Перевод: английский - русский - www.onlinedoctranslator.com
Исследование углеводов 344 (2009) 1724–1728
Списки содержания доступны на ScienceDirect
Исследование углеводов
ваша домашняя страница: www. Эль Сев Иер. com / l oc ate / ca r es
Структура абэквозосодержащего О-полисахарида из Citrobacter freundii
О22 штамм ПКМ 1555
Ева Катценелленбоген а, *, Кочарова Нина Александровна б, Филипп В. Тукач б, Сабина Горска а, Агнешка
Корзенёвска-Коваль а, Мария Богульская а, Анджей Гамян а, в, Юрий Александрович Книрель
а Институт
иммунологии и экспериментальной терапии им. Л. Хиршфельда Польской академии наук, Weigla 12, 53-114 Wrocław, Польша
б Институт
c Кафедра
органической химии им. Н.Д. Зелинского РАН, Ленинский проспект, 47, Москва, 117913, Российская Федерация
медицинской биохимии, Медицинский университет Вроцлава, Chałubińskiego 10, 50-368 Вроцлав, Польша
articleinfo
Аннотация
История статьи:
Липополисахарид Citrobacter freundii O22 (штамм PCM 1555) разлагался в умеренно кислых условиях, и
высвободившийся О-полисахарид выделяли с помощью гель-хроматографии. Анализы сахара и
метилирования вместе с1Рука 13Спектроскопия ЯМР 13С, в том числе двумерная 1ЧАС,1H РОЗИ и 1ЧАС,13C
HMBC эксперименты показали, что повторяющаяся единица O-полисахарида имеет следующую структуру:
Поступила 27 марта 2009 г. Получена в
доработке 27 мая 2009 г. Принята в печать 1
июня 2009 г.
Доступно онлайн 6 июня 2009 г.
Ключевые слова:
Липополисахарид
Citrobacter
О-специфическая структура полисахарида
Эндотоксин
Серологическая классификация
где Абэ - абэквоз (3,6-дидезокси-D-ксило-гексоза). SDS-PAGE и иммуноблоттинг показали, что O-антигенC.
freundii O22 серологически неотличим от Сальмонелла серовары группы B (Typhimurium, Brandenburg,
Sandiego, Paratyphi B), но не связанные с другими протестированными О-антигенами, содержащими абеквозу
(Citrobacter werkmanii O38 и Сальмонелла Кентукки) или колитоза (L энантиомер абеквозы) - содержащий Оантиген кишечная палочка O111.
- 2009 Elsevier Ltd. Все права защищены.
1. Введение
к роду на основании родства ДНК и биохимических исследований.
9,12,13
Род Citrobacter был назначен первым Брааком1 а также Веркманом и
Гилленом2 для группы грамотрицательных цитрат-утилизирующих и
ферментирующих лактозу бактерий кишечной формы. ШтаммыCitrobacter
являются обитателями кишечного тракта и обнаруживаются в сточных водах,
поверхностных водах и пищевых продуктах, загрязненных фекалиями. Эти
бактерии могут вызывать гастроэнтерит и оппортунистические инфекции.3 а
также заболевания мочевыводящих путей и дыхательных путей, особенно у
хозяев с ослабленным иммунитетом, которые могут быть связаны с
менингитом, абсцессами головного мозга и неонатальным сепсисом.3,4 Эти
микроорганизмы были описаны под разными названиями, такими как
Падлевская, левинея, колобактрум, параколобактрум и группа BethesdaBallerup, если в 1958 году Международный подкомитет по таксономии
Энтеробактерии принял термин Citrobacter freundii для группы организмов, в
которую также вошли C. koseriiа также C. amalonaticus.3,5–8 В настоящее время
род Citrobacter содержит 11 видов и 43 О-серогруппы,6–11 добавляются восемь
видов
* Корреспондент. Тел .: +48 71 3371172; факс: +48 71 3709975.Адрес
электронной почты: katzenel@iitd.pan.wroc.pl (Э. Каценелленбоген).
