南台科技大學
生物科技系
學生專題
擴展核多角體病毒寄主範圍之研究
專題生: 495h0041 黃柏維
指導教授:李松泰
中
華
民
國
九
十
九
年
五
月
摘
要
本研究主要將利用體外基因重組策略，試圖篩選出能感染豆莢螟細胞株
NTU-MV 的 AcMNPV，或能感染 SF-9 細胞株的 MaviMNPV，提供進ㄧ步研究
基因重組病毒的技術平台。以六種組合之苜蓿夜蛾核多角體病毒 AcMNPV-C6 與
水母綠螢光基因(EGFP)重組的豆莢螟核多角體病毒 MaviMNPV-EGFP，一起感染
NTU-MV 細胞（非 AcMNPV 的寄主細胞）
，來探討產生類似重組病毒 AcMNPV-R
的可能形成原因。試驗結果六種組合的感染，皆觀察到在 NTU-MV 細胞內有病
毒封埋體的產生，這表示兩株病毒可能有發生基因重組的現象。可進ㄧ步探討
重組病毒基因體的變化，與發生基因重組的位置。
目
錄
一、前
言.............................................................................................................. 3
二、文獻探討................................................................................................................ 5
2.1 昆蟲桿狀病毒之構造..................................................................................... 5
2.2 昆蟲桿狀病毒生活史..................................................................................... 5
2.3 昆蟲桿狀病毒之分類..................................................................................... 7
2.4 豆莢螟之簡介................................................................................................. 8
2.5 豆莢螟核多角體病毒（MaviMNPV）......................................................... 9
2.6 豆莢螟核多角體病毒（MaviMNPV）之基因研究..................................... 9
三、材料與方法.......................................................................................................... 10
3.1 昆蟲細胞與培養........................................................................................... 10
3.2 病毒............................................................................................................... 10
3.3 病毒的定量................................................................................................... 10
3.4 AcMNPV 與 MaviMNPV 病毒之自然基因重組......................................... 11
