Traducido del inglés al español - www.onlinedoctranslator.com Característica de rendimiento analítico o prueba de validación Definición Determinación durante la validación Precisión (recuperación) Expresa la proximidad del acuerdo entre el valor encontrado y el valor que se acepta como un valor verdadero convencional o un valor de referencia aceptado. A menudo se puede expresar como la recuperación mediante el ensayo de cantidades añadidas conocidas de analito. Las muestras (placebos enriquecidos) se preparan normalmente cubriendo del 50% al 150% de la concentración nominal de preparación de la muestra. Estas muestras se analizan y se calculan las recuperaciones de cada una. Precisión (2 partes): Repetibilidad (precisión del método) La variación experimentada por un solo analista en un solo instrumento. La repetibilidad no distingue entre la variación del instrumento o sistema solo y del proceso de preparación de la muestra. Se analizan múltiples réplicas de una muestra compuesta de ensayo utilizando el método analítico. El valor de recuperación se calcula y se informa para cada valor. Precisión intermedia Se refiere a variaciones dentro de un laboratorio como con diferentes días, con diferentes instrumentos, por diferentes analistas, etc. Formalmente conocido como robustez. Un segundo analista repite el análisis de repetibilidad en un día diferente usando diferentes condiciones y diferentes instrumentos. Los valores de recuperación se calculan e informan. Se realiza una comparación estadística con los resultados del primer analista. 3. Especificidad La especificidad es la capacidad de evaluar inequívocamente el analito en presencia de componentes que se puede esperar que estén presentes, como impurezas, productos de degradación y excipientes. Debe haber datos indiscutibles para que un método sea específico. La especificidad mide solo el componente deseado sin la interferencia de otras especies que puedan estar presentes; la separación no es necesariamente necesaria. Analice los espacios en blanco, la matriz de muestra (placebo) y las impurezas relacionadas conocidas para determinar si se producen interferencias. Además, demostrado durante estudios de degradación forzada. También se determinan los factores de respuesta relativa. 4. Límite de detección El límite de detección (DL) o el límite de detección (LOD) de un procedimiento individual es la cantidad más baja de analito en una muestra que se puede detectar pero no necesariamente cuantificar como un valor exacto. El LOD es un parámetro de prueba límite (pruebas que solo determinan si la concentración de analito está por encima o por debajo de un límite de especificación). En los procedimientos analíticos que presentan ruido de línea de base, el LOD puede basarse en una relación señal / ruido (3: 1), que generalmente se expresa como la concentración (p. Ej., Porcentaje, partes por mil millones) de analito en la muestra. Hay varias formas de determinarlo, pero generalmente implica inyectar muestras que generan S / N de 3: 1 y estimar la DL. 5. Límite de cuantificación El límite de cuantificación (QL) o límite de cuantificación (LOQ) de un procedimiento analítico individual es la cantidad más baja de analito en una muestra que se puede determinar cuantitativamente con precisión y exactitud adecuadas. El límite de cuantificación es un parámetro de los ensayos cuantitativos para concentraciones bajas de compuestos en matrices de muestras y se utiliza particularmente para la determinación de impurezas y / o productos de degradación. Por lo general, se expresa como la concentración (por ejemplo, porcentaje, partes por millón) de analito en la muestra. Para los procedimientos analíticos que exhiben ruido de línea de base, el LOQ generalmente se estima a partir de una determinación de la relación señal / ruido (10: 1) y generalmente se confirma inyectando estándares que dan esta relación S / N y también tienen% RSD aceptables. 6. Linealidad Evalúa la capacidad del procedimiento analítico (dentro de un rango dado) para obtener una respuesta que es directamente proporcional a la concentración (cantidad) de analito en la muestra. Si el método es lineal, los resultados de la prueba son directamente, o mediante una transformación matemática bien definida, proporcionales a la concentración de analito en las muestras dentro de un rango dado. La linealidad generalmente se expresa como el límite de confianza alrededor de la pendiente de la línea de regresión. La línea se calcula de acuerdo con una relación matemática establecida a partir de la respuesta de prueba obtenida por el análisis de muestras con concentraciones variables de analito. Tenga en cuenta que esto es diferente del rango (a veces denominado linealidad del método), que se evalúa utilizando muestras y debe abarcar el rango de especificación del componente analizado en el producto farmacéutico. Se puede establecer la linealidad para todas las sustancias activas, conservantes e impurezas esperadas. La evaluación se realiza sobre estándares. 7. Alcance El intervalo entre las concentraciones (cantidades) superior e inferior de analito en la muestra (incluidas estas concentraciones) para el que se ha demostrado que el procedimiento analítico tiene un nivel adecuado de precisión, exactitud y linealidad. El rango se expresa normalmente en las mismas unidades que los resultados de la prueba. (por ejemplo, porcentaje, partes por millón) obtenido por el método analítico. El rango (a veces denominado linealidad del método) se evalúa utilizando muestras (generalmente placebos enriquecidos) y debe abarcar el rango de especificación del componente analizado en el producto farmacéutico. 8. Prueba de robustez La medida de la capacidad de un método analítico para no verse afectado por variaciones pequeñas pero deliberadas en los parámetros del método (por ejemplo, pH, composición de la fase móvil, temperatura, configuración del instrumento) y proporciona una indicación de su confiabilidad durante el uso normal. La prueba de robustez es un proceso sistemático de variación de un parámetro y medición del efecto sobre el método mediante el control de la idoneidad del sistema y / o el análisis de muestras. Es parte del proceso formal de validación del método. 9. Determinación de la idoneidad del sistema La idoneidad del sistema es la evaluación de los componentes de un sistema analítico para mostrar que el desempeño de un sistema cumple con los estándares requeridos por un método. Una evaluación de idoneidad del sistema generalmente contiene su propio conjunto de parámetros; para los ensayos cromatográficos, estos pueden incluir factores de colas, resolución y precisión de áreas de pico estándar y comparación con un estándar de confirmación, factores de capacidad, tiempos de retención, platos teóricos y linealidad de la curva de calibración. Cuando corresponda, los parámetros de idoneidad del sistema se calculan, registran y se establecen tendencias a lo largo del curso de la validación. A continuación, se determinan los valores finales a partir de este historial. 