0008-6215 / $ - см. Титульный лист - 2009 Elsevier Ltd. Все права защищены. DOI:
10.1016 / j.carres.2009.06.005
На основе сахарного состава липополисахарида (ЛПС),Citrobacter
Штаммы были разделены на 20 хемотипов.7 Одиннадцать из них
идентичны хемотипам, встречающимся в Сальмонеллаа также
Кишечная палочка, и наблюдались многочисленные серологические
перекрестные реакции между штаммами трех родов. Поскольку
серологическая специфичность грамотрицательных бактерий
определяется тонкой структурой О-полисахаридной части их ЛПС (Оантигена), подробные структурные исследованияCitrobacter Ополисахариды проводились в нескольких лабораториях с целью
обоснования серологической перекрестной реактивности между
Citrobacter и других родов на молекулярной основе и для улучшения
существующей классификации Citrobacter штаммы. Более 30 структур Оантигенов, полученных из серологически различныхCitrobacter
штаммы были выяснены до сих пор.11,14–17 Наши иммунохимические
исследования показали, чтоCitrobacter О-антигены из некоторых
разных серогрупп тесно связаны, и, наоборот, О-антигены из одной и
той же серогруппы могут быть антигенно разными.
Теперь мы сообщаем о структуре О-полисахаридаCitrobacter
PCM 1555, который по уточненной классификации
E. Katzenellenbogen et al. / Carbohydrate Research 344 (2009) 1724–1728
схема,10 принадлежит C. freundii и представляет собой серогруппу
O22. О-антиген этой бактерии содержит абеквозу (3,6-дидезокси-D
-ксило-гексоза) и быть близкими к О-антигенам Сальмонелла
серогруппа B. Серологическое родство между ЛПС Citrobacter O22 и
ЛПС, содержащие абеквозу некоторых других Citrobacter а также
Сальмонелла штаммы также были исследованы.
2. Экспериментальный
2.1. Бактериальные штаммы, выделение и разложение
липополисахарида
C. freundii O22: 64 (PCM 1555; IHE Be 86/57; штамм PR Edwards
1725 г.
Сыворотка O111 была приобретена в компании Biomed (Краков). SDS –
PAGE ЛПС проводили по методу Лэммли.24 Гели окрашивали реактивом
серебра.25 Иммуноблоттинг проводили, как описано.26 После
разделения в SDS-PAGE, ЛПС переносили из геля на мембрану
Immobilon P (Millipore), которую инкубировали с антисывороткой,
промывали трис-буферным солевым раствором (20 мМ Трис-HCl, 50 мМ
NaCl, 0,05% Твин- 20, pH 7) и инкубировали с щелочной фосфатазой,
конъюгированной с козьим антителом против кроличьего IgG.
Иммуноблоттинг визуализировали с помощью окрашивающего
реагента (нитро-синий тетразолий и 5-бром-4-хлор-3-индолилфосфат в
0,05 М трис / HCl pH 9,5, содержащем 5 мМ MgCl.2).
2.4. ЯМР-спектроскопия
Paratyphi B (PCM 855) были из коллекции Института иммунологии и
Перед измерениями образцы дважды лиофилизировали от
99,9% 2ЧАС2O и растворен в 99,96% 2ЧАС2О. 1Рука 13Спектры ЯМР
13С записывали на спектрометре Bruker Avance 600 МГц при 30 ° С;
химические сдвиги сообщаются с внутренним ацетоном (dЧАС
экспериментальной терапии им. Л. Хиршфельда (Вроцлав, Польша). ).
