AIA-PACK SUBSTRATE SET II 0020968 AIA-PACK SUBSTRATE REAGENT II / AIA-PACK SUBSTRATE RECONSTITUENT II AIA-PACK CEA CALIBRATOR SET 0020354 AIA-PACK CEA ZERO CALIBRATOR 0 ng/ml AIA-PACK CEA POSITIVE CALIBRATOR 50 ng/ml AIA-PACK CEA SAMPLE DILUTING SOLUTION 0020554 AIA-PACK WASH CONCENTRATE 0020955 AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE 0020956 CUPULES DE PRELEVEMENT 0018581 AIA-PACK DETECTOR STANDARDIZATION TEST CUP 0020970 AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP 0020971 Matériel supplémentaire requis pour l'AIA Nex•IA/AIA-21 uniquement : EMBOUTS DE PIPETTE 0018552 EMBOUTS DE PIPETTE PRECHARGES 0018583 Matériel supplémentaire requis pour l'AIA-600 II, l’AIA-900, l'AIA-1800 et l'AIA-2000 uniquement : EMBOUTS DE PIPETTE 0019215 PLATEAU D'EMBOUTS 0019216 EMBOUTS DE PIPETTE PRECHARGES 0022103 Le ST AIA-PACK CEA est un dosage immunoenzymologique à deux sites entièrement réalisé dans les cupules de test ST AIA-PACK CEA. L’ACE présent dans l'échantillon est lié à un anticorps monoclonal immobilisé sur des billes magnétiques et à un anticorps monoclonal marqué dans les cupules de test. Les billes magnétiques sont lavées afin d'éliminer les anticorps monoclonaux marqués non liés, puis incubées avec un substrat fluorogénique, le 4-méthylumbelliféryl phosphate (4MUP). Le nombre d'anticorps marqués qui se lient aux billes est directement proportionnel à la concentration d’ACE présente dans l'échantillon. Une courbe de calibration est réalisée à l’aide de calibrateurs de concentration connue, et est ensuite utilisée pour calculer les concentrations d’anticorps anti-ACE présents dans les échantillons. Utilisez uniquement le matériel Tosoh. Evitez d'utiliser tout autre matériel, les performances du dosage reposant exclusivement sur le matériel Tosoh. 1 - 12 2 - 12 AVERTISSEMENTS ET PRECAUTIONS 1. Le ST AIA-PACK CEA est uniquement destiné au diagnostic in vitro. 2. Avant toute utilisation, contrôlez l'emballage et l'extérieur de la poche en aluminium afin de vérifier qu'ils ne sont pas endommagés. Si des dommages sont visibles, contactez votre représentant TOSOH local. 3. Ne mélangez pas des cupules de test appartenant à des lots ou des dosages différents sur une même plaque. 4. Le ST AIA-PACK CEA contient de l'azide de sodium, qui est susceptible de réagir avec les tuyauteries en plomb ou en cuivre pour former des azotures potentiellement explosifs. Lors de l'élimination de ces réactifs, prenez soin de toujours rincer à grande eau pour éviter toute accumulation d'azide. 5. Aucun sérum humain n'intervient dans la préparation de ce produit. Cependant, dans la mesure où des prélèvements humains sont utilisés comme échantillons et où d'autres produits de contrôle qualité du laboratoire sont susceptibles d'être fabriqués à partir de sérum humain, veuillez respecter les procédures de sécurité standard du laboratoire lors de la manipulation des échantillons et des contrôles. 6. N'utilisez pas le matériel au-delà de la date de péremption. 7. Le ST AIA-PACK CEA a été conçu de manière à ce que l'« effet crochet » des doses élevées ne constitue pas un problème dans la majorité des échantillons. Les échantillons contenant des concentrations d’ACE comprises entre 100 et 20 000 ng/ml sont lus comme étant > à 100 ng/ml. Le phénomène d'« effet crochet » est susceptible d'apparaître à des concentrations d’ACE > à 20 000 ng/ml. 8. En vue de garantir l'élimination des déchets en toute sécurité, il est recommandé à chaque laboratoire de se conformer aux procédures en vigueur au sein du laboratoire, de même qu'aux réglementations locales, régionales et nationales. 