End points =( ENDPOINTנקודות הוצאה מהניסוי) הומני הינה הנקודה המוקדמת ביותר (ומוצדקת מבחינה מדעית) שבא ניתן למנוע או להפחית כאב או סבל תוך כדי עמידה ביעדים המדעיים ומטרות המחקר נקודות אלה עדיפות על פני מוות או מחלה כיוון שהן מצמצמות את הכאב והסבל ולכן נחשבות עידון (.)refinement דורשות חוקרים מוסמכים ומאומנים בהבחנה במצבים הדורשים טיפול. יש צורך לפרט אילו שינויים ספציפיים יסמנו את הצורך בטיפול ע"מ להקטין כאב וסבל חשוב לנטר ולשפר במהלך המחקר את נקודות הסיום בהתאם למצב החיות חלק מכל הצעת מחקר לוועדת האתיקה. במצב אידאלי היינו רוצים שמטרות המחקר יושגו ללא תופעות לואי ,כאב או סבל (.)DISTRESS כשלא ניתן – יש להתייחס לנקודות הבאות: הדרישות המדעיות של המחקר מהם תופעות הלואי שהחיות יחוו במהלך המחקר (כאב ,מחלה ,סבל) טווח הזמן וההתקדמות של תופעות הלואי מהם האינדיקטורים המוקדמים ביותר של תופעות הלואי 4סוגים של ENDPOINTS – Humane Endpoints הנקודה בה נמנע הכאב והסבל של החיה – Experimental Endpoints כשמטרות המחקר הושגו – Cumulative Endpoints מאגר הכאב והסבל שנגרם בעקבות המחקר לאורך חיי החיה (ניסויי PKחוזרים באותן חיות ,מתן בגבאז' מדי יום) – Lifetime Use Endpoints בד"כ בהקשר להזדקנות .מה עושים עם החיה בסוף הניסוי (המתה ,אימוץ וכו') Distress An aversive state resulting from maladaptation or inability to adapt to stressors The major stressors associated with distress are situations that may give rise to marked pain, fear, or anxiety Usually associated with a change in locomotion and can result in stereotypic behaviore.g. Retreat to the corner of the cage, excessive struggling, running around, or vocalizing on anticipation of dosing Death Predictable Death Presence of clinical signs indicative of death e.g. inability to reach water or food Impending Death When moribund state or death is expected e.g. dyspnea, recumbency, tremors Moribund Being in state of dying or inability to survive, even if treated הערכת מצב החיה קריטריונים שמתאימים לרוב חיות המעבדה: .1לפי 5המצבים עפ"י :Morton and Griffiths .1משקל גוף .2מראה חיצוני .3סימנים קלינים הניתנים למדידה .4התנהגות טבעית .5תגובה לגירוי חיצוני .2 .3 תצפית קלינית במחקר בסרטן או טוקסיקולוגיה :שינויים מראה חיצוני, עור ,שיער ,עיניים ,אף ,פה וראש ,נשימה ,שתן ,צואה ,ותנועה (טבלה בשקף הבא) Body condition (BC) scoring BODY SCORE חומרת ומשך הסימנים הקליניים והתגובה לטיפול יכולים לשמש כ ENDPOINT ירידה מהירה או פרוגרסיבית במשקל חוסר עלייה לפי טבלאות גדילה בצעירים ירידה במצב הגופני ללא ירידה במשקל אנורקסיה (מחוסר יכולת או חוסר רצון) או חוסר יכולת לשתות התיבשות /ירידה בטונוס העור שלשול מתיש בצקת הגדלה בטנית או ascites דרמטיטיס פרוגרסיבי. פרווה לא מטופלת רביצה או מיעוט בתנועה ()Lethargy ( Loss of a righting reflexהמנעות משכיבה על הגב) שיעול ,נשימה מאומצת ,הפרשות מהאף ,צהבת ,ציאנוזיז ,אנמיה סימנים נוירולוגים :פרכוסים ,שיתוק ,הטיית ראש ,סיבובים, עיוורון דימום מפתח כלשהו טראומה עצמית מצב המונע פעילות יומיומית (בניית קן ,אכילה ,שתיה ,עמידה) היפר/היפו-תרמיה ממושכת בחיות מיםscoliosis, emaciation, significant skin : lesions and/or exposure of muscle or other tissue בדגי זברה :חוסר שוו"מ ,חוסר תנועה וחוסר תגובה ,מצוקה נשימתית סימנים נוספים במודל סרטן עומס הגידול > 10%ממשקל החיה לא יעלה על 20מ"מ (בעכבר) 40 /מ"מ (בחולדה) בכיוון כלשהו. גידולים מזוהמים או נקרוטים גידולים הפוגעים ביכול האכילה או תנועה. Melanoma tumor at the tail base https://www.humane-endpoints.info/en/observation Hydrocephalus in the mouse סימנים במודל זיקנה תגובת החיה הזקנה אינה דומה לחיה צעירה .