2,225, dC 31.45) в качестве ссылки. Спектры ЯМР записаны двумерным методом.1
Ind 1219; ГИСК 1200457,8,10), Citrobacter werkmanii О38 (ПКМ 1489), Кишечная
палочка О111 (ПКМ 277), Сальмонелла серовары Kentucky (PCM 1720),
Typhimurium (PCM 999), Brandenburg (PCM 1734), Sandiego (PCM 1730) и
Бактерии культивировали на жидкой среде с аэрацией при 37 ° С в течение
ЧАС,1H УЮТНЫЙ, TOCSY, ROESY, H-обнаруженный 1ЧАС,13C. Эксперименты HSQC и
24 ч, собирали и сушили замораживанием. ЛПС был получен с выходом 3,3%
HMBC, которые проводили с использованием стандартного программного
от сухой бактериальной массы
обеспечения Bruker. Время перемешивания 150 или 200 мс использовалось в
C. freundii O22 фенол-водной экстракцией18 и очищали, как
описано.19 LPS (300 мг) разлагали 1% -ным водным HOAc (30 мл, 100
-C, 90 мин), и после удаления осадка липида A углеводсодержащий
материал (52% от массы LPS) фракционировали. с помощью ГПХ на
колонке (2,0 - 100 см) с Сефадексом G-50 в 0,05 М водном буфере
ацетата пиридиния pH 5,6 с получением О-полисахарида (фракция
P1), промежуточная фракция (P2), олигосахарид ядра (фракция P3) и
низкомолекулярный материал, содержащий 3-дезокси-D-манноокт-2-улозоновая кислота (Kdo) с выходами 5,0%, 2,1%, 66,7% и
26,2% соответственно от общего количества углеводного
материала, элюированного из колонки.
экспериментах TOCSY и NOESY соответственно.
2.2. Аналитические процедуры
Анализы сахара и метилирования проводили, как описано.15
Для анализа сахара O-полисахарид гидролизовали 2 M CF3CO2H (0,5 мг,
120 -C, 2 часа) или 10 M HCl (80 -C, 30 мин) или 0,1 M HCl (80 -C, 2 часа).
Сахара традиционно превращали в ацетаты альдита и анализировали
методом ГЖХ-МС.20 с использованием системы Hewlett-Packard 5971A со
стеклянной капиллярной колонкой HP-1 (0,2 мм - 12 м) и температурной
программой от 150 до 270 ° C при 8 ° C мин.-1. Метилирование Ополисахарида (0,6 мг) проводили по методу Гуннарссона.21 год В ходе
процедуры метилированные продукты выделяли экстракцией смесью
хлороформ / вода (1: 1, об. / об.), гидролизовали 2 М трифторуксусной
кислотой (120 -C, 2 ч), и частично метилированные моносахариды
превращали в ацетаты альдита и анализировали методом ГЖХ-МС, как
указано выше. О-полисахарид гидролизовали до моносахаридов с
помощью 0,1 M HCl (80 -C, 2 ч) или 2 M CF3CO2H (120 -C, 2 ч) и подвергали
бумажной и тонкослойной хроматографии. Бумажную хроматографию
выполняли на бумаге Whatman 1 в системе растворителей бутанол /
пиридин / вода (об / об / об / 4: 3: 1), а ТСХ проводили на пластинах DCFertigplatten Kieselgel в системе растворителей EtOAc / пиридин. / HOAc /
вода (об. / Об. / Об. / Об. 5: 5: 1: 3). Отделенные сахара окрашивали на
хроматограммах AgNO.3/ NaOH или молибдат / H2ТАК4 реагент (10 г Ce
(SO4)2, 25 г (NH4)2МоО4, 100 мл конц. H2ТАК4, 900 мл H2О; при 100 -С в
течение 2–5 мин) соответственно. Содержание галактозы определяли с
использованием
D-галактозооксидаза22 после
гидролиза О-полисахарида 2 М
трифторуксусной кислотой (120 -C, 2 ч).
2.3. Серологические методы
3. Результаты и их обсуждение
Слабая кислотная деградация LPS C. freundii PCM 1555 дал Oполисахарид (фракция P1), который был отделен от
низкомолекулярного основного олигосахарида (фракция P3) на колонке
Sephadex G-50. Тонкослойная и бумажная хроматография (0,5 мг Oполисахарида, гидролизованного 0,1 M HCl, 80 ° C, 2 ч) выявила
присутствие Gal, Man, Rha и другого сахара с подвижностьюрRha = 1,14
идентично колитозе (3,6-дидезокси-L-ксило-гексоза), полученный из
гидролизата Кишечная палочка O111 LPS. Сахарный анализ Oполисахарида с помощью ГЖХ-МС ацетилированных альдитов выявил
Rha, Man, Gal и 3,6-дидезоксигексозу (пики ионов фрагментов прим / з
69, 83, 96, 103, 129, 143, 156, 231) с тем же временем удерживания, что и
колитоза и ее D энантиомер (абеквоза) в мольных соотношениях 0,5: 0,7:
1,0: 0,4 (Таблица 1). Определение абсолютной конфигурации с помощью
ГЖХ ацетилированного (S) -2-октилгликозиды27 показал, что мужчина и
Гал обладают D конфигурации, тогда как Rha имеет L конфигурация.