10. Estudios de degradación forzada Estudios realizados para degradar la muestra (por ejemplo, producto farmacéutico o API) deliberadamente. Estos estudios se utilizan para evaluar la capacidad de un método analítico para medir un ingrediente activo y sus productos de degradación sin interferencia. Las muestras o el producto farmacológico (placebos enriquecidos) y la sustancia farmacológica se exponen al calor, la luz, el ácido, la base y el agente oxidante para producir una degradación del activo del 10% al 30%. A continuación, las muestras degradadas se analizan utilizando el método para determinar si existen interferencias con los picos de compuestos activos o relacionados. 11. Estudios de estabilidad de la solución La estabilidad de los estándares y las muestras se establece en condiciones normales de laboratorio, condiciones normales de almacenamiento y, a veces, en el instrumento (por ejemplo, un inyector automático de HPLC) para determinar si son necesarias condiciones especiales de almacenamiento, por ejemplo, refrigeración o protección contra la luz. La estabilidad se determina comparando la respuesta y el perfil de impurezas de los estándares o muestras envejecidos con el de un estándar recién preparado y con su propia respuesta de puntos de tiempo anteriores. PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES Y CRITERIOS DE ACEPTACIÓN RECOMENDADOS PARA LOS MÉTODOS DE CATEGORÍA I (ENSAYO) 2. Precisión (2 partes): no realizado para métodos de categoría I (ensayo). No realizado para métodos de categoría I (ensayo). 6 PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES Y CRITERIOS DE ACEPTACIÓN RECOMENDADOS PARA LOS MÉTODOS DE CATEGORÍA II (IMPUREZAS Y DEGRADANTES) 1. Precisión (recuperación) Si no utiliza las muestras y los resultados de los experimentos de rango, realice lo siguiente: Prepare 15 muestras pesando una cantidad adecuada de placebo (el placebo permanece al 100% de la concentración del método en todas las muestras) con respecto a la concentración especificada en el método que se está validando. Vierta cada una de las 15 muestras de placebo con solución activa al 100% de la concentración activa nominal. Prepare soluciones de adición para cada una de las impurezas. Aumente las 15 muestras de placebo con cada impureza de la siguiente manera: ● Preparar tres muestras replicadas a aproximadamente la concentración de LOQ. ● Preparar tres muestras repetidas a aproximadamente el 25% del límite de impureza / degradante para cada impureza. Prepare tres muestras repetidas a aproximadamente el 50% del límite de impureza / degradante para cada impureza. Prepare tres muestras repetidas a aproximadamente el 75% del límite de impureza / degradante para cada impureza. Prepare tres muestras repetidas a aproximadamente el 100% del límite de impureza / degradante para cada impureza. Prepare tres muestras repetidas a aproximadamente el 150% del límite de impureza / degradante para cada impureza. Inyectar cada muestra tres veces y analizar de acuerdo con el método analítico, adecuadamente entre corchetes por estándar. Inyecte muestras desde la concentración más baja hasta la concentración más alta. Calcule el% RSD para cada peso individual en cada nivel. Grafique la concentración de analito para cada peso individual frente a la respuesta de la señal (promedio de cada conjunto de inyecciones). Realice un análisis de regresión lineal, pero no incluya el origen como un punto hecho y no fuerce la línea a través del origen. Grafique el signo y la magnitud de los residuos frente a la concentración de analito. Verifique la gráfica residual para valores atípicos y curvatura. Evalúe la intersección con el eje y para determinar si hay una desviación significativa de cero. Calcule la recuperación para cada peso de muestra individual (promedio de las tres inyecciones). Calcule la recuperación promedio de los tres pesos de muestra en cada nivel de concentración. Notas: Los experimentos de LOD y LOQ deben realizarse antes de los experimentos de precisión. El rango de impurezas / degradantes debe abarcar desde el LOQ hasta el 150% de la especificación de impurezas / degradantes. Se deben realizar estudios de recuperación separados para cada tipo de formulación de varias formas de dosificación (es decir, tabletas / cápsulas, oral / sublingual, etc.). Si la impureza ya está presente en la matriz de la muestra sin agregar, haga tres muestras en blanco e inyéctelas con las otras 15. Corrija las áreas de muestra enriquecidas restando el blanco, si es necesario. La recuperación de la muestra individual de cada impureza debe estar entre el 75% y el 125% El porcentaje medio de recuperación para cada impureza debería estar dentro del intervalo del 75% al 125%. El coeficiente de determinación (r2) debe ser superior a 0,995 No debe haber curvatura en el gráfico de residuos. La intersección y no debe apartarse significativamente de cero (p. Ej., La respuesta del área de la intersección y debe ser inferior al 5% de la respuesta del valor de concentración nominal del 100%). 2. Precisión (2 partes): Repetibilidad (precisión del método) Prepare seis soluciones de muestras replicadas a partir de la misma muestra compuesta de ensayo de acuerdo con el método analítico. Si las impurezas no están presentes en cantidades significativas (0,2%), agregue cada muestra con impurezas a un nivel adecuado. Analizar las muestras según el método analítico, realizar dos inyecciones de cada muestra. Calcule los resultados del ensayo (% de recuperación) para cada muestra. Calcule los resultados de las impurezas individuales (% de recuperación) para cada muestra. Calcule las desviaciones estándar medias y relativas (% RSD) de las seis preparaciones de muestras para el ensayo y las impurezas. El% RSD de los valores de recuperación de compuestos relacionados no debe ser superior al 15%. Precisión intermedia Con las siguientes restricciones, haga que un segundo analista ejecute los siguientes pasos: Realiza el trabajo en diferentes días. Realice el trabajo utilizando diferentes condiciones de funcionamiento y diferentes instrumentos cuando sea posible (por ejemplo, columna, aparato, reactivos). Si es posible, utilice un instrumento de otro fabricante. Prepare seis soluciones de muestra replicadas a partir de la misma muestra compuesta de ensayo de acuerdo con el método analítico. Si las impurezas no están presentes en cantidades significativas (> 0,2%), agregue cada muestra con impurezas a un nivel adecuado. Analizar las muestras según el método analítico y realizar dos inyecciones de cada muestra. Calcule los resultados del ensayo (% de recuperación) para cada muestra. Calcule los resultados de las impurezas individuales (% de recuperación) para cada muestra. Calcule el porcentaje total promedio de impurezas / degradantes en cada muestra o valores de recuperación y el% RSD de todos los pesos de las muestras individuales durante ambos días. Notas: La precisión debe investigarse con muestras homogéneas. Si no fue posible obtener muestras homogéneas, utilice muestras o soluciones de muestras preparadas artificialmente. Si el método se usa para una variedad de tipos de dosificación (tabletas / cápsulas, oral / sublingual, etc.), el método debe validarse para la precisión del método con cada tipo de dosis. Ambos analistas deben utilizar el mismo método de trituración si fuera necesario triturar para la preparación de la muestra (p. Ej., Tabletas). Si hay múltiples potencias, el método de precisión debe realizarse en potencia baja y alta. Si solo hay una concentración de un producto, el método de precisión del método debe realizarse en dos lotes diferentes de esa concentración. En el informe de validación se debe incluir un cromatograma de un estándar típico de impurezas, un estándar de idoneidad del sistema típico, una muestra típica y una muestra enriquecida con impurezas. En los casos en que las cantidades de impurezas sean limitadas, ambos analistas pueden utilizar la misma solución madre de impurezas. El% RSD de las impurezas / degradantes generados en el segundo día no debe ser superior al 15%. El% RSD de los valores combinados de ensayo / recuperación generados por ambos durante ambos días no debe ser superior al 15%. 