四、結果與討論.......................................................................................................... 13
五、參考文獻.............................................................................................................. 16
一、前
言
台灣地處亞熱帶，農作物病蟲害滋生嚴重。農民為了防治害蟲對農作物的危害，
使用大量的化學性殺蟲劑。但大量化學農藥的使用會造成日益嚴重的農藥殘留、
污染土地水源、破壞生態平衡及害蟲產生抗藥性與再猖獗等問題。此如何減少使
用化學農藥，以符合人類對安全健康的農產品及無水源空氣污染之環境的需求，
成為日益受到大家重視的問題，因此生物農藥的研發已成為世界性之趨勢。桿狀
病毒是一群感染節肢動物的專一性病毒，昆蟲是其主要的寄主。從 1950 年代開
始，就有以昆蟲桿狀病毒做為殺蟲劑之報導。且在確認這種病毒不會感染非節肢
動物及造成人類任何病原性後，1973 年世界衛生組織即批准成為有效防治農作
物害蟲的微生物製劑。因此開發昆蟲桿狀病毒（尤其是核多角體病毒）作為生物
性殺蟲劑，在生物農藥發展趨勢中深具潛力。雖然寄主專一性是昆蟲桿狀病毒的
優點，但這也是它們的缺點。因為一種作物上常常會有多種害蟲同時危害，昆蟲
桿狀病毒的專一性使它們無法同時防治多種害蟲，降低農民使用的意願。加州苜
蓿夜蛾核多角體病毒（Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus 簡稱
AcMNPV）是目前所知唯一較廣譜性的昆蟲桿狀病毒，它可以感染擬尺蠖、小菜
蛾及甜菜夜蛾。Lee 等人於 2007 分離得到豆莢螟核多角體病毒(Maruca vitrata
multiple nuclear polyhedrosis virus, MaviMNPV)（Lee et al., 2007）
，其基因體經過
定序及分析，結果發現它擁有的基因與 AcMNPV 有 100％的相似性（Chen et al.,
2007），但兩者的寄主範圍昆蟲卻截然不同。本研究將利用體外自然基因重組策
略，試圖篩選出寄主範圍擴展到豆莢螟的 AcMNPV，或是寄主範圍擴展到擬尺
蠖、小菜蛾或甜菜夜蛾的 MaviMNPV。並希望建立一個有限度擴展一種昆蟲桿
狀病毒寄主範圍的技術平台，來提升昆蟲桿狀病毒的實用性，達到減少化學農藥
大量使的目的。
4
二、文獻探討
2.1 昆蟲桿狀病毒之構造
桿狀病毒是具有被膜(envelope) 的雙股 DNA 病毒（Burgess, 1977）
。它的核
蛋白鞘（nucleocapsid）是由鞘蛋白（capsid protein）所形成的蛋白質外鞘（capsid）
，
及裡面由 DNA 與蛋白質所形成的核心組成。此 DNA 與蛋白質核心，含有一個
80~180kb 之環狀雙股 DNA 基因體及某些蛋白質。核蛋白鞘呈桿狀，大小為 30-60
X 250-300nm（Harrap, 1972；Summers and Anderson, 1972; Tweeten et al., 1980）。
在核蛋白鞘外再覆以被膜而成為病毒粒子（virus particles or virions）。但有二種
不同形態的病毒粒子，會在生活史中不同時期產生（Blissard and Rohrmann,
1990）。一種是感染初期以出芽方式產生的病毒粒子稱為胞外病毒（extracellular
virus 簡稱 ECV）
，又稱為 budded virus（BV）或 nonoccluded virus（NOV）
。另
一種是感染末期留在細胞內被包裹在包含體（occlusion body 或 inclusion body 又
稱為 polyhedron）內的病毒粒子，被稱為封埋體病毒（Occluded virus 簡稱為 OV）