Было обнаружено, что 3,6-дидезоксигексоза имеетD конфигурации и,
следовательно, не равны (Abe). Конфигурация галактозы (содержание
22,5%) была также подтверждена ферментативным тестом сD
-галактозооксидаза22 содержание других сахаров подтверждено
данными ЯМР (см. ниже).
Анализ метилирования O-полисахарида (гидролиз 10 M HCl, 80
-C, 30 мин) выявил метилированные производные 4-замещенной
рамнозы, 3-замещенной галактопиранозы и 2,3-дизамещенной
маннопиранозы в соотношениях 0,8: 1,2: 1,0, соответственно.
Низкое количество концевого производного 3,6-дидезоксигексозы
(м / з 69, 75, 83, 101, 117, 131, 143, 157) также обнаружено, когда для
гидролиза использовали 0,1 М HCl (80 -C, 2 ч).
Таблица 1
Данные ГЖХ – МС анализа сахара O-полисахарида Citrobacter O22 после гидролиза
разными кислотами
Моносахарид
Эйб
Rha
мужчина
Кроличья сыворотка против целых клеток C. freundii O22: 64 (Be 86/57;
PCM 1555) получали, как сообщалось ранее.23 Анти-Кишечная палочка
Гал
а Время
Тра
0,53
0,67
0,99
1.01
Молярное содержание галактозы
2 млн CF3CO2ЧАС
0,1 М HCl
10 М HCl
0,2
0,7
0,9
1.0
0,8
0,3
0,4
1.0
0,0
0,3
0,7
1.0
удерживания по ГЖХ относится к перацетилированному глюцитолу.
1726
E. Katzenellenbogen et al. / Carbohydrate Research 344 (2009) 1724–1728
В 13Спектр ЯМР 13C полисахарида (рисунок 1) продемонстрировал
свою регулярную структуру. Он содержал сигналы для четырех остатков
сахара, в том числе для четырех аномерных атомов углерода приd
101.1–103.3, два незамещенных CH2ОН-группы (C-6 Man и Gal) в d 62,0 и
62,5, два СН3 группы в d 17.0 и 18.6 (C-6 Ра и Эйба), один C–CЧАС2–Группа
С (С-3 Абэ) на d 34,4 и 15 кислородсодержащих атомов углерода
сахарных колец в регионе d 64,8–83,0. Соответственно,1Спектр ЯМР 1Н
содержал сигналы четырех аномерных протонов при d
5.06–5.33, два СН3 группы (H-6 Ра и Абэ) в d 1.34 и
1.19, один C-CH2-C группа (H-3 из Abe) в d 1.98 и 2.02 и протоны
сахарного кольца в области d 3.56-4.12. Судя по отсутствию
неаномерных сигналов углерода в более низком поле, чемd 83, все
остатки сахара находятся в форме пиранозы.28 год
В 1Рука 13Спектры ЯМР 13С полисахарида были отнесены с
использованием 1ЧАС,1H УЮТНЫЙ, ТОЧНЫЙ, РОЗОВЫЙ, 1ЧАС,13C
Эксперименты HSQC, HSQC – TOCSY и HMBC (Таблица 2). Спиновая
система Рап был выделен на основе корреляций между Rhaп H-6 (d 1.34)
и все остальные протоны этого остатка в спектре TOCSY, сигналы
которых были отнесены с помощью COSY. Назначение Рап 13Сигналы C
выполнялись с использованием данных 1ЧАС,13C HSQC эксперимент и
подтвержден 1ЧАС,13C HSQC – TOCSY, который выявил корреляции
Рап H-2 со всеми атомами углерода в остатке. Химический сдвигd
69,4 Rhaп C-5 указал а конфигурация этого остатка.29 Значительное
смещение Rha в поле нижеп C-4 сигнал от d 73,5 в незамещенных а
-Рап к d 83,0 в полисахариде показывает замещение в положении
4.