3. Especificidad Realice una inyección de un blanco / diluyente durante cada ejecución cromatográfica para asegurarse de que no haya interferencias. Si se utilizó un estándar interno, inyecte el estándar interno solo para confirmar la especificidad. Prepare un placebo para cada potencia. Si las formulaciones son proporcionales a la dosis, la interferencia del placebo se puede realizar en una sola potencia. Inyecte cada preparación de placebo dos veces. Confirme que no se puedan atribuir picos al blanco / diluyente o al placebo. Defina los picos observados por RRT indexados al componente activo. Prepare e inyecte dos veces, muestras de cada impureza individual en el límite de especificación de impureza / degradante (por ejemplo, compuesto relacionado). Prepare dos soluciones enriquecidas separadas que contengan el activo al 100% y cada impureza (de dos preparaciones de impurezas separadas) en el límite. Inyecte las muestras enriquecidas dos veces para confirmar la especificidad. Calcule el factor de respuesta relativa (RRF) para cada impureza utilizando la preparación de la solución enriquecida, donde RRF es la pendiente de activo / pendiente de impureza. Notas: Se deben utilizar patrones de referencia primarios si es posible. Para todas las impurezas / degradantes conocidos, clasifique cada impureza como impureza de proceso o degradante. Esto se puede hacer utilizando información de la literatura o información proporcionada por el fabricante de la sustancia farmacéutica. Confirme que las impurezas / degradantes no eluyen en la zona de elución del frente activo, placebo o disolvente. Confirme que todas las impurezas y degradantes estén bien separados entre sí. 4. Límite de detección 4. Límite de detección Prepare la solución estándar y la solución madre preparada para cada impureza / degradante y el activo. Prepare una muestra combinada creada mezclando las impurezas y el activo en una solución. Realice diluciones en serie para crear soluciones que abarquen desde el 150% de la especificación de impurezas / degradantes hasta el 0,005% (porcentaje de área en relación con el pico activo principal). Los niveles sugeridos deben incluir: 0,005% 0,01% 0,02% 0,05% 0,1% 0,2% 0,5% 1,0% 1,5% Nota: Esta prueba se puede realizar para cada compuesto individualmente si es necesario. Realice cinco inyecciones de cada concentración, adecuadamente delimitadas por el estándar. Inyecte soluciones de muestra desde la concentración más baja hasta la concentración más alta. Calcule el% de RSD en cada concentración. Calcule la relación S / N para cada pico en cada muestra en cada nivel. El límite de detección es la primera concentración a la que el analito tiene una relación S / N de 3: 1. Notas: Se debe utilizar el analito más puro disponible para determinar el límite de detección y el límite de cuantificación (es decir, estándar primario como USP o EPCRS). El límite de detección es la primera concentración a la que el analito tiene una relación S / N de 3: 1. El límite de cuantificación es el nivel al que se obtiene una relación S / N de 10: 1 y la diferencia entre inyecciones es inferior al 10%. 5. Límite de cuantificación El límite de cuantificación se determina al mismo tiempo que el límite de detección. El límite de cuantificación es el nivel al que se obtiene una relación S / N de 10: 1 y la diferencia entre inyecciones es inferior al 10%. 6. Linealidad Prepare soluciones estándar para el activo y una solución estándar madre para cada impureza. Combine las impurezas y el activo en una sola solución. Realice diluciones en serie para crear soluciones que abarquen desde el 150% del límite de impureza / degradante hasta el límite de cuantificación (LOQ) para el activo y cada impureza. Los niveles deben incluir: Una solución con concentración del LOQ Una solución con una concentración del 25% del límite de impurezas / degradantes Una solución con una concentración del 50% del límite de impurezas / degradantes Una solución con una concentración del 75% del límite de impurezas / degradantes Una solución con una concentración del 100% del límite de impurezas / degradantes Una solución con una concentración del 150% del límite de impurezas / degradantes Nota: La prueba se puede realizar para cada compuesto individualmente. Realice cinco inyecciones de cada concentración, adecuadamente delimitadas por el estándar. Inyecte las soluciones desde la concentración más baja hasta la más alta. Calcule el% RSD en cada concentración. Grafique la concentración de analito para cada conjunto de diluciones por separado frente a la respuesta de la señal (promedio de cada conjunto de inyecciones). Realice un análisis de regresión lineal, pero no incluya el origen como un punto y no fuerce la línea a través del origen. Grafique el signo y la magnitud de los residuos frente a la concentración de analito. Verifique la gráfica residual para valores atípicos y curvatura. Evalúe la intersección con el eje y para determinar si hay una desviación significativa de cero. Notas: Los resultados del límite de detección y del límite de cuantificación pueden usarse para este experimento si corresponde El coeficiente de determinación (r2) debe ser superior a 0,995. No debe haber curvatura en el gráfico de residuos. La intersección y no debe apartarse significativamente de cero (p. Ej., La respuesta del área de la intersección y debe ser inferior al 5% de la respuesta del valor de concentración de rango medio). 