UNIVERSIDAD NACIONAL DE LOJA
MODALIDAD DE ESTUDIOS PRESENCIAL
FACULTAD AGROPECUARIA Y DE RECURSOS
NATURALES RENOVABLES
CARRERA DE INGENIERIA Agronómica
Ciclo viii.
ASIGNATURA: cultivos in vitro
PRÁCTICA DE LABORATRIO N°1
TEMA:
Reconocimiento y familiarización de los
ambientes de trabajo, equipos y
materiales usados en el laboratorio de
micropropagación.
DOCENTE: ING. VICTOR HUGO ERAS
ESTUDIENTE: Paul Andres Campoverde torres
PERÍODO ACADÉMICO
ABRIL–SEPTIEMBRE 2019
Loja-ecuador
Fecha de entrega: 29-05-2019
INTRODUCCIÓN
I.
La micropropagación consiste en la propagación de plantas en un ambiente artificial
controlado, empleando un medio de cultivo adecuado. El cultivo es así una herramienta
muy útil en los programas de mejoramiento genético, ya que tiene se puede potenciar al
producir plantas de calidad de manera uniforme que sean importantes en el comercio, a
partir de un genotipo selecto y con una tasa de multiplicación ilimitada.
Dentro de un laboratorio de micropropagación propagación se debe tener muy en cuenta
la importancia de la asepsia, la cual nos garantiza tanto un ambiente de trabajo sin
contaminación de agentes externos como un material vegetal limpio, de manera que esto
nos asegura que la práctica realizada no se altere por algún patógeno que interfiera en
el desarrollo normal de los cultivos de micropropagación.
OBJETIVOS


Familiarizar al estudiante con las adecuaciones, insumos y ambientes de trabajo
del laboratorio de micropropagación.
Reconocer los equipos, materiales fungibles, insumos y vidriería utilizados en el
cultivo de tejidos vegetales y su uso.
II.
2.1.
REVISIÓN DE LITERATURA
Micropropagación vegetal
Se puede definir a la micropropagación como:” un conjunto de técnicas heterogéneas que
consiste en aislar y cultivar en medios de composición conocida y en condiciones de
asepsia un explanto bajo temperatura, humedad y luz controladas.” (Namur, 2012).
2.1.1. Que es asepsia.
Se trata de la ausencia de materia séptica, es decir, la inexistencia de sustancias que
causan putrefacción y de gérmenes patógenos. Por tanto, es un estado sin infección.
También se conoce como asepsia al conjunto de procedimientos y técnicas utilizados
para evitar que lleguen a nuestro organismo gérmenes, bacterias, virus y hongos
(LimpiezaSIL, 2017)
2.1.1.1.
Importancia de la Asepsia
La piel es la primera barrera de defensa del cuerpo, que al estar intacta evita que sea
invadido por gérmenes que puedan producir infección. Al aplicar una inyección se perfora
la piel y se expone al paciente al peligro de contraer una infección. Para evitar este riesgo,
es indispensable que quien coloque una inyección domine las técnicas de asepsia, para
ello debe conocer algunos conceptos.