9. Après ouverture, le flacon de solution de dilution des échantillons doit être maintenu hermétiquement fermé avec un capuchon en caoutchouc propre. Le scellement du flacon avec un capuchon sale peut provoquer la détérioration du réactif. 10. Le restant de solution de dilution des échantillons après utilisation ne doit pas être mélangé avec un autre flacon et doit être jeté afin d'éviter toute contamination. 11. La contamination par du sérum, des poussières, du métal ou des micro-organismes peut provoquer la dégradation de la solution de substrat reconstituée. Stockez-la dans un environnement propre, à l'abri de la lumière directe du soleil et des UV. 12. TOSOH recommande d'utiliser un nouveau sachet de godets de test pour la calibration. - - - COLLECTE ET PREPARATION DES ECHANTILLONS ● ● ● ● ● ● ● CONSERVATION ET STABILITE Le matériel non ouvert reste stable jusqu'à la date de péremption figurant sur l'étiquette lorsqu'il est conservé à la température indiquée. Matériel N° réf. 2-8 °C : ST AIA-PACK CEA 0025254 AIA-PACK CEA CALIBRATOR SET 0020354 AIA-PACK CEA SAMPLE DILUTING SOLUTION 0020554 AIA-PACK SUBSTRATE SET II 0020968 AIA-PACK WASH CONCENTRATE 0020955 AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE 0020956 1-30 °C : AIA-PACK DETECTOR STANDARDIZATION TEST CUP 0020970 AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP 0020971 Après ouverture de la poche en aluminium, les cupules de test ST AIA-PACK CEA peuvent être laissées sur les analyseurs AIA de TOSOH (18-25 °C) pendant un maximum de 10 jours (10 x 24 heures). En cas de stockage à 2-8 °C pendant la nuit, les cupules de test peuvent être utilisées pendant 30 jours au maximum (30 cycles de 8 heures sur l'analyseur et 16 heures au réfrigérateur). Une fois la poche en aluminium ouverte, les cupules de test doivent être utilisées dans les 30 jours. L’AIA-PACK CEA CALIBRATOR SET doit être conservé hermétiquement fermé au réfrigérateur à une température de 2-8 °C. Après ouverture, les calibrateurs doivent être utilisés dans les 24 heures. Après ouverture, l’AIA-PACK CEA SAMPLE DILUTING SOLUTION peut être laissée sur les analyseurs AIA de TOSOH (18-25 °C) pendant 3 jours (3 x 24 heures) au maximum. En cas de stockage à 2-8 °C pendant la nuit, la solution de dilution des échantillons peut être utilisée pendant 9 jours au maximum (9 cycles de 8 heures sur l'analyseur et 16 heures au réfrigérateur). La solution de dilution des échantillons ne doit pas être utilisée plus de 90 jours après l'ouverture, même si elle est hermétiquement fermée et conservée au réfrigérateur. La solution de substrat reconstituée reste stable pendant 3 jours à 18-25 °C ou 30 jours à 2-8 °C. Les solutions de dilution et de lavage préparées restent stables pendant 30 jours à 18-25 °C. Les réactifs ne doivent pas être utilisés s'ils présentent un aspect trouble ou une décoloration. ● ● ● Du sérum ou du plasma hépariné est requis pour le dosage. Les plasmas citratés ou EDTA NE DOIVENT PAS ETRE UTILISES. Si vous utilisez du sérum, un prélèvement aseptique de sang veineux est effectué sans additifs. Conservez-le à 18-25 °C jusqu'à la formation d'un caillot (en général 15-45 minutes), puis centrifugez-le pour obtenir l'échantillon de sérum requis pour le dosage. En cas d'utilisation de plasma hépariné, un prélèvement aseptique de sang veineux sera effectué à l'aide de l'additif indiqué. Centrifugez et séparez le plasma des globules concentrés dès que possible. Une centrifugation inadéquate ou la présence de fibrine