。
包含體是由多角體蛋白(polyhedrin)所形成的結晶構造，具有保護病毒粒子的功
能。
2.2 昆蟲桿狀病毒生活史
在自然環境中，昆蟲因食入桿狀病毒之包含體而受感染。在昆蟲中腸鹼性環
境（pH9.0～11.5）及酵素作用下，包含體被溶解釋出病毒粒子 (Harrap and
Longworth 1974)。此病毒粒子藉其被膜與昆蟲中腸上皮層細胞（epithelial
cells）
的微絨毛（microvilli）膜融合，使核蛋白鞘進入細胞（Granados and Williams,
1986），此為桿狀病毒生活史中的初級感染(primary infection)。核蛋白鞘進入細
胞後釋出病毒基因體進入細胞核，開始早期基因（early gene）的表現。早期基
5
因的表現是以寄主細胞的 RNA polymerase II 進行轉錄作用，合成病毒複製 DNA
及晚期（late）最晚期（very late）基因表現時所需的蛋白質。晚期基因在 DNA
複製時開始表現，且利用病毒自己的 RNA polymerase 進行轉錄作用（Hoh and
Weaver 1990）
，其產物主要是病毒的構造蛋白。一般在感染後 8 小時後，即有核
蛋白鞘在細胞核內產生。此核蛋白鞘以出芽方式釋出時，以寄主細胞之細胞膜被
覆在病毒粒子外面成為病毒粒子的被膜，此病毒粒子即為胞外病毒。被覆在胞外
病毒粒子的被膜雖然是來自感染細胞的細胞膜，但是上面含有病毒基因表現製造
的病毒蛋白質如 gp64（Volkman et al., 1984）
。胞外病毒的被膜呈疏鬆狀，且一個
被膜內只含一個核蛋白鞘，在病毒粒子的一端具膨大結構稱為 peplomers。胞外
病毒由中腸細胞釋出穿過基底層到達血液中，藉由血液循環或經由氣管系統散佈
至蟲體各處(Keddie et al. 1989,Engelhard et al. 1994)，以胞吞作用（endocytosis）
方式感染進入昆蟲其它組織器官細胞如脂肪體、血球、肌肉，造成全身性感染，
此為桿狀病毒生活史中的次級感染(secondary infection)。病毒在各個受感染細胞
內進行基因表現、複製基因體、合成病毒的外鞘蛋白。在感染末期，最晚期基因
即多角體蛋白基因及 P10 基因大量表現時，寄主細胞的基因以及大部分病毒早期
基因的表現都被抑制，此時可以發現到細胞核變大的現象，呈透明狀的構造稱為
virogenic stroma 出現在細胞內。組裝完成的病毒核蛋白鞘大量聚集於細胞核內，
並覆以在核中組成的被膜形成病毒粒子，且包裹於包含體內。因此，這種病毒被
稱為封埋體病毒（occluded virus 簡稱為 OV）。罹病的幼蟲會往上爬行，當身體
組織被病毒大量繁殖後呈液化現象，也造成蟲體死亡(Miller, 1997)。在昆蟲死亡
後，包含體病毒能散佈到環境中，並受到包含體的保護，可忍受不良環境因子如
紫外線，乾燥氣候等的破壞（Kelly, 1982; Bilimoria, 1986; Blizzard and Rohrmann,
1990）。桿狀病毒因為生活史中產生的病毒粒子具有這兩種不同的型態，所以其
生活史被稱為雙相複製生活史(biphasic replication cycle)。
6
2.3 昆蟲桿狀病毒之分類
早 年 桿 狀 病 毒 科 （ Baculoviridae ） 在 分 類 上 只 有 一 個 桿 狀 病 毒 屬
（ Baculovirus ）， 屬 下 有 三 個 亞 屬 ： 第 一 個 亞 屬 為 核 多 角 體 病 毒 （ nuclear
polyhedrosis virus 簡稱 NPV）。第二個亞屬為顆粒體病毒（granulosis virus 簡稱
GV）
，此兩個亞屬皆能形成包含體。第三個亞屬則是由缺乏多角體蛋白基因，不
能形成包含的桿狀病毒成員所組成，稱為無包含體病毒（nonoccluded virus 稱稱
NOV）
（Bilimoria, 1986）
，然此處所稱的 NOV 與胞外病毒的簡稱 NOV 意義不同。