в 1Спектр ЯМР 1Н, сигналы при d 1.19, очевидно, принадлежали
H-6 и d 1.98 и 2.02 - H-3 Абэп. Сигналы для H-1, H-2 и H-4 Абэп были
отнесены по корреляции с H-3, а для H-5 - по корреляции с H-6 в
спектрах COSY и TOCSY. В13C ЯМР сигналы Abeпбыли назначены с
использованием 1ЧАС,13C HSQC эксперимент и подтвержден
1ЧАС,13C
HSQC – TOCSY, показывающий корреляции H-1 / C-2 и H-1 /
C-4, а также корреляцию H-5 / C-4 в 1ЧАС,13C HMBC спектр. В
13Химические сдвиги ЯМР C Abeп оказался характерным для
концевых 3,6-дидезокси-а-ксило-гексопиранозид.30
J2,3
J2,3
мужчинап и Галп остатки отличались относительно небольшими
3 Гц и большой J3,4
10 Гц для первого и относительно большого
10 Гц и малая J3,4
3 Гц для последнего. В1Рука 13C ЯМР
сигналы для человекап были назначены с помощью COSY, TOCSY и 1ЧАС,13C
HSQC эксперименты с помощью данных HMBC. В частности, спектр HMBC
продемонстрировалвнутри-остаток H-1 / C-3, H-1 / C-5, H-2 / C-3
Рисунок 1. 13C ЯМР спектр O-полисахарида C. freundii O22.
Таблица 2
1Рука 13Данные
C ЯМР (d, ppm) О-полисахарида Citrobacter O22
C-1
H-1
C-2
H-2
H-3 (3a, 3b)
С-4
H-4
С-5
H-5
H-6 (6a, 6b)
? 4) -а-L-Рап
103,3
71,8
4,08
70,5
3,98
83,0
3,56
69,4
3,94
18,6
1,34
? 3) -а-D-Галп
102,8
69,4
3,92
78,6
3,96
70,6
4,07
72,8
4.10
62,5
101,1
81,0
4.02
64,8
4,04
79,0
4,05
34,4
67,7
4,05
69,7
3,88
74,8
3,98
68,3
4,12
62,0
Остаток
5.06
5,18
5,33
101,9
5.11
С-3
2,02, 1,98
С-6
3,74, 3,72
3,87, 3,83
17.0
1.19
E. Katzenellenbogen et al. / Carbohydrate Research 344 (2009) 1724–1728
1727
и корреляции H-2 / C-4. Химический сдвигd 74,8 самолета С-5
продемонстрировали а конфигурация человекап (сравнивать d 74,2 и d
77,4 для С-5 из а-Мужчинап а также б-мужчинап, соответственно).29
Значительное смещение сигналов для человека в слабое поле.п C-2 и
C-3 изd 71,5 в незамещенном остатке29 к d 81.0 и d 79,0, соответственно,
указывает на то, что этот остаток дизамещен в положениях 2 и 3.
Эта структура наиболее близка к структуре O-полисахаридов
Сальмонелла серовары группы B.32,33 О-полисахариды
Сальмонелла группы A, B и D имеют одну и ту же основную цепь с
повторением трисахарида Man-Rha-Gal, который замещен
разными 3,6-дидезоксигексозами. Эти необычные моносахариды, в
том числе абеквоза, находятся почти исключительно в Оантигенных компонентах бактериальных липополисахаридов.32
Спектр TOCSY показал корреляцию H-1 Galп с H-2, H-3 и H-4,
которые были назначены путем отслеживания связей в спектре
COSY и позволили назначить сигналы C-2, C-3 и C-4. Сигналы для
H-5 и H-6, а также для соответствующих атомов углерода были
присвоены корреляцией H-1 / C-5 в
1ЧАС,13C HMBC спектр, корреляция H-5 / C-5 в 1ЧАС,13Спектр C HSQC
и корреляции H-5 / H6a и H-5 / H6b в спектре COSY. Относительно
небольшойJ1,2 значение (<3 Гц) выявило а конфигурация Галп.