שינויים משקל וטמפ'. קיימות מחלות טבעיות לגיל הזיקנה בהתאם לזן ,מין ,גיל מחקר לאורך שנים :בחיות גדולות :בדיקות דם ,שתן ,ואיברים (בבדיקות לא פולשניות) תופעות לואי במצבים לא צפויים טיפול מיידי (אם לא מפריע למחקר) או המתה. במידה והשינוי חיוני למחקר – יש לבקש אישור מתוקן במצבים שאינם קשורים לניסוי עצמו (גידול ספונטני ,מצבי מחלה/התדרדרות): כשלא ניתן לאכול או לשתות – יש להמית לבחון השפעה על המחקר ועל רווחת החיה .אם לא משפיע על המחקר – ניתן לטפל .אם מתדרדר להמית. Observation-based Scoring System are Advantageous Clinical signs can be tracked to provide objective judgment of animal pain and distress Utility increases if: Observer is knowledgeable of normal behavioral and clinical parameters Number of scoring options are limited increased consistency תוכנית ניטור לפני ואחרי השינויים הצפויים העלאת קצב הניטור או טיפול התיחסות לסופי שבוע וחגים (תגבור ע"י החוקרים) הגדרת האנשים שאחראים להערכה ,טיפול ,תיעוד והמתה. דפי ניקוד למצב החיה – מתועדים ומנוטרים באופן קבוע. במודלים עם מוות או נטייה למוות ()moribundity = moribundמוגדר כמצב בלתי הפיך שמוביל למוות סימנים אפשריים: חוסר תגובה לגירוי ידני תוסר תזוזה חוסר יכולת לאכול /לשתות סוגי מודלים למצב זה: מחלות זיהומיות ( ,)fecal ligationניסויי טוקסיקולוגיה ,סרטן בחינת המודל לפי הנהלים הבאים: הנתונים לשקילת מוות כ ENDPOINT הרציונל המחקרי האם יש חלופות למוות ,מדוע לא ניתן להסתפק בתחלואה ,ומתי כן אפשר להחליף בתחלואה מדוע לא ניתן להשתמש בשיכוך כאבים המספר המינימלי ההכרחי של חיות שיגיעו למצב הזה. האם חיה תומת כשהיא נוטה למות ואיזה נתונים אפשר לאסוף אם מחכים עד המוות. תוכנית לניטור וטיפול ניטור יומיומי ע"י מטפל מיומן שמכיר את הסימנים (חולני ,פרווה סמורה ,ראש צמוד לבטן ,הפרשות מסביב לעיניים/אף ,לקויות עור ,נשימה לא תקינה ,חוסר תגובה ופגיעה-עצמית ,ירישה באכילה/שתייה) עלייה בתדירות ניטור כשיש סימנים כנ"ל ,שיתוף ויידוע המצב ותוכנית טיפול מותאמת אפשרות לבידוד החיה החולה ,הוצאת המת מהכלוב תיעוד Imaging/Biomarkers שימוש בנ"ל כיכולת לצפות מוקדם יותר תהליכי תחלואה לפני סימנים קלינים ENDPOINT בעיקר במודלים שבהם מוות הוא :דוגמאות Two mice infected with an enteric microorganism that causes an inflammation of the intestines. The lower animal (treated) has been given an antibiotic whereas the upper animal (untreated) has not. The red color indicates the spread of the pathogen through the intestinal canal. Imaging pictures at 0 h (start of treatment) and 5,5 h. סימון תא סרטני או פתוגן עם גן לוציפראז – מעקב גדילה או התפזרות בגוף בצורה לא פולשנית וסיום הניסוי לפני סימנים קלינים .במודל סרטן – מעקב אחרי התבטאות חלבונים במקום צורת הגידול לאחר החיסון בודקים נוטרליזציה של הפתוגן בבדיקת הדם במקום-בחיסונים .להדביק את החיה בפתוגן https://www.humane-endpoints.info/en/types-ofhumane-endpoints החלפת נקודות סיום קליניות בנקודות סיום לא-קליניות Hormonal indicators of stress Glucocorticoids: Vertebrate Stress Hormones (cortisol in fish and many mammals) Catecholamaines, corticosteroids, prolactin, TNF, IL collecting blood samples itself can disturb an animal. Thus, nonin vasive methods for the determination of glucocorticoids or their metabolites have become increasingly popular. The Interspecies Database (www.interspeciesinfo.com external link) provides insight into physiological, anatomical and biochemical parameters of different animal species and humans. By using the database, researchers can design their experiments smarter with respect to the choice of an animal model. This could lead to a reduction in the number of experimental animals. Above all, this improves the scientific research quality. Users have indicated a reduction of on average 20% of laboratory animals annually, while some users reported a reduction of up to 40%. The website was initiated by the Dutch Institute for Public Health and the Environment (RIVM), which is responsible for the database content.