7. Alcance Si no utiliza las muestras y los resultados de los experimentos de precisión (recuperación), realice lo siguiente: Prepare 15 muestras pesando una cantidad adecuada de placebo. Aumente las muestras de placebo con el 100% de la concentración de la muestra activa. Pique tres de cada una de estas muestras con todas las impurezas que cubren los siguientes rangos: Una solución con concentración del LOQ Una solución con una concentración del 25% del límite de impurezas / degradantes Una solución con una concentración del 50% del límite de impurezas / degradantes Una solución con una concentración del 75% del límite de impurezas / degradantes Una solución con una concentración del 100% del límite de impurezas / degradantes Una solución con una concentración del 150% del límite de impurezas / degradantes Nota: La prueba se puede realizar para cada compuesto individualmente Inyectar cada muestra tres veces y analizar de acuerdo con el método analítico, adecuadamente entre corchetes por estándar. Inyecte muestras desde la concentración más baja hasta la concentración más alta. Grafique la concentración de analito para cada peso individual frente a la respuesta de la señal (promedio de cada conjunto de inyecciones). Calcule el% RSD para cada peso individual en cada nivel. Realice un análisis de regresión lineal, pero no incluya el origen como un punto y no fuerce la línea a través del origen. Grafique el signo y la magnitud de los residuos frente a la concentración de analito. Verifique la gráfica residual para valores atípicos y curvatura. Evalúe la intersección con el eje y para determinar si hay una desviación significativa de cero. Notas: Si la impureza ya está presente en la matriz de la muestra sin agregar, haga tres muestras en blanco y analícelas de acuerdo con el método analítico. Si hay múltiples potencias, realice experimentos de rango para la potencia más baja y más alta. Si las potencias son proporcionales a la dosis, entonces la linealidad puede haberse realizado usando una potencia. Si los compuestos son de baja solubilidad, prepare placebos secos con púas o disuelva el compuesto en una pequeña cantidad de disolvente en el que sea soluble. Las muestras de rango también pueden usarse para precisión / recuperación. El coeficiente de determinación (r2) debe ser superior a 0,995. No debe haber curvatura en el gráfico de residuos. La intersección y no debe apartarse significativamente de cero (p. Ej., La respuesta del área de la intersección y debe ser inferior al 5% de la respuesta del valor de concentración nominal del 100%). 8. Prueba de robustez Prepare un estándar de idoneidad del sistema. Prepare una solución estándar que contenga activo al nivel del 100% con impurezas / degradantes conocidos en el límite. Variación de fase móvil Usando la fase móvil especificada en el método de prueba: Aumente cada componente [principal] en un 5%, inyecte el estándar de idoneidad del sistema dos veces, inyecte la muestra activa enriquecida dos veces y mida las cifras de mérito apropiadas. Disminuya cada componente [principal] en un 5%, inyecte el estándar de idoneidad del sistema dos veces, inyecte la muestra activa enriquecida dos veces y mida las cifras de mérito apropiadas. Aumente cada componente [principal] en un 10%, inyecte el estándar de idoneidad del sistema dos veces, inyecte la muestra activa enriquecida dos veces y mida las cifras de mérito apropiadas. Disminuya cada componente [principal] en un 10%, inyecte el estándar de idoneidad del sistema dos veces, inyecte la muestra activa enriquecida dos veces y mida las cifras de mérito apropiadas. Aumente cada componente [menor] en un 15%, inyecte el estándar de idoneidad del sistema dos veces, inyecte la muestra activa enriquecida dos veces y mida las cifras de mérito apropiadas. (Nota: Los componentes menores son aquellos con menos de 10 mL / L). Disminuya cada componente [menor] en un 15%, inyecte el estándar de idoneidad del sistema dos veces, inyecte la muestra activa enriquecida dos veces y mida las cifras de mérito apropiadas. Aumente cada componente [menor] en un 30%, inyecte el estándar de idoneidad del sistema dos veces, inyecte la muestra activa enriquecida dos veces y mida las cifras de mérito apropiadas. Disminuya cada componente [menor] en un 30%, inyecte el estándar de idoneidad del sistema dos veces, inyecte la muestra activa enriquecida dos veces y mida las cifras de mérito apropiadas. Variación de la temperatura de la columna de HPLC Usando un calentador de columna: Inyecte el estándar de idoneidad del sistema inyectado dos veces e inyecte la muestra activa enriquecida dos veces a la temperatura indicada en el método, y mida las cifras de mérito apropiadas. Inyecte el estándar de idoneidad del sistema inyectado dos veces e inyecte la muestra activa enriquecida dos veces a ± 5 ° por encima de la temperatura del método indicada y mida las cifras de mérito apropiadas. Inyecte el estándar de idoneidad del sistema inyectado dos veces e inyecte la muestra activa enriquecida dos veces a ± 5 ° por encima de la temperatura del método indicada, y mida las cifras de mérito apropiadas. Variación del caudal de la fase móvil Inyecte el estándar de idoneidad del sistema dos veces e inyecte la muestra activa enriquecida dos veces con un aumento del 10% en la tasa de flujo, y mida las cifras de mérito apropiadas. Inyecte el estándar de idoneidad del sistema inyectado dos veces e inyecte la muestra activa enriquecida dos veces con una disminución del 10% en la tasa de flujo, y mida las cifras de mérito apropiadas. Inyecte el estándar de idoneidad del sistema inyectado dos veces e inyecte la muestra activa enriquecida dos veces con un aumento del 25% en la tasa de flujo, y mida las cifras de mérito apropiadas. Inyecte el estándar de idoneidad del sistema inyectado dos veces e inyecte la muestra activa enriquecida dos veces con una disminución del 25% en la tasa de flujo, y mida las cifras de mérito apropiadas. Para la variación del pH del tampón Aumente la fase móvil 0,25 unidades de pH, inyecte el estándar de idoneidad del sistema inyectado dos veces, e inyecte la muestra activa enriquecida dos veces y mida las cifras de mérito apropiadas. Disminuya la fase móvil en 0.25 unidades de pH, inyecte el estándar de idoneidad del sistema inyectado dos veces, e inyecte la muestra activa enriquecida dos veces y mida las cifras de mérito apropiadas. Variación de la columna de HPLC Usando tres columnas de al menos dos lotes diferentes de material de empaque obtenido, inyecte el estándar de idoneidad del sistema inyectado dos veces e inyecte la muestra activa enriquecida dos veces en cada columna, y mida las cifras de mérito apropiadas. Usando una columna nueva y una columna vieja (�500 inyecciones), inyecte el estándar de idoneidad del sistema inyectado dos veces en cada columna e inyecte la muestra activa enriquecida dos veces, y mida las cifras de mérito apropiadas. Notas: Los tiempos de retención relativos deben calcularse y utilizarse para evaluar el efecto de los cambios de método sobre las impurezas / degradantes conocidos. Mida las cifras de mérito apropiadas (por ejemplo, resolución, factor de cola, platos teóricos y factor de capacidad) para cada experimento de variación. Determine la idoneidad del método en cada modificación determinada teniendo en cuenta la resolución, la forma del pico, el tiempo de retención, la presión del sistema y los parámetros de idoneidad del sistema. Determine qué parámetros de idoneidad del sistema son importantes para la función general del método. Establecer límites para parámetros críticos. Para la variabilidad de la columna, asegúrese de que todas las columnas utilizadas en la validación estén disponibles comercialmente. Asegúrese de obtener y utilizar tres columnas de al menos dos lotes diferentes de material de embalaje. Asegúrese de obtener y utilizar una columna nueva y una columna antigua (> 500 inyecciones). Asegúrese de que los tiempos de retención sean similares en cada una de las tres columnas. 