1991 年 Wilson 將桿狀病毒科分為真桿狀病毒亞科（Eubaculovirinae）及裸桿狀
病毒亞科（Nudibaculo- virinae）。真桿狀病毒亞科包括能形包含體的核多角體病
毒屬及顆粒體病毒屬，裸桿狀病毒亞科只有無包含體桿狀病毒屬。今日病毒分
類已將裸桿狀病毒自桿狀病毒科分離出來，成為一群尚未定位的病毒
（2005
）
。因此，目前桿狀病毒科是依其包含體的組成與結構之不同，分為
兩個屬：即核多角體病毒
(nucleopolyhedrovirus NPV) 和 顆 粒 體 病 毒
(granulovirus GV)。核多角體病毒依病毒粒子內的核蛋白鞘數目可分為單核多
角體病毒(single envelope nuclocapsid NPV，SNPV)與繁核多角體病毒(multiple
envelope nuclocapsid NPV， MNPV)。SNPV 在每個病毒粒子的被膜內只包裹
一個核蛋白鞘；而 MNPV 在每個病毒粒子的被膜內則包裹著多個核蛋白鞘。
核多角體病毒的包含體是由多角體蛋白(polyhedrin)組成，多角體蛋白大小約
為 25~31 kDa，結晶時呈多角型。核多角體病毒又依據一個細胞內可產生包含
體數量的多寡分成眾多角體型(multiple polyhedra type, 簡稱 M type)及寡多角
體型(few polyhedra type, 簡稱 F type)。M type 的核多角體病毒在每個細胞內
可產生超過十個以上的包含體；而 F type 的核多角體病毒在每個細胞內產生
的包含體數量都在十個以下。顆粒體病毒在每個細胞內只產生少數包含體，
而每個包含體內通常也只含一個病毒粒子，裡面內只有一個核蛋白鞘，而且
只有在鱗翅目昆蟲 有發現 (Blizzard and Rohrmann ， 1990；Winstanley and
7
O’Reilly, 1999)。顆粒體病毒之包含體是由顆粒體蛋白(granulin)所組成，此蛋
白的大小約為 25~30kDa，會形成顆粒狀的包含體結晶。桿狀病毒的包含體有
助於病毒對抗惡劣環境，如紫外線、乾燥及其他化學因子(Wang， 1995)，並
能持續地維持感染力。
根據多角體蛋白單一基因序列的分析，可將感染鱗翅目昆蟲的核多角體病毒
分成 Group I 與 Group II 兩群(Bulach et al. 1999；Zanotto et al. 1993)。另外，胞
外病毒進行胞吞作用時，病毒粒子被膜上的融合蛋白(fusion protein)扮演重要的
功能。若以融合蛋白的型式作為區分依據時，所得結果也與上述的分類情形具有
一致性(Pearson and Rohrmann, 2002)。Group I NPVs 的套膜上具有 GP64 融合蛋
白，而 Group II NPVs 則不具有相似 gp64 的基因(Pearson et al. 2002)。最近研究
學者比對多種昆蟲桿狀病毒基因序列，提出演化上桿狀病毒可分成四個主要類
群：分別是感染鱗翅目的 NPV、感染鱗翅目的 GV、感染膜翅目的桿狀病毒及感
染雙翅目的桿狀病毒(Okano et al. 2006)。
2.4 豆莢螟之簡介
豆莢螟 (Maruca vitrata) 屬鱗翅目螟蛾科 (Lepidoptera: Pyralidae)，主要分佈
於亞洲、太平洋上許多小島及非洲（Barrion et al., 1987；Booker, 1963）
，Heppner
and Inoue（1992）(認為分佈於台灣之豆莢螟應為 M. vitrata （Fabricius, 1787）。
豆莢螟之寄主植物包括豆科、胡麻科、含羞草科、蘇木科及錦葵科等 5 科 20 屬
40 種作物（Akinfenwa, 1975; Ke et al., 1985; Taylor, 1978）。在 1994 年，嘉南地
區首先發現田菁遭受到豆莢螟嚴重危害，此種新寄主植物，為該地區稻田休耕期
間或第一期水稻休耕後，所種植的綠肥植物，由於豆莢螟的危害會對田菁有減產