ou de particules dans l'échantillon peut donner des résultats erronés. Les échantillons qui contiennent des inhibiteurs de la phosphatase alcaline peuvent donner lieu à des résultats erronés. Vérifiez l'absence de bulles d'air et de mousse dans tous les échantillons. Éliminez les bulles d'air avant le dosage. Evitez d'utiliser différents types d'échantillons de façon interchangeable lors du contrôle en série d'un même patient. Chez certains patients, les concentrations mesurées peuvent varier légèrement d'un type d'échantillon à l'autre. Les échantillons doivent être conservés à 2-8 °C pendant 7 jours au maximum avant l’analyse. Si l’analyse ne peut pas être réalisée dans les 7 jours, l’échantillon devra être congelé à une température de -20 °C ou inférieure pendant 60 jours maximum. Evitez les cycles répétés de congélation/décongélation. Les échantillons de sérum troubles ou contenant des particules doivent être centrifugés avant le test. Avant le dosage, amenez lentement les échantillons congelés à une température de 18-25 °C et mélangez-les doucement. Le volume d'échantillon requis pour l'analyse est de 100 µl. PROCEDURE Dans le cas de l'AIA Nex•IA/AIA-21, l'AIA-600 II, l'AIA-900, l'AIA-1800, l'AIA-2000 et l'AIA-360, reportez-vous au manuel d’utilisation pour obtenir des instructions détaillées. I. Préparation des réactifs A. Substrat Amenez tous les réactifs à 18-25 °C avant de préparer la solution de substrat. 3 - 12 4 - 12 Ajoutez un flacon de AIA-PACK SUBSTRATE RECONSTITUENT II au AIA-PACK SUBSTRATE REAGENT II lyophilisé et mélangez soigneusement afin de dissoudre la matière solide. B. Solution de lavage 3. L’AIA-PACK CEA CALIBRATOR SET est livré prêt à l'emploi. 4. Tosoh vous recommande de doser chaque calibrateur trois fois. C. Critères d'acceptabilité de la calibration Ajoutez tout le contenu de l'AIA-PACK WASH CONCENTRATE (100 ml) à environ 2,0 l d'eau de classe I selon le CAP ou d'eau de qualité réactif de laboratoire clinique (anciennement de type I d’après le NCCLS) telle que définie par la directive C3-A4 du CLSI, mélangez bien et ajustez le volume final pour avoir 2,5 l. C. Diluant La concentration moyenne d’AIA-PACK CEA ZERO CALIBRATOR doit être < 3,0 nmol/(L•s). 2. Une relation directe existant entre la concentration et la vitesse, la vitesse augmente en même temps que la concentration. 3. Les valeurs des dosages répétés doivent être comprises dans un intervalle de 10 %. D. Révision et validation de la calibration Ajoutez tout le contenu de l'AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE (100 ml) à environ 4,0 l d'eau de classe I selon le CAP ou d'eau de qualité réactif de laboratoire clinique (anciennement de type I d’après le NCCLS) telle que définie par la directive C3-A4 du CLSI, mélangez bien et ajustez le volume final pour avoir 5,0 l. 1. Examinez la courbe de calibration avec soin en appliquant les critères répertoriés ci-dessus. 2. Modifiez la calibration si nécessaire, puis validez-la. Pour plus d'informations sur la calibration, reportez-vous au manuel d’utilisation du système AIA de Tosoh. II. Procédure de calibration 1. III. Procédure de contrôle de qualité A. Courbe de calibration A. Contrôles disponibles dans le commerce Les calibrateurs que vous devez utiliser avec le ST AIA-PACK CEA ont été uniformisés par rapport à la 1re norme internationale 73/601 de l'OMS (1975). La courbe de calibration du ST AIA-PACK CEA reste stable pendant 90 jours. La stabilité de la calibration est contrôlée par des tests de contrôle qualité et requiert une manipulation correcte du