Значительное смещение сигнала C-3 в слабое поле от d 70,4 в
незамещенном остатке до d 78.6 продемонстрирована замена а
-Галп в позиции 3.
и в значительной степени способствуют серологической специфичности
бактерий. К настоящему времени пять из восьми возможных изомеров были
обнаружены у нескольких видов бактерий, в том числе четыре (абеквоза,
паратоза, тивелоза и колитоза) в штаммах бактерий.Сальмонелла энтерика и
все пять (включая аскарилозу) в составе штаммов Иерсиния
псевдотуберкулезная (структуры см. в Базе данных структур бактериальных
углеводов по адресу http://www.glyco.ac.ru/bcsdb) Abequose был обнаружен
ранее в О-антигенах Сальмонелла группа B32,33, Сальмонелла Кентукки,34
Citrobacter O3835 год а также Citrobacter штамм 39611,36
(Рис. 2). О-антиген, содержащий абеквозу,Citrobacter O22, изучаемый в
данной работе, отличается от Сальмонелла группа B O-антигенов при
В 1ЧАС,13Спектр C HMBC показал следующее меж-кросс-пики
остатков: Rhaп H-1, Галп С-3; Эйбп H-1, Мужчинап С-3; Галп C-1, человекп
H-2 и человекп H-1, Rhaп С-4. Это подтвердило картину замещения
моносахаридных остатков и выявило их последовательность в
повторяющейся единице. Все эти результаты были подтверждены
экспериментом ROESY (данные не показаны).
Принимая D конфигурация Gal как ссылка, 13Химические сдвиги
полисахарида C ЯМР анализировали с использованием базы данных
BIOPSEL.31 год для подтверждения абсолютной конфигурации
моносахаридов. Сравнение наблюдаемыхаэффекты гликозилирования (
г) на углеродных связях с ожидаемыми значениями показали
следующие относительные абсолютные конфигурации моносахаридов
в дисахаридных фрагментах: а-Галп-(1? 2) -а-Мужчинап-DD-пара
(ожидается d +9.7 для DD а также d +6.0 для DL d +6.0, наблюдается d +9.5);
отсутствии глюкозилирования.
-пара (ожидается d +7.4 для DD а также d +5.5 для DL, наблюдаемый d
freundiiO22 сыворотка и, наоборот, анти-Кишечная палочка В сыворотке O111 не
+ 7,5). Эти данные выявили следующие абсолютные конфигурации
моносахаридов:D для мужчин, L для Ра и D для 3,6-дидезокси-ксилогексоза (Abe).
обнаружен ЛПС, содержащий абеквозу, но гомологичный ЛПС, содержащий
а-Рап-(1? 3) -а-Галп-LD-пара (ожидается d +3.9 для DD а также d +8.1 для LD,
наблюдаемый d +8.2); а-Мужчинап-(1? 4) -а-Рап-DL-пара (ожидаетсяd +7.6 для
DD а также d +9.2 для DL, наблюдаемый d +9.5); а-Абеп-(1? 3) -а-мужчинап-DD
На основании полученных данных был сделан вывод, что
повторяющийся блок Citrobacter O22-полисахарид имеет структуру 1,
как показано на фигура 2.
