Καλλιέργειες
Θρεπτικά υλικά
Ταυτοποίηση των μικροβίων
Μπάκα Σταυρούλα
Αν. Καθηγήτρια
Σκοπός
Καλλιέργειες
•
•
•
•
Τεχνητά θρεπτικά υλικά
Κυτταροκαλλιέργειες
Εμβρυοφόρα αβγά κότας
Πειραματόζωα
Θρεπτικά υλικά - Κύρια συστατικά
•
•
•
•
•
•
•
•
Πεπτόνες
Εκχύλισμα κρέατος
Εκχύλισμα μυκήτων
Σάκχαρα
Άγαρ (φυτική ουσία, λειώνει 80ο C, πήζει 30ο C)
Αναγωγικές ουσίες (για αναερόβιο περιβάλλον)
Εκλεκτικές ουσίες (χρωστικές, άλατα, αντιβιοτικά)
Χρωματομετρικοί δείκτες (αλλάζουν χρώμα με τη
μεταβολή του pH)
Θρεπτικά υλικά
• Υγρά
• Ημίρρευστα
• Στερεά
• Κοινά
– Θρεπτικός ζωμός
– Θρεπτικό άγαρ
– Πεπτονούχο σακχαρούχο νερό
• Ειδικά
–
–
–
–
Εκλεκτικά
Εμπλουτισμένα
Διαχωριστικά
Συντηρητικά
Θρεπτικά υλικά - Αποστείρωση
• Με θερμότητα: αυτόκλειστο
(κλίβανος υγρής
αποστείρωσης: 121ο C, 2 atm, 15-20 min)
• Με διήθηση
• Διαμοιρασμός σε τρυβλία
• Σπορά
Differential Culture Media and Characteristics
IMPORTANT
INGREDIENTS
PURPOSE AND DIFFERENTIAL INGREDIENTS
Manitol-Salt Agar
(MSA)
7.5% NaCl (750g/l)
Mannitol
Neutral Red
Purpose: Selective isolation of Staphylococcus species and preliminary identification
of pathogenic species by fermentation of mannitol (pink-to-yellow color change with
acid production).
Inhibitor: High sodium chloride concentration inhibits many types of bacteria.
Carbohydrate Source: Mannitol
pH Indicator: Phenol Red
Salmonella-Shigella
agar (SS Agar)
Bile salt (8.5g/l)
Sodium citrate
(8.5g/l)
Brilliant green
Sodium thiosulfate
Ferric citrate
Lactose
Neutral Red
Purpose: Inhibits the growth of coliform organisms & permits the growth of
Salmonella & Shigella species from clinical specimens.
Inhibitor: High Bile Salt concentration & Sodium Citrate inhibit all G+ bacteria and
many Gram- bacteria. bacteria and many Gram- bacteria
Carbohydrate Source: Lactose
pH Indicator: Neutral Red
Bile salt (1.5g/l)
Crystal violet
Lactose
Neutral Red
Purpose: Recover the Enterobacteriaceae & related enteric Gram-negative bacilli.
Inhibitor: Bile salt & Crystal Violet. Inhibit the growth of Gram-positive bacteria and
some fastidious Gram-negative bacteria.
Carbohydrate Source: Lactose
pH Indicator: Neutral Red
Eosin Y
Methylene-Blue
Lactose
Purpose: Isolation & detection of the Enterobacteriaceae or related coliform bacilli
from specimens with mixed bacteria.
Inhibitor: Eosin & methylene blue. Inhibits the growth of Gram-positive bacteria and
some fastidious G- organisms
Carbohydrate Source: Lactose
pH Indicator: Eosin & methylene blue combine to form a precipitate at acidic pH.
MEDIUM
Primary Isolation
Media (Inhibitory).
MacConkey agar
(MAC)
Eosin-MethyleneBlue Agar
(EMB)
Incubate the plate at 37oC for 24-48 hours.
MATERIALS:
Sterile cotton swab
Bacteriological loop
Nutrient Agar plates
Biohazard discard container
Μακροσκοπική εμφάνιση αποικιών
•
•
•
•
•
•
•
•
Μέγεθος
Σχήμα
Ύψος
Χρώμα
Περιφέρεια
Σύσταση (π.χ. βλεννώδης)
Όψη
Μεταβολές στο θρεπτικό υλικό
Δοκιμασία καταλάσης
Δοκιμασία κοαγκουλάσης
PRESUMPTIVE TESTS FOR GROUP B STREPTOCOCCI
The CAMP Test
PRINCIPLE:
The hemolytic activity of staphylococcal-hemolysin on RBC is enhanced by an extracellular factor produced by Group
B streptococci, called the CAMP factor. Therefore, wherever the two reactants overlap in sheep BAP, an accentuation
of the ß-hemolytic reaction will be noted.
PROCEDURE:
The CAMP test is performed by making a single streak of the streptococcus perpendicular to a strain of
Staphylococcus aureus that is known to produce ß-hemolysin. The two streak lines must not touch one another. The
inoculated plate must be incubated with an ambient atmosphere (room temperature). The plate should not be
incubated in an anaerobic environment because many Group A streptococci are positive in the absence of O 2.
Positive control: S. agalactiae.
S. pyogenes – bacitracin sensitive
S. pneumoniae – optochin sensitive
S. mitis – optochin resistant
Mac Conkey agar
Lipase
Oxidase
Βιοχημικές δοκιμασίες
Urease
Motility agar
(left=immotile)
SIMPLIFIED FLOW DIAGRAM FOR GRAM-NEGATIVE RODS
Θρεπτικά υλικά αναερόβιων βακτηρίων
• Εμπλουτιστικά
• Μη εκλεκτικά
• Εκλεκτικά
• Διαφοροποιητικά
Brucella Blood Agar
Ζωμός (Broth)
API System
Αυτοματοποιημένα συστήματα