的效果，因此，豆莢螟可視為田菁綠肥植物之害蟲，此外豆莢螟可在田菁與豆科
植物之間來回遷移，使的在田菁上豆莢螟成為豆科植物害蟲之蟲源。田菁植物上
常見害蟲種類出現於 5 至 12 月間，包括有豆莢螟、粗腳姬捲葉蛾、波紋小灰蝶、
擬尺蠖、綠椿象、臺灣青銅金龜、赤腳銅金龜、小綠葉蟬、黑豆蚜、豆花薊馬等
10 種，為害植株端梢嫰小葉、莖及花器，其中以豆莢螟為害最為嚴重。
8
2.5 豆莢螟核多角體病毒（MaviMNPV）
MaviMNPV 是在 2004 年在田間中的豆科植物發現受到桿狀病毒感染的豆莢
螟幼蟲中純化出來，之後經（Lee et al.,2007）等人進行封埋體及病毒基因體純化，
成功的獲得病毒，經電子顯微鏡觀察研究發現其每單一封埋體中含有的病毒粒子
數量平均為 10.9（最多到達 19 個）
，且在每個病毒粒子中可以發現核蛋白外鞘最
多可以到達 6 個被包裹在同一個被膜裡面，封埋體直徑約為 0.9 到 1.3μm 平均
1.152±0.116μm，經過分析 polyhedrin 基因及限制核酸酶電泳圖譜分析判斷是一
種核多角體病毒 (Lee et al.,2007)。
2.6 豆莢螟核多角體病毒（MaviMNPV）之基因研究
在 2006 年 MaviMNPV 基因體已解序，知道大小為 111953 bp，G＋C 比例
為 39％，含有 126 個 ORFs（open readinging frames）預測蛋白質超過 50aa，經
由演化樹分析知道 MaviMNPV 是屬於 group I NPV，且比 AcMNPV 和 BmMNPV
演化的分歧點要早。與 AcMNPV 在基因體有高度的相似性，且部份同源性基因
相似度達 100％，MaviMNPV 基因體中有五個 homologous region（hrs）
，全部有
44 個不完全迴文，但缺乏 vfgf 和 odv-e66 兩個鱗翅目桿狀病毒的保留性基因，
除此之外也缺乏重複的 bro 基因，此基因相似於 AcMNPV 的 ORF2，可以說
MaviMNPV 是一個小型的 AcMNPV（Chen et al.,2008）。
9
三、材料與方法
3.1 昆蟲細胞與培養
SF-9 細胞是一株由秋行軍蟲(Spodoptera frugiperda)卵巢組織建立起來的細
胞株，常被用來作為加州苜蓿核多角體病毒體外培養的宿主細胞。此細胞株是由
食品工業發展研究院所購得(菌種編號 CCRC60011 )，以添加 10%胎牛血清 (FBS)
的 TC-100 培養液培養於 26℃培養箱 (MEMMERT/GERMANY, Model : IPP 400)
中，每隔 2~3 天需繼代培養一次。
NTU-MV 細胞株是由國立台灣大學王重雄教授與本系李松泰老師等人，從
豆莢螟(Maruca virtrata)的蛹體組織所建立出來的。培養於添加 10%胎牛血清
(FBS) 的 TC-100 培養液中，置於 26℃培養箱中培養，每隔 2~3 天繼代培養一次。
3.2 病毒
本實驗使用之 AcMNPV-C6 是國外的加州苜蓿夜蛾核多角體病毒，是由中
央研究院分生所 521 實驗室趙裕展老師提供。而 MaviMNPV ，是本系李松泰老
師於田野間的田菁植物中發現受此病毒所感染之豆莢螟幼蟲，由蟲體中所分離純
化而得。
3.3 病毒的定量
取一 96 well 細胞培養盤，在每個 well 中貼入 2*104 個細胞，然後置入 26
℃ 培養箱中，培養 1 天。
將病毒液作序列稀釋，取八個微離心管分別加入
medium ，然後取
的無血清 TC-100
的病毒液加入第 1 個微離心管中，經充分混合後，在
10
第 1 個微離心管中取
至第 2 個微離心管中，依序稀釋至第 8 管微離心管，
此時病毒液之濃度為 10-1~10-8 倍。
然後把已貼好細胞的 96 well 細胞培養盤中的培養液吸乾，在於 96 well 盤
之每一橫排中，加入
的序列稀釋病毒液(AcMNPV-C6 感染 SF-9 細胞；
MaviMNPV 感染 NTU-MV 細胞)，置於擺動式混合器(YOUNG CHENN, Model：