Ряд абэквоз-содержащих ЛПС из Citrobacter а также Сальмонелла
были проанализированы с помощью SDS – PAGE (Рис. 3А) и
протестирован в иммуноблоттинге с антисывороткой против C. freundii
Клетки O22 (Рис. 3Б). Все ЛПС демонстрировали лестничный узор из
медленно мигрирующих высокомолекулярных видов ЛПС с Ополисахаридными цепями разной длины, а также быстро мигрирующих
полос короткоцепочечных видов ЛПС без О-полисахарида,
прикрепленного к сердцевине. Анти-C. freundiiСыворотка O22
распознала гомологичный ЛПС и ЛПС СальмонеллаШтаммы B, включая
серовары Typhimurium, Brandenburg, Sandiego и Paratyphi B.Другие ЛПС,
содержащие абеквозу, включая таковые из C. werkmanii O38 и
Сальмонелла Кентукки, не реагировали с этой антисывороткой и,
следовательно, не связаны серологически. Отсутствие перекрестной
реактивности, по-видимому, объясняется различным строением
основной цепи О-полисахаридов этих бактерий.
ЛПС Кишечная палочка O111 не вступал в перекрестную реакцию с анти-C.
концевые а-колитозные остатки37 (Рис. 3C). Отсутствие серологической
перекрестной реактивности, очевидно, связано с различными абсолютными
конфигурациями колитозы и абеквозы и подтверждает более ранние наблюдения,
что 3,6-дидезоксигексозы являются иммунодоминантными сахарами в
бактериальных О-антигенах.
Фигура 2. Структуры абэквозсодержащих О-полисахаридов C. freundii O22 (эта работа) и Сальмонелла группа B32,33 (1), C. werkmanii O3835 год а также Сальмонелла Кентукки34
(2), а также Citrobacter штамм 39636 (3). В Сальмонелла группа B, глюкозилирование не показано. ВСальмонелла Кентукки, О-ацетилирование отсутствует, а глюкоза присутствует в 75% повторяющихся
единицах.
1728
E. Katzenellenbogen et al. / Carbohydrate Research 344 (2009) 1724–1728
2. Веркман, Швейцария; Гиллен, GFJ. Bacteriol. 1932 г., 23, 167–182.
3. Доран Т.И. Clin. Заразить. Дис.1999, 28, 384–394.
4. Барсук, JL; Стинс, MF; Ким, KSЗаразить. Иммун.1999, 67, 4208–4215.
5. Sedlak, J .; Слайсова, М.Zbl. Бакт. Hyg. Abt I. Orig.1966 г., 200, 369–374.
6. Sedlak, J .; Слайсова, М.J. Gen. Microbiol. 1966 г., 43, 151–158.
7. Keleti, J .; Lüderitz, O .; Mlynarcik, D .; Седлак, Я.Евро. J. Biochem.1971 г., 20, 237–
244.
8. Ланьи, Б. Методы Microbiol. 1984, 15, 144–171.
9. Бреннер, DJ; Гримонт, Пенсильвания; Steigerwalt, AG; Fanning, GR; Ageron, E .;
Загадка, CFInt. J. Syst. Бактериол.1993 г., 43, 645–658.
10. Miki, K .; Тамура, К .; Sakazaki, R .; Косако, Ю.Microbiol. Иммунол.1996 г., 40, 915–
921.
11. Книрель, Ю.А.; Кочарова Н.А. Быстрова, О.В. Katzenellenbogen, E .; Гамиан, А.Arch.
Иммунол. Exp. Ther.2002 г., 50, 379–391.
12. Schauer, DB; Забель, Б.А.; Pedraza, IF; О'Хара, CM; Steigerwalt, AG; Бреннер,
диджейJ. Clin. Microbiol.1995, 33, 2064–2068.
13. Бреннер, DJ; О'Хара, CM; Гримонт, Пенсильвания; Janda, JM; Falsen, E .; Алдова, Е .;
Ageron, E .; Schindler, J .; Abbott, SL; Steigerwalt, AGJ. Clin. Microbiol.1999,
37, 2619–2624.
14. Katzenellenbogen, E .; Кочарова Н.А.; Затонский, Г.В.; Богульская, М .; Rybka, J .;
Gamian, A .; Шашков А.С.; Книрель Ю.А.Углеводы. Res.2003 г.,
338, г. 1389–1395.
15. Katzenellenbogen, E .; Кочарова Н.А. Затонский, Г.В.; Witkowska, D .; Богульская,
М .; Шашков А.С.; Gamian, A .; Книрель Я.Евро. J. Biochem.2003 г.,
270, 2732–2738.