9. Determinación de la idoneidad del sistema Cuando corresponda, calcule la idoneidad del sistema (factor de capacidad, factor de colas, resolución, platos teóricos y reproducibilidad) para cada ejecución cromatográfica durante la validación de los métodos. Identifique los límites superior e inferior para cada parámetro mediante el análisis de los valores obtenidos durante la validación. Establecer criterios mínimos de este rango. Se sugieren los siguientes criterios mínimos: k'≥2.0, donde k 'es el factor de capacidad T≤2, donde T es el factor de colas R> 1,5, donde R es la resolución N≥1000 platos, donde N son platos teóricos por columna % RSD≤2.0%, donde% RSD es el% RSD. 10. Estudios de degradación forzada Se recomiendan las siguientes condiciones de degradación como punto de partida: Reacción de degradación Hidrólisis ácida Hidrólisis básica Oxidación Descomposición de la luz (fotólisis) Descomposición térmica (pirólisis) Condiciones típicas Muestra en ácido acuoso o disolvente acidificado a ~ 0,5 N hasta 24 horas (o) Calor / reflujo o radiación UV en ~ 0,5 N HCl hasta 24 horas. Muestra en una base acuosa o disolvente básico a ~ 0,5 N hasta 24 horas (o) Calor / reflujo o radiación UV en ~ 0,5 N NaOH hasta 24 horas. Trate con ~ 3% H2O2 hasta 24 horas (o) irradiación UV en ~ 3% H2O2 hasta 24 horas Exponga a luz ultravioleta de alta intensidad en incrementos adecuados, hasta 24 horas. Exponga a ~ 100 ° C de calor en incrementos adecuados, hasta 24 horas. Obtenga o prepare soluciones de ~ 0.5 N HCL, ~ 0.5 N NaOH, ~ 3% H2O2 y agua purificada. Prepare muestras en blanco para cada condición, incluida la luz y el calor. Prepare un placebo estándar, enriquecido y un placebo no enriquecido, según corresponda, como preparación para la degradación. Analice las muestras y los blancos de acuerdo con el método descrito en la validación antes de la degradación, estableciendo un punto de tiempo inicial. Exponga estos estándares, placebos enriquecidos y un placebo no enriquecido al ácido, la base, la oxidación, el calor y la luz siguiendo las pautas de condición enumeradas anteriormente. Neutralice las muestras ácidas y básicas antes del análisis pipeteando una cantidad de solución ácida o básica igual a la alícuota de la muestra y luego diluyéndola a volumen con agua, diluyente o fase móvil. Analice las muestras y los blancos a intervalos variables durante 24 horas, de acuerdo con el método descrito en la validación posterior a la degradación. Evalúe si se ha producido una degradación suficiente (10% -30%). Calcule el porcentaje de recuperación de las soluciones adecuadas para determinar el grado de degradación. Si las soluciones de ácido, base y peróxido no se degradaron lo suficiente en 24 horas, las soluciones de ácido, base y peróxido deberían haber sido expuestas al calor / luz hasta que se logre al menos un 10% 30% de degradación o 24 horas de exposición. transcurrido. Además, si las muestras se degradan en exceso, es aceptable reducir la duración y la gravedad de las condiciones para obtener el 10% -30%. Realice un análisis de pureza de picos en el pico del analito principal utilizando una matriz de diodos y / o un análisis de espectros de masas. Capture y muestre cromatogramas para cada degradación en muestras apropiadamente degradadas (10% -30%). Capture y muestre análisis de pureza máxima para cada condición de degradación. Determine si el método es específico para las muestras degradadas. Notas: Los estudios de degradación forzada están diseñados para producir productos de degradación potenciales que pueden encontrarse en escenarios del mundo real. Los degradantes generados pueden ser o no los que se observan durante los estudios de estabilidad. Realizar la degradación real en estos estudios no es una ciencia exacta y puede requerir la modificación de las condiciones para obtener la degradación deseada del 10% al 30%. Sin embargo, si las condiciones máximas enumeradas aquí no producen degradación, entonces no es necesario continuar los experimentos hasta que ocurra la degradación. Luego se agrega una declaración al informe que confirma la naturaleza estable de las moléculas. Para formulaciones de componentes múltiples (p. Ej., Con más de un activo), se deben preparar soluciones activas individuales para cada componente. Para las familias de productos que utilizan los mismos excipientes, la degradación forzada debe formarse en una sola formulación. Si se utilizan tintes en la información del producto, se pueden preparar placebos para cada formulación diferente y usarlos para el estudio de degradación forzada. A discreción del supervisor de primera línea, si se utilizan tintes en la formulación del producto, se puede usar un placebo en el peor de los casos para el estudio de degradación forzada. Las muestras ácidas y básicas deben prepararse al doble de la concentración nominal, de modo que puedan neutralizarse antes del análisis. Si el analito no es soluble en soluciones acuosas, se puede utilizar una pequeña cantidad de disolvente orgánico adecuado para disolver la muestra. Las soluciones ácidas, básicas y oxidantes se pueden preparar en disolvente. La concentración de las soluciones de ácido, base y peróxido puede reducirse o la concentración de la muestra puede reducirse con el consiguiente aumento del volumen de inyección para mantener la cantidad apropiada de material en la columna. Si el supervisor lo considera necesario, también se pueden realizar estudios de degradación forzada en muestras de polvo seco. Si la degradación forzada demuestra falta de especificidad, se puede utilizar el análisis del producto terminado caducado para demostrar que las condiciones de degradación forzada no están produciendo picos de degradación reales. La recuperación prevista para las muestras iniciales antes de la degradación debe estar en el rango del 95% al 105%. El tiempo de ejecución de las muestras de degradación forzada debe ser lo suficientemente largo para observar el tiempo de retención del último activo o degradante en elución. Para las familias de productos que utilizan el mismo excipiente, la degradación forzada debe formarse en una sola formulación. Confirme la pureza máxima del pico principal de la muestra de placebo enriquecida degradada mediante análisis UV o MS. Asegúrese de que se obtenga la máxima pureza para cada condición de degradación y que las muestras se hayan degradado lo suficiente o que la degradación se haya detenido. Evaluar la superposición espectral de los placebos enriquecidos con impurezas / degradantes suficientemente degradados además de la pureza máxima para demostrar que los degradantes se han resuelto del analito. Determine los tiempos de retención relativos de los degradantes. Evalúe los cromatogramas del placebo enriquecido suficientemente degradado superpuesto con el placebo degradado en cada degradación. 