réactif et un entretien du système AIA de Tosoh conforme aux instructions du fabricant. Une recalibration plus fréquente peut s'avérer nécessaire si les contrôles se situent en dehors de l'intervalle défini pour ce dosage ou si certaines procédures d'entretien sont réalisées (par exemple, réglage de la température, modifications du mécanisme d'échantillonnage, entretien de la sonde de lavage ou réglage ou changement de la lampe du détecteur). Pour plus d'informations sur le fonctionnement de l'instrument, veuillez consulter le mode d'emploi du système AIA de TOSOH correspondant. L'exemple de courbe de calibration réalisée sur l'AIA-1800 ci-dessous montre l'algorithme utilisé pour effectuer le calcul. Des contrôles disponibles dans le commerce doivent être effectués au moins une fois par jour. Il est conseillé d'utiliser au moins deux (2) niveaux de contrôles, un normal et un anormal. La politique du laboratoire pour ce type de dosage précise ce qui suit : Produit de contrôle : _____________________ Fréquence : _____________________ Le numéro de lot du produit de contrôle, les limites acceptables et les mesures à prendre lorsque les contrôles ne répondent pas aux critères du laboratoire sont repris dans un document de contrôle qualité distinct tenu par le laboratoire. B. Procédure de contrôle de qualité 1. Procédez au dosage des échantillons de contrôle qualité comme indiqué dans le manuel d’utilisation de votre analyseur. En outre, reportez-vous au manuel d’utilisation du système AIA de Tosoh pour obtenir des instructions détaillées sur la définition et la modification des fichiers. 2. Le matériel de contrôle qualité à utiliser avec ce dosage est fonction de la politique en vigueur dans chaque laboratoire. IV. Traitement des échantillons A. Préparation En suivant les instructions du manuel d’utilisation de l'analyseur, placez les échantillons sur l'instrument comme il se doit. L'AIA Nex•IA/AIA-21, l'AIA-600 II, l'AIA-900, l'AIA-1800, l'AIA-2000 et l'AIA-360 vous permettent de doser des tubes primaires munis d'un code à barres, ainsi que des cupules de prélèvement. B. Procédure de dosage B. Procédure de calibration 1. 2. Reportez-vous au manuel d’utilisation du système AIA de Tosoh approprié pour obtenir des instructions sur la procédure à suivre. Vérifiez que les numéros des lots du calibrateur et des concentrations ont été correctement saisis dans le logiciel. 5 - 12 1. Ajoutez un nombre suffisant de cupules de test ST AIA-PACK CEA pour le nombre d'échantillons à doser. 2. Chargez les échantillons des patients en suivant les instructions du manuel d’utilisation et procédez à l'analyse. Remarque : En cas de dilutions intégrées, l'AIA Nex•IA/AIA-21, l'AIA-600 II, l'AIA-900, l'AIA-1800 et l'AIA-2000 exigent des cupules AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP. REMARQUES CONCERNANT LA PROCEDURE 1) Le substrat lyophilisé doit être entièrement dissout. 6 - 12 2) Pour les dosages de ligands effectués sur des analyseurs AIA de TOSOH, le laboratoire est tenu d'utiliser de l'eau de classe I d'après le CAP ou de l'eau de qualité réactif de laboratoire clinique d'après le CLSI. L'eau doit être testée au moins une fois par mois et être dépourvue de particules, notamment de bactéries. Le pH doit par ailleurs être testé régulièrement. Pour plus d'informations, consultez le document du CLSI C3-A4, Preparation and Testing of Reagent Water in the Clinical Laboratory ; Approved Guideline-Fourth Edition. 