16. Овчинникова, О.Г .; Кочарова Н.А.; Katzenellenbogen, E .; Затонский, Г.В.; Шашков
А.С.; Книрель, Ю.А.; Липинский, Т .; Гамиан, А.Углеводы. Res.2004 г., 339, г.881–
884.
17. Katzenellenbogen, E .; Тукач П.В.; Кочарова Н.А.; Корзенёвская-Коваль,
А .; Gamian, A .; Шашков А.С.; Книрель Я.ФЭМС Иммунол. Med. Microbiol.2008 г.,
53, 60–64.
18. Westphal, O .; Янн, К.Методы Carbohydr. Chem.1965 г., 5, 83–91.
19. Романовская, Э. Анальный. Biochem.1970 г., 33, 383–389.
20. Sawardeker, JS; Sloneker, JH; Джинс, А.Анальный. Chem.1965 г., 37, 1602–1604.
21. Гуннарссон, А. Гликоконъюгат J. 1987, 4, 239–245.
22. Fischer, W .; Цапф, Дж.Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem.1964 г., 337, г. 186–195.
23. Gamian, A .; Romanowska, E .; Романовская, А.FEMS Microbiol. Иммунол.1992,
89, 323–328.
24. Лэммли, Великобритания Природа 1970 г., 227, 680–685.
25. Tsai, C .; Фраш, CEАнальный. Biochem.1982 г., 119, 115–119.
26. Towbin, H .; Staehelin, T .; Гордон, Дж.Proc. Natl. Акад. Sci. Соединенные Штаты Америки1979, 76, 4350– 4354.
Рисунок 3. Окрашенный серебром SDS – PAGE (A) и иммуноблоттинг с анти-C. freundiiO22
сыворотка (B) и анти-Кишечная палочка O111 сыворотка (C) ЛПС из: (1) C. freundii О22 (ПКМ
1555); (2)C. werkmanii О38 (ПКМ 1489); (3)Сальмонелла Кентукки (PCM 1720); (4)Сальмонелла
Бранденбург (PCM 1734); (5)Сальмонелла Сандиего (PCM 1730); (6)Сальмонелла Paratyphi B
(PCM 855); (7)Сальмонелла Тифимуриум (PCM 999); (8)Кишечная палочка О111 (PCM 277).
использованная литература
1. Браак, HR Диссертация, WD Meinema-Utitgeurer, Делфт, Нидерланды, 1928. С. 166.
27. Leontein, K .; Lindberg, B .; Лённгрен, Дж.Углеводы. Res.1978, 62, 359–362.
28. Bock, K .; Педерсен, К.Adv. Углеводы. Chem. Biochem.1983, 41, 27–66.
29. Lipkind, GM; Шасков АС; Книрель, Ю.А.; Виноградов Э.В. Кочетков Н КУглеводы.
Res.1988 г., 175, 59–75.
30. Связка, DR; Джозефсон, С.Жестяная банка. J. Chem.1978, 56, 2686–2690.
31. Тукач, Ф.В.; Шашков А СУглеводы. Res.2001, 335, 101–114.
32. Knirel, YA; Кочетков Н КБиохимия (Москва) 1994, 59, 1325–1383.
33. Szafranek, J .; Kumirska, J .; Czerwicka, M .; Куниковская, Д .; Дзядюшко, H .;
Глосницкая, Р.ФЭМС Иммунол. Med. Microbiol.2006, 48, 223–236.
34. Торгов, В.И.; Шибаев, В.Н.; Шашков А.С.; Рожнова С СУглеводы. Res.1990 г., 208,
293–300.
35. Кочарова, Н.А. Книрель, Ю.А.; Станиславский Е.С.; Холодкова Е.В.; Луговский,
C .; Jachymek, W .; Романовская, Э.ФЭМС Иммунол. Med. Microbiol.1996 г., 13, 1–
8.
36. Jann, B .; Prehm, P .; Янн, К.J. Bacteriol. 1978, 134, 462–469.
37. Stenuz, R .; Weintraub, A .; Видмальм, Г.FEMS Microbiol. Ред.2006, 30, 382–403.