11. Estudios de estabilidad de la solución Prepare un placebo estándar fresco y enriquecido (o una tableta / cápsula real) según el método de prueba. Asegúrese de que tanto las soluciones de stock como las de trabajo estén disponibles para su análisis. Analizar estas soluciones analizadas según el método de prueba, estableciendo un valor de tiempo cero para cada una. Coloque una alícuota de cada solución en un material de vidrio transparente y exponga a condiciones ambientales (de mesa). Coloque una alícuota de cada solución colocada en un material de vidrio ámbar y exponga a condiciones ambientales (de mesa). Coloque una alícuota de cada solución en un recipiente de vidrio transparente y colóquelo en el refrigerador. Analice estas muestras frente a un estándar nuevo cada 24 horas durante al menos dos (2) días. Realice dos inyecciones de cada solución. Calcule el porcentaje de recuperación calculado para todas las soluciones. Notas: Después de dos días, las muestras pueden evaluarse a intervalos a discreción del analista. Cada día se debe preparar un estándar nuevo y un estándar de verificación nuevo. Para los estándares a nivel de ensayo, el estándar nuevo y el estándar de verificación no deben diferir más del 2.0%. Para estándares de nivel bajo (impurezas, 1% –2% de la concentración del método), el estándar nuevo y el estándar de verificación nuevo no deben diferir en más del 2.0%. Para el nivel de ensayo, las soluciones estándar y de muestra se consideran suficientemente estables en el tiempo si el valor de recuperación no varía más de ± 1,5% (absoluto) del resultado inicial. Para estándares de bajo nivel (impurezas), la solución se considera suficientemente estable en el tiempo si el valor de recuperación no varía más de ± 3,0% (absoluto) del resultado inicial. Para los métodos de impurezas / degradantes, las muestras se consideran suficientemente estables a lo largo del tiempo si el nivel de impurezas / degradantes no varía más del 0,2% (absoluto) del análisis inicial de la muestra. PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES Y CRITERIOS DE ACEPTACIÓN RECOMENDADOS PARA LOS MÉTODOS DE CATEGORÍA III (DISOLUCIÓN) 1. Precisión (recuperación) Si no utiliza las muestras y los resultados de los experimentos de rango, realice lo siguiente: Prepare 15 muestras pesando una cantidad adecuada de placebo (el placebo permanece al 100% de la concentración del método en todas las muestras), con respecto a la concentración especificada en el método que se está validando. Agregue una solución madre activa a las muestras de placebo (usando diluyente según la preparación de la muestra) en cada uno de los cinco niveles. Los cinco niveles deben abarcar el rango de (Q – 25%) a 120% de la concentración nominal del medicamento. Prepare tres (3) réplicas de pesos para cada nivel. Inyectar cada muestra tres veces y analizar de acuerdo con el método analítico, adecuadamente entre corchetes por estándar. Inyecte muestras desde la concentración más baja hasta la concentración más alta. Calcule el% RSD para cada peso individual en cada nivel. Grafique la concentración de analito para cada peso individual frente a la respuesta de la señal (promedio de cada conjunto de inyecciones). Realice un análisis de regresión lineal, pero no incluya el origen como un punto y no fuerce la línea a través del origen. Grafique el signo y la magnitud de los residuos frente a la concentración de analito. Verifique la gráfica residual para valores atípicos y curvatura. Evalúe la intersección con el eje y para determinar si hay una desviación significativa de cero. Calcule la recuperación para cada peso de muestra individual (promedio de las tres inyecciones). Calcule la recuperación promedio de los tres pesos de muestra en cada nivel de concentración. Notas: Se deben realizar estudios de recuperación separados para cada tipo de formulación de varias formas de dosificación (es decir, tabletas / cápsulas, oral / sublingual, etc.) El porcentaje de recuperación de los placebos enriquecidos debe estar dentro de 100 ± 2% para el promedio de cada conjunto de tres pesos. La recuperación de cada muestra individual debe estar dentro del rango del 97% al 103%. El coeficiente de determinación (r2) debe ser superior a 0,997. No debe haber curvatura en el gráfico de residuos. La intersección y no debe apartarse significativamente de cero (por ejemplo, la respuesta del área de la intersección y debe ser inferior al 5% de la respuesta del valor de concentración nominal del 100%). 2. Precisión (2 partes): Repetibilidad (precisión del método) Realice la disolución en 6 unidades de dosificación individuales tanto de la potencia más baja como de la potencia más alta, de acuerdo con el método de disolución. Si solo hay una potencia, realice la disolución usando dos lotes de esa potencia. Analizar las muestras según el método analítico y realizar dos inyecciones de cada muestra. Calcule el porcentaje disuelto de cada unidad individual. Calcule las desviaciones estándar medias y relativas (% RSD) de los seis resultados de disolución. El% RSD debe ser NMT 3.0%. Precisión intermedia Con las siguientes restricciones, haga que un segundo analista ejecute los siguientes pasos: Realiza el trabajo en diferentes días. Realice el trabajo utilizando diferentes condiciones de funcionamiento y diferentes instrumentos cuando sea posible (por ejemplo, columna, aparato, reactivos). Si es posible, utilice un aparato de disolución y un instrumento de HPLC de otro fabricante. Realice la disolución en 6 unidades de dosificación individuales tanto de la potencia más baja como de la potencia más alta, de acuerdo con el método de disolución. Si solo hay una potencia, realice la disolución usando dos lotes de esa potencia. Analizar las muestras según el método analítico y realizar dos inyecciones de cada muestra. Calcule el porcentaje disuelto de cada unidad individual. Calcule las desviaciones estándar medias y relativas (% RSD) de los seis resultados de disolución. Notas: La precisión debe investigarse con muestras homogéneas. Si el método se usa para una variedad de tipos de dosificación (tabletas / cápsulas, oral / sublingual, etc.), el método debe validarse para la precisión del método con cada tipo de dosis. Si hay múltiples potencias, el método de precisión debe realizarse en potencia baja y alta. Si solo hay una concentración de un producto, la precisión del método debe realizarse en dos lotes diferentes de esa concentración. El% RSD debe ser NMT 3.0% El% RSD para los dos resultados combinados debe ser NMT 4.0%. 3. Especificidad Prepare e inyecte dos veces una muestra representativa de medio de disolución. Prepare e inyecte dos veces una muestra en blanco y diluyente (si corresponde). Si se utilizó un estándar interno, prepare e inyecte dos veces el estándar interno solo para confirmar la especificidad. Prepare un placebo para cada potencia. Si las formulaciones son proporcionales a la dosis, la interferencia del placebo se puede realizar en una sola potencia. Para productos en cápsulas, disuelva la cubierta de la cápsula en un volumen apropiado de medio de disolución. Inyecte la muestra de la cubierta de la cápsula dos veces. Inyecte cada preparación de placebo dos veces. Confirme que no se puedan atribuir picos al medio de disolución, al placebo en blanco / diluyente oa las muestras de la cubierta de la cápsula. Defina los picos observados por RRT indexados al componente activo. Notas: Si hay una interferencia significativa de la cubierta de la cápsula, se puede corregir preparando un blanco de cubierta de la cápsula según USP <711>. Confirme que no se produjo ninguna interferencia en la zona de elución del activo a partir del medio de disolución, el blanco / diluyente, el estándar interno (si corresponde), la cubierta de la cápsula (si corresponde) o el placebo. 