GERMEN PATÓGENO: microorganismo capa& de producir enfermedad.
INFECCIÓN: invasión del organismo por gérmenes patógenos.
MATERIAL LIMPIO: libre de gérmenes patógenos.
MATERIAL ESTÉRIL: libre de toda clase de microorganismos (patógenos y no
patógenos)
MATERIAL CONTAMINADO: alberga gérmenes patógenos.
2.2.
Cultivo in vitro
El cultivo in vitro consiste en tomar una porción de una planta (ej. el ápice, una hoja o
segmento de ella, segmento de tallo, meristemo, embrión, nudo, semilla, antera, etc.) y
colocarla en un medio nutritivo estéril (usualmente gelificado, semisólido) donde se
regenerará una o muchas plantas. Durante las últimas décadas, la técnica del cultivo “in
vitro” ha ganado especial interés para el establecimiento de diversas plantas para la
producción de compuestos o la obtención de cultivos más sanos y con características
genéticas específicas (INTAGRI S.C, 2017).
2.3. Normas básicas de seguridad del laboratorio.
2.3.1. Equipos de protección personal
 Utilizar antiparras de seguridad para evitar salpicaduras
 No utilizar lentes de contacto, ya que en caso de accidente las salpicaduras de
productos químicos o sus vapores pueden pasar detrás de los lentes y provocar
lesiones.
 Se debe usar guardapolvo de mangas largas en el laboratorio.
 La ropa y el calzado deberá cubrir la mayor superficie del cuerpo posible.
 El pelo largo supone un riesgo que puede evitarse fácilmente recogiéndolo en
una cola.
 Utilizar guantes que correspondan al riesgo al que se está expuesto (sobre todo
cuando se utilizan sustancias corrosivas o tóxicas).
 Evitar que las mangas, puños o pulseras estén cerca de las llamas o de la
máquina eléctrica en funcionamiento.
2.3.2. Normas higiénicas - condiciones generales de trabajo
 No comer, ni beber en el laboratorio, ya que hay la posibilidad de que los
alimentos o bebidas se hayan contaminado con productos químicos.
 Los recipientes de laboratorio nunca deben utilizarse para el consumo y
conservación de alimentos
 Lavarse las manos después de cada trabajo práctico: y, antes de salir del
laboratorio.
 No fumar en el laboratorio.
 No inhalar, probar u oler productos químicos.
 Cerrar herméticamente los frascos de productos químicos después de
utilizarlos.
 El área de trabajo tiene que mantenerse siempre limpia y ordenada.
 Todos los productos químicos derramados tienen que ser limpiados
inmediatamente.
III.
MÉTODOLOGÍA
3.1. Materiales
 Cámara
 Libreta
 Mandil
3.2. Métodos
 Observación e identificación de materiales y de áreasde trabajo de
micropropagación vegetal.
IV.
4.1.
RESULTADOS
Equipos
№ Nombre
Foto
Uso
1
Estufa
Para la esterilización por
secado, la temperatura
se debe de conservar a
140°C durante 4 horas o
bien 150°C –180°C por
una hora.
2
Microondas
 Para cocción de
medios de cultivos
 Para
disolver
el
agente gelificante.
3
Balanza analítica
Permite pesar pesos de
precisión de hormonas,
sustancias minerales y
vitaminas, para pesos
inferiores a 1 gramo
4
Balanza granataria
Para pesos mayores 1
gramo, capacidad 120g
Se
puede
pesar
vitaminas,
hormonas,
sustancias, etc.
5
Autoclave
Son equipos con vapor a
presión, se utiliza para
esterilizar medios de
cultivo, agua, cristalería
y algunas sustancias
que no son termolábiles,
los modelos a base de
vapor de agua son los
de tipo horizontales y
verticales.
6
Esterilización de
agua
Elimina sales, mediante
el
proceso
de
evaporización,
se
obtiene 2.5L por hora de
agua destilada.
7
Saranda orbital o
sheique
Para cultivos de callos,
células en suspensión,
ayuda a dar oxigenación
en
constante
movimiento
8
Estereomicroscopio
Se utilizan para aislar
meristemos apicales y
pequeños pedazos de
tejidos
y
para
observación de células
a través de las paredes
de vidrio de tubos o
matraces.
9
Medidor de ph
Su función es ajustar el
Ph de los medios de
cultivo sólidos y íquidos
durante el período de
incubación.
10 Microscopio
electrónico
Para poder observar
una célula o tejido al
microscopio de campo
claro convencional hay
que fijarla y hacerle una
tinción, lo que implica, la
muerte de la célula en
cuestión.
11 Agitador magnético
Para hacer mesclas
homogéneas, se pone
los vasos de precisión.
4.2.
Materiales vidriería
№ Nombre
1
Vasos de
precipitación
Foto
Uso
Es un recipiente cilíndrico de
vidrio borosilicado fino que
se utiliza para preparar o
calentar sustancias y
traspasar líquidos.
2
Probetas
Es
un
instrumento
volumétrico, consiste en un
cilindro graduado que sirve
para contener líquidos y
medir volúmenes de forma
aproximada.
3
Balón
Para
el
calentamiento
uniforme
de
distintas
sustancias, evita derrames.
volumétrico
4
Tubos ensayos
Se utiliza para contener
pequeñas muestras líquidas
o sólidas, también son
utilizados
para
realizar
reacciones químicas en
pequeña escala.
5
Embudos
Este instrumento se emplea
para drenar líquidos y
materiales gaseosos en
recipientes
con
bocas
angostas.
6
Cajas Petri
Es un recipiente redondo, en
la mayoría de ocasiones
cuenta con una tapa. Se
utiliza en la microbiología, se
emplea
para
cultivar
bacterias.
7
Pipetas
Para dosificar líquidos, tiene
mayor rango de exactitud
volumétricas
8
Pipeta de
succión
Utiliza en los laboratorios con
el fin de succionar un
líquido.
4.3. Ambientes laboratorio
4.3.1. Cuarto caliente
Tiene el mayor número de equipos, sirve para preparar medios de cultivo, cuenta con
mesones, gabinetes.
4.3.2. Cuarto de siembra
Debe haber una asepsia completa, sirve para hacer aislamiento, desinfección e
inoculación de ex plante y semillas.
4.3.3. Cuarto de a climatización
Es cuando la plántula se la pone en sustrato natural para que se a climatice y se adapten
a condiciones naturales.
4.3.4. Cuarto luces
Instalación de anaqueles, ambiente controlado, con asepsia para la reproducción de
tejidos vegetales. Tiene 16 horas luz y 8 horas de oscuridad.
Lugar que debe haber otro tipo de vestimenta más estricta.
V.
CONCLUSIONES


VI.



Se reconoció cada ambiente de trabajo y cada equipo y material usado en cada
cuarto de trabajo, de manera que podemos saber que tipo de materiales son
de uso delicado y cuales son de riegos.
Cada cuarto de trabajo tiene sus respectivos equipos y materiales de uso, pero
estos deben ser usados uno a la vez ya que existe interferencia entre equipos
y pueden afectar a los resultados de las practicas realizadas dentro del
laboratorio.
RECOMENDACIONES
Antes de cada práctica se debe tener en cuenta la asepsia tanto del equipo
personal como de materiales a usar.
Uso de protección en aquellos equipos en los que se emite temperatura o
radiación.
Después de concluir cada practica es esencial eliminar todo rastro de material
usado y colocarlo en lugares donde no interactúe con los ensayos realizados o
con sustancias de conserva.
VII.
BIBLIOGRAFÍA
Bibliografía
INTAGRI S.C. (2017). Obtenido de Cultivo In Vitro de Células y Tejidos Vegetal:
https://www.intagri.com/articulos/nutricion-vegetal/cultivo-in-vitro-de-celulas-y-tejidos-vegetal
LimpiezaSIL. (20 de Noviembre de 2017). Obtenido de Asepsia: ¿Qué es y por qué es importante para la
salud de las personas?: https://limpiezasil.com/asepsia/
Namur, J. (2012). MICROPROPAGACION VEGETAL. MICROPROPAGACION VEGETAL.