3) Si la concentration d'antigène carcino-embryonnaire d'un échantillon dépasse la limite supérieure de linéarité (100 ng/ml), l'échantillon doit être dilué avec la solution AIA-PACK CEA SAMPLE DILUTING SOLUTION et dosé à nouveau conformément à la procédure de dosage. La dilution recommandée pour les échantillons contenant plus de 100 ng/ml est de 1:10 ou 1:100. Il est conseillé de diluer l'échantillon de manière à ce que l'échantillon dilué soit compris entre 5 et 100 ng/ml. Le facteur de dilution doit être saisi dans le logiciel. Pour plus d'informations sur la dilution d'échantillons, reportez-vous au manuel d’utilisation du système AIA de Tosoh. 4) Les analyseurs AIA de Tosoh peuvent stocker deux courbes de calibration différentes pour chaque analyse. Vous pouvez donc utiliser jusqu'à deux lots de cupules de test ST AIA-PACK CEA au cours du même cycle. 5) Si les spécifications en matière de dosage de ce test ne sont pas encore dans le logiciel du système, vous devez les saisir sous le code test 006. LIMITES ● ● ● ● ● ● ● CALCUL DES RESULTATS Les analyseurs AIA de Tosoh effectuent automatiquement toutes les opérations de manipulation des échantillons et des réactifs. Ils lisent le taux de fluorescence produit par la réaction et le convertissent automatiquement en concentration d'antigène carcino-embryonnaire en ng/ml. Lorsque des échantillons exigent une dilution, l'AIA Nex•IA/AIA-21, l'AIA-600 II, l’AIA-900, l'AIA-1800 et l'AIA-2000 l'effectuent automatiquement et calculent les résultats si les facteurs de dilution ont été entrés dans le logiciel. Vous pouvez saisir les facteurs de dilution dans le fichier de test ou sélectionner des facteurs de dilution prédéfinis dans Specimen Processing (Echantillons). Pour plus d'informations sur le fonctionnement de l'instrument, veuillez consulter le mode d'emploi du système AIA de TOSOH correspondant. EVALUATION DES RESULTATS Contrôle qualité Pour pouvoir contrôler et évaluer la précision des performances analytiques, il est conseillé de doser des échantillons de contrôle disponibles dans le commerce, conformément aux réglementations locales. Les recommandations minimales concernant la fréquence des tests internes sont les suivantes : Après calibration, trois niveaux de contrôles internes sont effectués afin de valider la courbe de calibration. Ces trois niveaux de contrôles doivent être répétés lorsque certaines opérations d'entretien sont exécutées (par exemple, réglage de la température, modifications du mécanisme d'échantillonnage, entretien de la sonde de lavage ou réglage ou changement de la lampe du détecteur). Après l'entretien journalier, au moins deux niveaux de contrôle doivent être effectués afin de vérifier les performances générales des analyseurs AIA de TOSOH. Si une ou plusieurs valeurs des échantillons de contrôle dépassent l'intervalle acceptable, il convient d'examiner la validité de la courbe de calibration avant de valider les résultats du patient. Les procédures standard définies par le laboratoire doivent être respectées en accord avec l'agence de réglementation la plus stricte dont dépend le laboratoire. 7 - 12 ● ● Dans le cadre du diagnostic, les résultats obtenus à l'aide de ce dosage doivent être utilisés en parallèle avec d'autres données (symptômes, résultats d'autres tests, diagnostics cliniques, traitement, etc.). Avec le ST AIA-PACK CEA, la concentration maximale d'antigène carcino-embryonnaire mesurable sans dilution est de 100 ng/ml et la concentration minimale mesurable de 0,5 ng/ml (sensibilité du dosage). Même si la valeur approximative du calibrateur le plus élevé est de 50 ng/ml, la concentration exacte peut être légèrement