4. 5. 6. Límite de detección: No realizado para métodos de categoría III (ensayo). Límite de cuantificación: No realizado para métodos de categoría III (ensayo). Linealidad Prepare cinco soluciones estándar del analito a ~ 50%, 70%, 100%, 130% y 150% de la concentración nominal del método utilizando diluciones en serie de una solución madre. Realice tres inyecciones en cada concentración, adecuadamente delimitadas por el estándar. Asegúrese de inyectar muestras desde la concentración más baja hasta la concentración más alta para reducir los efectos, si los hay, del arrastre de las muestras de concentración más alta. Calcule el% RSD en cada concentración. Grafique la concentración de analito para cada conjunto de diluciones por separado frente a la respuesta de la señal (promedio de cada conjunto de inyecciones). Realice un análisis de regresión lineal, pero no incluya el origen como un punto hecho y no fuerce la línea a través del origen. Grafique el signo y la magnitud de los residuos frente a la concentración de analito. Verifique la gráfica residual para valores atípicos y curvatura. Evalúe la intersección con el eje y para determinar si hay una desviación significativa de cero. Notas: Si el método se va a utilizar para múltiples concentraciones de analitos, asegúrese de que se examinó la linealidad desde el 50% de la concentración nominal más baja hasta el 150% de la concentración nominal más alta. El coeficiente de determinación (r2) debe ser superior a 0,9999. No debe haber curvatura en el gráfico de residuos. La intersección con el eje y no debe apartarse significativamente de cero. (por ejemplo, la respuesta del área de la intersección con el eje y debe ser inferior al 5% de la respuesta del valor de concentración de rango medio). 7. Alcance Si no utiliza las muestras y los resultados de los experimentos de precisión (recuperación), realice lo siguiente: Prepare 15 muestras pesando una cantidad adecuada de placebo (el placebo permanece al 100% de la concentración del método en todas las muestras) con respecto a la concentración especificada en el método que se está validando. Agregue una solución madre activa a las muestras de placebo (usando diluyente según la preparación de la muestra) en cada uno de los cinco niveles. Los cinco niveles deben abarcar el rango de (Q – 25%) a 120% de la concentración nominal del medicamento. Prepare tres (3) réplicas de pesos para cada nivel. Inyectar cada muestra tres veces y analizar de acuerdo con el método analítico, adecuadamente entre corchetes por estándar. Inyecte muestras desde la concentración más baja hasta la concentración más alta. Calcule el% RSD para cada peso individual en cada nivel. Grafique la concentración de analito para cada peso individual frente a la respuesta de la señal (promedio de cada conjunto de inyecciones). Realice un análisis de regresión lineal, pero no incluya el origen como un punto hecho y no fuerce la línea a través del origen. Grafique el signo y la magnitud de los residuos frente a la concentración de analito. Verifique la gráfica residual para valores atípicos y curvatura. Evalúe la intersección con el eje y para determinar si hay una desviación significativa de cero. Calcule la recuperación para cada peso de muestra individual (promedio de las tres inyecciones). Calcule la recuperación promedio de los tres pesos de muestra en cada nivel de concentración. Notas: Si hay múltiples potencias, realice experimentos de rango para la potencia más baja y más alta. Si las potencias son proporcionales a la dosis, entonces la linealidad puede haberse realizado usando una potencia. Si los compuestos son de baja solubilidad, prepare placebos secos con púas o disuelva el compuesto en una pequeña cantidad de disolvente en el que sea soluble. Las muestras de rango también pueden usarse para precisión / recuperación. El rango de (Q – 25%) a 120% se describe mejor en un ejemplo. Por ejemplo, si la especificación para un producto de liberación controlada cubre un rango del 25%, después de 1 hora, y hasta el 90% después de 24 horas, entonces el rango a validar es del 0% al 110% de la declaración de la etiqueta. El coeficiente de determinación (r2) debe ser superior a 0,997. No debe haber curvatura en el gráfico de residuos. La intersección y no debe apartarse significativamente de cero (p. Ej., La respuesta del área de la intersección y debe ser inferior al 5% de la respuesta del valor de concentración nominal del 100%). 8. Prueba de robustez Variación de fase móvil Usando la fase móvil especificada en el método de prueba: Aumente cada componente [principal] en un 5%, inyecte el estándar de idoneidad del sistema dos veces y mida las cifras de mérito adecuadas. Disminuya cada componente [principal] en un 5%, inyecte el estándar de idoneidad del sistema dos veces y mida las cifras de mérito apropiadas. Aumente cada componente [principal] en un 10%, inyecte el estándar de idoneidad del sistema dos veces y mida las cifras de mérito apropiadas. Disminuya cada componente [principal] en un 10%, inyecte el estándar de idoneidad del sistema dos veces y mida las cifras de mérito apropiadas. Aumente cada componente [menor] en un 15%, inyecte el estándar de idoneidad del sistema dos veces y mida las cifras de mérito apropiadas. (Nota: Los componentes menores son aquellos con menos de 10 mL / L). Disminuya cada componente [menor] en un 15%, inyecte el estándar de idoneidad del sistema dos veces y mida las cifras de mérito apropiadas. Aumente cada componente [menor] en un 30%, inyecte el estándar de idoneidad del sistema dos veces y mida las cifras de mérito adecuadas. Disminuya cada componente [menor] en un 30%, inyecte el estándar de idoneidad del sistema dos veces y mida las cifras de mérito apropiadas. Variación de la temperatura de la columna de HPLC Usando un calentador de columna: Inyectar el estándar de idoneidad del sistema inyectado dos veces a la temperatura indicada en el método y medir las cifras de mérito adecuadas. Inyecte el estándar de idoneidad del sistema inyectado dos veces a ± 5º por encima de la temperatura del método indicada y mida las cifras apropiadas de mérito. Inyecte el estándar de idoneidad del sistema inyectado dos veces a ± 5º por encima de la temperatura del método indicada y mida las cifras apropiadas de mérito. Variación del caudal de la fase móvil Inyecte el estándar de idoneidad del sistema dos veces con un aumento del 10% en la tasa de flujo y mida las cifras apropiadas de mérito. Inyecte el estándar de idoneidad del sistema inyectado dos veces con una disminución del 10% en la tasa de flujo y mida las cifras de mérito apropiadas. Inyecte el estándar de idoneidad del sistema inyectado dos veces con un aumento del 25% en la tasa de flujo y mida las cifras de mérito adecuadas. Inyecte el estándar de idoneidad del sistema inyectado dos veces con una disminución del 25% en la tasa de flujo y mida las cifras apropiadas de mérito. Para la variación del pH del tampón Aumente la fase móvil en 0,25 unidades de pH, inyecte el estándar de idoneidad del sistema inyectado dos veces y mida las cifras de mérito adecuadas. Disminuir 0,25 unidades de pH de la fase