Kultur Jaringan Tumbuhan
Mata Kuliah: Kultur Jaringan Tumbuhan
Jesslyn Gitta Vania
1308617047
Biologi B 2017
Sterilisasi Media Kultur
Jaringan Tumbuhan
Perlengkapan Sterilisasi dengan
Pressure Cooker
Alat
• Pressure cooker
• Kontainer berbahan polypropylene
• Lapisan pembatas (spacer)
Bahan
• Air keran
Hal yang perlu diperhatikan
• Tidak perlu menyegel wadah  pemuaian, dinding kontainer tipis
• Tidak boleh ditumpuk secara langsung  resiko hancur
• Setiap wadah diisi dengan cairan  mengurangi tekanan dan panas yang
diterima wadah ketika sterilisasi berlangsung
Teknik Aseptis Kultur
Jaringan Tumbuhan
Teknik Aseptis
untuk Personal
Hal yang perlu diperhatikan
• Menggunakan APD (alat pelindung diri) setiap kali memasuki lab seperti
sarung tangan, jas lab dan dicuci setiap minggu
• Mengingat lembar data keamanan bahan kimia  terutama reagen yang
digunakan selama bekerja di lab
• Mencuci tangan
Teknik Aseptis untuk
Lingkungan Kerja
Hal yang perlu diperhatikan
•
•
•
•
•
Menyalakan sinar UV pada Laminar Air Flow selama 10 menit
Menyalakan blower pada Laminar Air Flow selama 30 menit
Menyemprotkan 70% etanol di dalam ruang kerja Laminar Air Flow setelah sinar UV dan
blower dinyalakan
Menyemprotkan 70% etanol pada biosafety cabinet, tangan/sarung tangan, meja tempat
kerja sebelum memasukan alat atau bahan ke dalam Laminar Air Flow dan sesudah selesai
bekerja
Membuka segel dengan ¼ bagian tangan saja yang menyentuh untuk menghindari resiko
kontaminasi
• Menutup dengan segera bahan setelah digunakan dengan kapas/sumbat
• Memperhatikan penggunaan alat dengan efektif sesuai kebutuhan
(misalnya pengaturan kecepatan untuk pipet)
• Mematikan Laminar Air Flow dan mengembalikan alat dan bahan kembali
ke tempat penyimpanan setelah selesai digunakan
Preparasi dan Pembuatan
Medium Kultur Jaringan
Tumbuhan
Peralatan yang diperlukan
Alat
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Timbangan dengan presisi 300g/0.01g
Gelas ukur volume 4L
Magnetic stirrer
Alat ukur pH
Autoklaf / pressure cooker
Plester (tape) yang sudah disterilisasi
Sendok
Gelas ISO autoclavable
Kertas saring
Vitamin
Zat pengatur tumbuh (ZPT)
Bahan
•
•
•
•
Jenis medium tergantung kebutuhan
Gelling agent (agar)
Air
Larutan pengatur pH (sodium hydroxide,
potassium hydroxide atau hydrochloric acid)
Langkah Pengerjaan Preparasi Medium
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Jumlah medium untuk kultur jaringan ditimbang
Medium ditambahkan ke dalam erlenmayer
Air yang terdistilasi ditambahkan ke erlenmayer
Medium dipanaskan hingga mendidih dengan magnetic stirrer
Magnet ditambahkan, lalu tutup mulut labu erlenmayer
Magnet dikeluarkan, dan larutan medium dituangkan ke gelas ISO autoclavable
Gelas dipasangkan dengan plester indikator
Dilakukan autoklaf pada gelas sesuai instruksi
Medium didinginkan selama 30-180 menit
Hal yang perlu diperhatikan
• Gunakan kertas saring setiap ingin melakukan penimbangan
• Pastikan campuran air, agar, dan karbohidrat berkisar 80% memenuhi
medium
• Membuat larutan stok untuk medium, dengan penambahan ZPT dan
vitamin sebesar 1ml/L
• Selalu mengecek label untuk memastikan konsentrasi yang diperlukan
• Pastikan pH medium sesuai untuk kondisi kultur jaringan
• Waktu dan suhu sterilisasi 121℃ selama 15 menit
• Selalu ukur dan catat berat medium