différente. La spécification de dosage, ASSAY RANGE HIGH (limite supérieure du dosage), doit être définie comme la limite de linéarité supérieure du dosage (100 ng/ml). Bien que l'impact de l'hémolyse sur le dosage soit insignifiant, les échantillons hémolysés peuvent être le signe d'une mauvaise manipulation du prélèvement avant le dosage. Les résultats devront dès lors être interprétés avec prudence. La lipémie a un impact insignifiant sur le dosage, sauf en cas de lipémie importante associée à des interférences spatiales. Les échantillons prélevés sur des patients prenant des médicaments et/ou suivant un traitement médical peuvent donner des résultats trompeurs. Les échantillons provenant de patients ayant reçu des préparations à base d'anticorps monoclonaux de souris à des fins diagnostiques ou thérapeutiques sont susceptibles de contenir des anticorps humains anti-souris (HAMA). Ces échantillons peuvent présenter des valeurs faussement élevées en cas de test visant à déterminer la concentration d'antigène carcino-embryonnaire. Les échantillons de patients sous traitement par Asfotase Alfa (recombinant génétique) peuvent donner des résultats faussement élevés/diminués. Pour mieux comprendre les limites de cette procédure, veuillez vous reporter aux sections COLLECTE ET PREPARATION DES ECHANTILLONS, AVERTISSEMENTS ET PRECAUTIONS, CONSERVATION ET STABILITE et REMARQUES CONCERNANT LA PROCEDURE de cette notice technique. INTERVALLES ATTENDUS Chaque laboratoire est tenu de déterminer un intervalle de référence correspondant aux caractéristiques de la population testée. De même que pour toutes les procédures de diagnostic, les résultats cliniques doivent être interprétés en fonction des traitements concomitants administrés au patient.(20) I. Intervalles de référence L'intervalle donné a été déterminé à l'aide d'échantillons de sérum prélevés chez 230 sujets asiatiques en bonne santé apparente. Les études européennes ont montré que ces valeurs de référence s’appliquent également à une population caucasienne. Intervalle de référence = < 5,8 ng/ml (≤ 5,8 µg/l) II. Facteurs de conversion Dans cette application, les concentrations d’ACE sont exprimées en unités de ng/ml. Les valeurs obtenues en ng/ml doivent être multipliées par 1,0 lors de leur conversion en µg/L. CARACTERISTIQUES DES PERFORMANCES PRECISION a. Récupération : Trois échantillons de sérum ont été chargés avec trois taux différents d’ACE et dosés avant et après l'addition. 8 - 12 Echantillon Sérum A1 Sérum B1 Sérum C1 Valeur initiale (ng/ml) 1,45 1,45 1,45 1,95 1,95 1,95 2,75 2,75 2,75 ACE ajoutée (ng/ml) 24,2 48,4 96,7 24,2 48,4 96,7 24,2 48,4 96,7 Valeur attendue (ng/ml) 25,6 49,8 98,2 26,1 50,3 98,7 26,9 51,1 99,5 Valeur mesurée (ng/ml) 25,1 50,1 97,0 26,8 52,4 100 28,3 53,9 103 Pourcentage de récupération (%) 98,1 100,6 98,8 102,5 104,1 101,3 105,1 105,4 104,0 Echantillon Sérum A3 Sérum B3 Sérum C3 Sérum A2 Sérum B2 Sérum C2 Facteur de dilution aucun 7,5/10 5,0/10 2,5/10 1,0/10 aucun 7,5/10 5,0/10 2,5/10 1,0/10 aucun 7,5/10 5,0/10 2,5/10 1,0/10 Valeur attendue (ng/ml) 75,3 50,2 25,0 10,0 70,7 47,1 23,6 9,4 71,6 47,8 23,9 9,56 Valeur mesurée (ng/ml) 100 74,4 49,4 24,3 10,0 94,3 74,9 49,3 24,7 10,1 95,5 70,7 48 23,9 9,78 Pourcentage de récupération (%) Sérum A3 Sérum B3 Sérum C3 Moyenne (ng/ml) 4,80 18,8 61,1 ET cumulé (ng/ml) 0,182 0,570 1,73 CV (%) 4,1 3,2 3,1 Pente Interception avec l'axe y Coefficient de corrélation Plage d'échantillons Nombre d'échantillons 1,005 0,049 0,983 1,3 - 82,6 99 SPECIFICITE Les substances suivantes ont été testées afin de déterminer la réactivité croisée. La réactivité croisée (%) est le pourcentage du composé pour lequel ce dernier sera identifié en tant que ACE. Si ces composés sont présents dans l'échantillon à la même concentration que l’ACE, le résultat final est augmenté en fonction de ces pourcentages. 