SC-30)上，在室溫中進行搖晃感染 2 個小時後，在加入含 10%胎牛血清 (FBS) 的
TC-100 培養液至
，在放置於 26℃ 培養箱中培養 5~6 天，並以顯微鏡觀
察每個 well 中的感染情況，計算出病毒校價。
3.4 AcMNPV 與 MaviMNPV 病毒之自然基因重組
以野生型的 AcMNPV 與帶有水母綠螢光基因(EGFP)但是缺乏核多角
體蛋白基因(polyhedron) 的重組 MaviMNPV(簡稱為 MaviMNPV-EGFP)，一起感
染 Mavi MNPV 的寄主細胞 NTU-MV。因為的重組 MaviMNPV-EGFP 已經沒有
核多角體蛋白基因，若觀察到有病毒封埋體的產生，即表示這兩株病毒有重組的
可能性。產生的重組病毒可能是部分 MaviMNPV 的基因片段取代 AcMNPV
的某些基因，使重組的 AcMNPV 能在 NTU-MV 細胞完成生活史；另ㄧ種可能性
是 MaviMNPV-EGFP 將野生型 AcMNPV 的核多角體蛋白基因重組進入來其基因
體。反之以野生型的 MaviMNPV 與帶有水母綠螢光基因(EGFP)但是缺乏核多角
體蛋白基因(polyhedron) 的重組 AcMNPV (簡稱為 AcMNPV-EGFP)，一起感染
AcMNPV 的寄主細胞 SF-9。若觀察到有病毒封埋體的產生，亦可能表示這兩株
病毒有重組的可能性。我將以下列六組 AcMNPV 與 MaviMNPV 混合感染的組
合，感染 NTU-MV 細胞。
11
組別
混合的量病毒液濃度
1
MaviMNPV-EGFP (moi=0.1 ) + AcMNPV-C6 (moi=0.1 )
2
MaviMNPV-EGFP (moi=0.1 ) + AcMNPV-C6 (moi=1)
3
MaviMNPV-EGFP (moi=0.1 ) + AcMNPV-C6 (moi=10)
4
MaviMNPV-EGFP (moi=1) + AcMNPV-C6 (moi=0.1)
5
MaviMNPV-EGFP (moi=1) + AcMNPV-C6 (moi=1)
6
MaviMNPV-EGFP (moi=1) + AcMNPV-C6 (moi=10)
取一 24 well 細胞培養盤，在每個 well 中貼入 3 X105 個 NTU-MV
cell ，放置至 26℃ 培養箱中培養 1 天。再將算出病毒校價的病毒液，進行兩種
病毒液的混合，總共如上表所示的有六種組合。再把製備好的病毒液，各取 200
l 依序加入 24 well 盤中，作 4 重複試驗。在將 24 well 盤，置於擺動式混合器
上，在室溫中進行搖晃感染 2 個小時後，在加入含 10%胎牛血清 (FBS) 的 TC-100
培養液至 500 l，放置於 26℃ 培養箱中培養，並每日觀察每 well 中的細胞變
化，看是否有封埋體的產生，若有產生則給予拍照存證。
若有封埋體的產生，則等待至細胞開始破裂時，利用 tip 以抽吸的方式使細
胞和封埋體懸浮，再個別收集全部細胞液到微離心管裡，離心 5000g、30 分鐘、
，震盪至細胞完全溶解後，置於 42℃
4℃，移除上清液後，加入
水浴槽中 2 小時，每 15 分鐘震盪(vortex)30 秒，最後以鏡檢方式觀察是否細胞完
全破裂，如沒有在加入更多 1% SDS 重複步驟直到細胞完全打破，之後加入 3 倍
體積無菌去離子水震盪混勻，離心 5000g、30 分鐘、4℃，去除上清液，再加入
適量無菌去離子水回溶，重複步驟 4~5 次將 SDS 清洗乾淨。再取
的清洗
乾淨的封埋體病毒液，利用血球計數器於 400X 光學顯微鏡下，計算出封埋體的
數量。
12
四、結果與討論
本實驗室前人研究已經知道加州苜蓿夜蛾核多角體病毒(AcMNPV)以比較
高的病毒效價，感染非寄主昆蟲豆莢螟細胞 NTU-MV，雖然可觀察到細胞病變
的現象，但無法產生病毒封埋體，顯示 AcMNPV 無法在 NTU-MV 完成正常的生
活史。相反的，以豆莢螟蛾核多角體病毒(MaviMNPV)感染非寄主細胞 SF-9，雖