móvil, inyectar el estándar de idoneidad del sistema inyectado dos veces y medir las cifras de mérito adecuadas. Variación de la columna de HPLC Usando tres columnas de al menos dos lotes diferentes de material de empaque obtenido, inyecte el estándar de idoneidad del sistema inyectado dos veces en cada columna y mida las cifras de mérito apropiadas. Usando una columna nueva y una columna vieja (> 500 inyecciones), inyecte el estándar de idoneidad del sistema inyectado dos veces en cada columna y mida las cifras de mérito apropiadas. Mida las cifras de mérito apropiadas (por ejemplo, resolución, factor de cola, platos teóricos y factor de capacidad) para cada experimento de variación. Determine la idoneidad del método en cada modificación determinada teniendo en cuenta la forma del pico, el tiempo de retención, la presión del sistema y los parámetros de idoneidad del sistema. Determine qué parámetros de idoneidad del sistema son importantes para la función general del método. Límites establecidos para parámetros críticos. Para la variabilidad de la columna, asegúrese de que todas las columnas utilizadas en la validación estén disponibles comercialmente. Asegúrese de obtener y utilizar tres columnas de al menos dos lotes diferentes de material de embalaje. Asegúrese de obtener y utilizar una columna nueva y una columna antigua (�500 inyecciones). Asegúrese de que los tiempos de retención sean similares en cada una de las tres columnas. 9. Determinación de la idoneidad del sistema Cuando corresponda, calcule la idoneidad del sistema (factor de capacidad, factor de colas, resolución, platos teóricos y reproducibilidad) para cada ejecución cromatográfica durante la validación de los métodos. Identifique los límites superior e inferior para cada parámetro mediante el análisis de los valores obtenidos durante la validación. Establecer criterios mínimos de este rango. Se sugieren los siguientes criterios mínimos: k'≥2.0, donde k 'es el factor de capacidad T≤2, donde T es el factor de colas R> 1,5, donde R es la resolución N≥1000 platos, donde N son platos teóricos por columna % RSD≤2.0%, donde% RSD es el% RSD. Estudios de degradación forzada No se realiza para métodos de Categoría IIII (disolución). 11. Estudios de estabilidad de la solución Prepare un estándar nuevo según el método de prueba. Asegúrese de que tanto las soluciones de stock como las de trabajo estén disponibles para su análisis. Prepare u obtenga muestras de disolución. (p. ej., producto farmacéutico disuelto en medios de disolución y diluido según corresponda). Analice estas soluciones según el método de prueba, estableciendo un valor de tiempo cero para cada una. Coloque una alícuota de cada solución en un material de vidrio transparente y exponga a condiciones ambientales (de mesa). Coloque una alícuota de cada solución colocada en un material de vidrio ámbar y expuesta a condiciones ambientales (de mesa). Coloque una alícuota de cada solución en un recipiente de vidrio transparente y colóquelo en el refrigerador. Analice estas muestras frente a un estándar nuevo cada 24 horas durante al menos dos (2) días. Realice dos inyecciones de cada solución. Calcule el porcentaje de recuperación calculado para todas las soluciones. Notas: Después de dos días, las muestras pueden evaluarse a intervalos a discreción del analista. Cada día se debe preparar un estándar nuevo y un estándar de verificación nuevo. Para los estándares a nivel de ensayo, el estándar nuevo y el estándar de verificación no deben diferir más del 1,5%. Las soluciones se consideran suficientemente estables en el tiempo necesario para una descomposición del 2,0%, medida por la pérdida de analito. PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES Y CRITERIOS DE ACEPTACIÓN RECOMENDADOS PARA LOS MÉTODOS DE CATEGORÍA IV (IDENTIFICACIÓN) 1. Precisión (recuperación) No se realiza para métodos de Categoría IV (identificación). 2. Precisión (2 partes): Repetibilidad (precisión del método): No se realiza para los métodos de Categoría IV (identificación). Precisión intermedia; No se realiza para métodos de Categoría IV (identificación). Especificidad Realice una inyección de un blanco / diluyente durante cada ejecución cromatográfica para asegurarse de que no haya interferencias. Si se utilizó un estándar interno, inyecte el estándar interno solo para confirmar la especificidad. Prepare un placebo para cada potencia. Si las formulaciones son proporcionales a la dosis, la interferencia del placebo se puede realizar en una sola potencia. Inyecte cada preparación de placebo dos veces. Confirme que no se puedan atribuir picos al blanco / diluyente o al placebo. Defina los picos observados por RRT indexados al componente activo. Notas: La discriminación de un procedimiento puede confirmarse obteniendo resultados positivos (quizás en comparación con un material de referencia conocido) de muestras que contienen el analito, junto con resultados negativos de muestras que no contienen el analito. Confirme que no se produjeron interferencias en la zona de elución del activo debido al blanco / diluyente, el estándar interno (si corresponde) o el placebo. Límite de detección: no realizado para métodos de Categoría IV (identificación). 3. Límite de cuantificación: No realizado para métodos de Categoría IV (identificación). 6. Linealidad: No se realiza para los métodos de Categoría IV (identificación). 7. Rango: No realizado para métodos de Categoría IV (identificación). Prueba de robustez: No se realiza para métodos de Categoría IV (identificación). Determinación de la idoneidad del sistema: No se realiza para los métodos de Categoría IV (identificación). Estudios de degradación forzada: No realizado para métodos de Categoría IV (identificación). Estudios de estabilidad de la solución: no realizado para métodos de Categoría IV (identificación). · Cambio de equipo. · Cambio de columna en un si stema cromatográfico (diferente t iempo de uso y/o numero de platos teóricos, d iferentes lotes y/o marcas). · pH del buffer de la fase móvil (±0.5 unidades de pH). · Proporción de la fase móvil(± 10% relativo a la cantidad presente o no más del 5% absoluto). · Concentración del buffer o modificadores con par iónico o tensioact ivos (± 10% de la concentración). · Velocidad de flujo (±10%). · Temperatura de columna (±5"C). · Longitud de onda (±2nm). · Volumen de inyección (±10%). · Gradiente, t iempo y pendiente (cambiar la velocidad ±10% y/o variaciones en la pendiente. Incrementar o disminuir±10% el tiempo en que permanece bajo condiciones isocráticas). · Tiempo de extracción de la muestra. · Estabilidad de soluc iones de muestra y testigo. · Cambio de la rampa de temperatura del horno (G.C) · Inc idencia del filtrado (comparación entre distintos tipos/marcas de membranas filtrantes contra una muestra sin f iltrar o filtrada por la mejor opción según lo indica la experiencia de uso) · Variación del pH de la solución (±0.5 unidades de pH). · Diferentes fabricantes de solventes. · Cambio en el Spl� del inyector. · La estabilidad de las sol uci ón testigo y muestras se evalúan como un parametro independiente (ver Estabilidad de Soluciones). · Diferentes columnas y equipos pueden ser evaluados en la precisión intermedia.