TLC Tyndtlagskromatografi (Thin Layer Chromatography) Denis Trpcevski Kromatografi • Kromatografi er separation af to eller flere molekyler eller ioner ved fordelingen mellem to faser; en som bevæger sig (den mobile fase), og en stillestående (den stationære fase). • Disse to faser kan være fast-væske, væske-væske, gas-væske eller gas-fast. TLC Tyndtlagskromatografi eller TLC, er en fast-flydende form af kromatografi, hvor den stationære fase normalt er et polært absorberende middel, og den mobile fase kan være et enkelt opløsningsmiddel, eller en kombination af opløsningsmidler. TLC er en hurtig, billig mikroskala-teknik, der kan bruges til: • • • • • Bestemme antallet af komponenter i en blanding. Identificerer stoffer. Følge fremskridtet i en reaktion. Bestemme passende betingelser for søjlekromatografi. Analysere de fraktioner opnået fra søjlekromatografi. Teori Alle former for kromatografi involverer en dynamisk og hurtig ligevægt af molekyler mellem de to faser. : • Frie - fuldstændigt opløst i den flydende eller gasformige mobil fase • Absorberede - fast på overfladen af den faste stationære fase. Blanding af A & B fri i mobil fase og absorberet på den stationære fase. Teori ligevægten mellem den frie og absorberede tilstand tre faktorer: • Molekylets polaritet (og størrelse). • Polariteten af den stationære fase. • Solventens (eller solventblandingens) polaritet. afhænger af Teori For at opnå en separation, skal den mobile fase flyde forbi den stationære fase. Da A molekylerne bruger mere tid i den mobile fase, vil de blive ført gennem den stationære fase hurtigere og bevæger sig længere i en given tid. Eftersom B absorberes til den stationære fase mere end A, bruger B molekyler mindre tid i mobilfasen og bevæger sig derfor langsomt gennem de stationære fasepartikler. Stationære fase • I TLC er den stationære fase typisk silicagel (SiO2xH2O)n eller aluminiumoxid (Al2O3xH2O)n Det kovalente netværk af disse absorberende stoffer skaber meget polære materialer. vist nedenfor: Stationære fase Molekylers interaktion med den stationære fase. Den mobile fase • At finde et godt eluentsystem (solventblanding) er normalt den sværeste del af TLC. Adskillese Start med et ikke-polært opløsningsmiddel, såsom petroliumsether e.lign., og observér adskillelsen. Hvis blandingens komponenter ikke bevæger sig særligt langt, skal man tilføje et polært opløsningsmiddel som f.eks. ethylacetat. Hvis pletterne befinder sig i bunden af pladen; Tilsæt mere af det polære opløsningsmiddel. Hvis de løber med eluentfronten; tilføj mere ikke-polært opløsningsmiddel. Trin i TLC-analyse • • • • Forbered TLC-kar med eluent(blanding). Forbered TLC pladen. Fremstil evt. mikropipetter af kapilarrør. Påfør stof til TLC-pladen med mikrokapillarrør. (Kræver måske fremstilling af en opløsning). • Fremkald pladen. • Visualiser pladen (UV-lys el. Iod) • Beregn og angiv Rf-værdier. Fremstilling af TLC-pladen Fremstilling af mikropipetter af kapillarrør. Påfør stof til TLC-pladen. Fremkald pladen. Visualiser pladen Beregn og angiv Rf-værdier Rf-værdien er "forsinkelsesfaktoren" (retardation factor). Rf = Stoffets afstand fra bundlinien Eluentfrontens afstand fra bundlinien Rf-værdi Rf-værdien for en forbindelse er kun konstant fra et eksperiment til det næste, hvis de kromatografiske betingelser nedenfor er også konstante: • • • • • Opløsningsmiddelsystem. Adsorbent (stationære fase). Adsorbens tykkelse. Mængde af materiale som er spottet. Temperatur.