98,8 98,4 96,6 99,8 Composé ACE NCA AFP 106,0 104,7 104,6 107,2 98,6 100,4 99,9 102,3 PRECISION a. La précision intra-essai a été déterminée à l'aide de trois contrôles dosés 20 fois au cours d’une seule série. Chaque contrôle a été analysé deux fois lors de chaque cycle. La moyenne des deux résultats obtenus pour chaque contrôle a été utilisée pour déterminer l'écart type cumulé (ET), lequel a ensuite été utilisé pour calculer le coefficient de variation (CV). Echantillon ET cumulé (ng/ml) 0,198 0,595 1,92 CORRELATION La corrélation entre le sérum (x) et le plasma hépariné (y) sur le ST AIA-PACK CEA a été établie à l'aide de 99 échantillons humains. b. Dilution : Trois échantillons de sérum contenant des concentrations élevées d’ACE ont été dilués en série à l'aide de la solution AIA-PACK CEA SAMPLE DILUTING SOLUTION et dosés. Echantillon Moyenne (ng/ml) 4,80 18,8 61,1 CV (%) 3,8 3,0 2,8 b. La précision inter-essais a été déterminée par le dosage répété de trois contrôles au cours de 20 intra-essais. Les moyennes de chaque cycle ont été utilisées pour calculer l'écart type cumulé (ET) et le coefficient de variation (CV). Réactivité croisée (%) 100 < 0,01 < 0,01 SENSIBILITE La concentration minimale détectable (CMD) d'antigène carcino-embryonnaire est évaluée à 0,5 ng/ml. La CMD est définie comme la concentration d’ACE qui correspond au taux de fluorescence égal à deux écarts types du taux moyen de fluorescence de 10 déterminations répétées d'AIA-PACK CEA ZERO CALIBRATOR. INTERFERENCE Dans le cadre de cette étude, l'interférence est définie comme une récupération en dehors de la plage d'acceptabilité de 10 % par rapport à la concentration connue de l'échantillon après l'ajout des substances suivantes aux échantillons humains. ● L'hémoglobine (jusqu'à 390 mg/dl), la bilirubine libre (jusqu'à 17 mg/dl) et la bilirubine conjuguée (jusqu'à 18 mg/dl) n'interfèrent pas avec le dosage. ● La lipémie, telle qu'indiquée par les concentrations de triglycéride (jusqu'à 1 600 mg/dl), n'interfère pas avec le dosage. ● L'acide ascorbique (jusqu'à 20 mg/dl) n'interfère pas avec le dosage. ● La protéine, telle qu'indiquée par les concentrations d'albumine humaine (jusqu'à 2,5 g/dl), n'interfère pas avec le dosage. ● L'héparine (jusqu'à 100 U/ml) n'interfère pas avec le dosage. Agents chimiothérapeutiques : Les concentrations thérapeutiques des agents chimiothérapeutiques suivants ajoutés à des échantillons de sérum ou de plasma hépariné qui ont ensuite été dosés n'interfèrent pas avec le dosage ST 9 - 12 10 - 12 AIA-PACK CEA : cisplatine, vincaleucoblastine, bléomycine, adriamycine, vincristine, méthotrexate, 5-fluoro-uracile et mitomycine-C. REFERENCES 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. Krupey, J., Gold, P., Freedman, S.O., Physicochemical Studies of the Carcinoembryonic Antigens of the Human Digestive System. J. Exp. Med. 128:387-398 (1968). Coligan, J. E., et al, Heterogeneity of the Carcinoembryonic Antigen. Immunochem. 10:591-599 (1973). Joung, J. I., et al, Preparation of Carcinoembryonic Antigen (CEA) Containing Significantly Increased Amounts of Galactose and Galactosamine. Preparative Biochem. 5(4):359-374 (1975). Gold, P., Freedman, S. 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