然可觀察到細胞病變的現象，但亦無法產生病毒封埋體，顯示 MaviMNPV 無法
在 SF-9 細胞完成正常的生活史（李靜儀 碩士論文 2006）
。但本實驗室先前從飼
養之罹病豆莢螟幼蟲體，分離到一株可以感染 NTU-MV 細胞，但基因體限制酶
圖譜與 AcMNPV 相近的病毒。因此推測此病毒可能是豆莢螟幼蟲受到 AcMNPV
與 MaviMNPV 混合感染，經過基因重組而來，遂將此病毒命名為 AcMNPV-R。
本專題研究將利用體外基因重組策略，希望篩選出能感染豆莢螟細胞株
NTU-MV 的 AcMNPV，或能感染 SF-9 細胞株的 MaviMNPV。以野生型的
AcMNPV 與帶有水母綠螢光基因(EGFP)但是缺乏核多角體蛋白基因(polyhedron)
的重組 MaviMNPV(簡稱為 MaviMNPV-EGFP)，一起感染 Mavi MNPV 的寄主細
胞 NTU-MV。因為的重組 MaviMNPV-EGFP 已經沒有核多角體蛋白基因，若觀
察到有病毒封埋體的產生，即表示這兩株病毒有重組的可能性。產生的重組病
毒可能是部分 MaviMNPV 的基因片段取代 AcMNPV 的某些基因，使重組的
AcMNPV 能在 NTU-MV 細胞完成生活史；另ㄧ種可能性是 MaviMNPV-EGFP 將
野生型 AcMNPV 的核多角體蛋白基因重組進入其基因體。 反之 以野生型的
MaviMNPV 與 帶 有 水 母 綠 螢 光 基 因 (EGFP) 但 是 缺 乏 核 多 角 體 蛋 白 基 因
(polyhedron) 的重組 AcMNPV (簡稱為 AcMNPV-EGFP)，一起感染 AcMNPV 的
寄主細胞 SF-9。若觀察到有病毒封埋體的產生，亦可能表示這兩株病毒有重組
的可能性。
13
以六種 AcMNPV 與 MaviMNPV 混合感染的組合感染 NTU-MV 細胞，發
現在每個 well 中皆有封埋體的產生(圖一)，且當 AcMNPV-C6 的 moi 值逐漸提
升時，會有更多的封埋體產生(表一)。而且當 MaviMNPV-EGFP (螢光型) 的 moi
量提升時，封埋體的產生，有稍微的減少的趨勢，這可能是當 MaviMNPV-EGFP
( 螢 光 型 ) 的 moi 提 高 時 ， 亦 加 速 了 細 胞 因 感 染 後 ， 而 產 生 了 出 芽 病 毒
(extracellular or budded virus)後，就死亡的機率。而當 AcMNPV-C6 的 moi 值逐
漸提升時，亦促使 NTU-MV 細胞受 MaviMNPV-EGFP (螢光型) 感染後，有較高
的機率進入 NTU-MV 細胞中，與 MaviMNPV-EGFP (螢光型) 相互作用，而促使
產生封埋體，而在此時也有較大的機率產生兩者之間的基因重組，而造成重組
AcMNPV 的產生。
在接下來的研究中，我們將利用 MaviMNPV-EGFP (螢光型) moi 為 0.1 時 與
AcMNPV-C6 moi 為 10 時的病毒混合液，持續放大感染 NTU-MV Cell 並由放大
感染中，收集所得到的封埋體，再將這些封埋體經純化分離後，尋找是否有與
AcMNPV-R 相同的基因體片段，或與其功能相似但其序列不同之片段產生。並
將更進一步，利用 SF-9 cell 進行 AcMNPV-EGFP (螢光型) 與 MaviMNPV(原生
型) 的進行交互感染試驗，觀察兩者之間結果上是否會有相似的情況產生，或者
有其他的表現產生，我們將持續研究追蹤。
14
表一、、在每 well 中所含有的封埋體數量
組別
1
2
3
4
5
6
1
16
37
42
16
21
20
2
14
44
46
18
9
40
3
10
24
49
5
15
29
4
6
6
30
6
9
77
Total
46
111
167
45
54
166
重複數
圖一、在第七天所拍攝之封埋體在細胞內之情況
15
參考文獻
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